植物乳杆菌PLH1405及在制备治疗急性酒精中毒药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开一种植物乳杆菌PLH1405（

【技术实现步骤摘要】
植物乳杆菌PLH1405及在制备治疗急性酒精中毒药物中的应用
本专利技术涉及一种新菌株及用途，尤其是一种植物乳杆菌PLH1405及在制备治疗酒精中毒药物中的应用。
技术介绍
急性酒精中毒（AcuteAlcoholIntoxication）俗称醉酒，是指短时间内摄入过量的乙醇，引起的以神经精神症状为主的疾病，能在较短的时间内带给机体较大的伤害，甚至可以直接或间接导致死亡。目前，临床上针对急性酒精中毒的治疗方法多采用西医治疗，按中毒程度采用不同剂量的纳洛酮治疗，对危重病人同时还要进行迅速催吐、洗胃、补液等方法。纳洛酮治疗的主要目的是促进患者快速苏醒，解除神经中枢抑制，但是却不能解决乙醇和其有害代谢产物对机体其他器官损伤的问题。乙醇主要在胃肠道和肝脏内通过乙醇脱氢酶（ADH）代谢成乙醛，乙醛再通过乙醛脱氢酶（ALDH）代谢成乙酸，最后被氧化分解为CO2和H2O。如果机体内乙醇脱氢酶含量较低，高浓度乙醇不仅直接对肠道和肝脏产生损伤，同时还能造成肠道细菌移位，革兰氏阴性菌增多，产生大量内毒素经门静脉进入肝脏，激活肝脏枯否细胞释放大量促炎因子，增加组织炎症反应和损伤。即使乙醇脱氢酶（ADH）足够使乙醇氧化分解，乙醇氧化分解过程中还会产生大量的自由基，如抗氧化酶（例如SOD和CAT）活性较低时，过量自由基就会激活脂质过氧化反应。由于脑组织内有大量自由基氧化攻击底物-不饱和脂肪酸，因此脑就成为自由基损伤的主要器官。而当机体内乙醛脱氢酶活性较低时，没有代谢的乙醛对细胞则有强毒作用。肠道菌群与机体的健康与疾病关系密切，具有参与代谢、生物拮抗、调节免疫系统功能等作用。植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）是乳酸杆菌属下的一种，分布广泛，在很多发酵食品中很常见，最先从唾液中分离得到。研究表明植物乳杆菌能促进幼鼠生长，缓冲慢性营养不良，降低高脂饮食小鼠的体重，影响Caco-2的胆固醇平衡，参与胆固醇的代谢，预防胆固醇相关疾病的发生；对肠屏障有保护作用，可调节免疫，缓解IBD等炎症性疾病，降低小鼠肺炎感染，有效预防乳腺癌，并具有改善皮肤，抗老化等功能。但是，迄今为止还没有关于植物乳杆菌可全面促进酒精代谢，从而缓解酒精中毒的相关报道。
技术实现思路
本专利技术是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种植物乳杆菌PLH1405及在制备治疗酒精中毒药物中的应用。本专利技术的技术解决方案是：一种植物乳杆菌PLH1405（Lactobacillusplantarum），已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCCNo.12464。一种上述植物乳杆菌PLH1405在制备治疗酒精中毒药物中的应用。本专利技术的植物乳杆菌PLH1405可提高机体乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶活性，加速乙醇和乙醛的代谢，同时可增加抗氧化酶活性，减少内毒素的产生，可更好地缓解酒精中毒带来的机体损伤，作为治疗急性酒精中毒的药物。附图说明图1是本专利技术实施例醒酒时间示意图。图2是本专利技术实施例血浆酒精含量（BAC）示意图。图3是本专利技术实施例小鼠肠道状态示意图3。图4是本专利技术实施例小鼠肠道内ADH含量示意图。图5是本专利技术实施例小鼠肠组织ALDH活性示意图。图6是本专利技术实施例小鼠肠道内乙醛含量示意图。图7是本专利技术实施例小鼠肝组织ADH含量示意图。图8是本专利技术实施例小鼠肝组织ALDH含量示意图。图9是本专利技术实施例小鼠肠组织超氧化物歧化酶活性示意图。图10是本专利技术实施例小鼠肠道内LPS含量示意图。图11是本专利技术实施例小鼠肝组织超氧化物歧化酶活性示意图。图12是本专利技术实施例小鼠肝组织血清谷丙转氨酶含量示意图。图13是图9是本专利技术实施例小鼠脑组织超氧化物歧化酶活性示意图。植物乳杆菌PLH1405保藏日期：2016年5月18日；分类命名：植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号保藏号：CGMCCNo.12464。具体实施方式按照菌种的常规分离方法，从具有高乙醇代谢能力的人群粪便中筛选出植物乳杆菌PLH1405，已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCCNo.12464。实验：取雄性C57BL/6为实验鼠，随机分为对照组、酒精组、植物乳杆菌PLH1405组。各组小鼠禁食12h，期间不禁水，酒精组，植物乳杆PLH1405组均以6mg/g（用75%的酒精配成浓度为6mg/g）乙醇灌胃，对照组同体积生理盐水灌胃。30min后植物乳杆菌PLH1405组用植物乳杆菌PLH1405（菌量为2x10^9个/只）灌胃，对照组和酒精组同体积生理盐水灌胃。1.植物乳杆菌PLH1405促进小鼠血内酒精浓度下降、缩短小鼠醒酒时间及减轻肠道损伤观察小鼠从入醉到醒酒的时间（醒酒时间：从灌胃酒精失去翻正反射到恢复活动），发现与酒精组相比，植物乳杆菌PLH1405组醒酒时间显著缩短（图1）。8小时处死小鼠，内眦取血，离心，取血清，用酒精含量（BAC）检测试剂盒在酶标仪570nm下检测血浆BAC，结果显示270分钟植物乳杆菌PLH1405组血浆BAC显著低于酒精组（图2）。取胃到盲肠上端7cm，从大体观察可见，酒精组小鼠肠道严重破损，肠腔充血，植物乳杆菌PLH1405组肠道恢复完整性（图3）。实验结果表明：植物乳杆菌PLH1405可以加速酒精降解，促进小鼠醒酒，减轻肠道损伤。2.植物乳杆菌PLH1405通过促进ADH、ALDH表达，进而促进小鼠肠肝酒精代谢，加速酒精分解取十二指肠处的小肠肠粘液，用PBS稀释同时加入PMSF，离心取上清，用乙醇脱氢酶（ADH）试剂盒检测肠道ADH含量。取十二指肠组织用PBS稀释，匀浆，离心取上清，用乙醛脱氢酶（ALDH）试剂盒检测肠组织ALDH含量。肠道内取肠粘液稀释液，用乙醛检测试剂盒检测乙醛。结果显示酒精组肠道内ADH含量无明显变化，植物乳杆菌PLH1405组有升高趋势（图4）。酒精组肠组织ALDH活性显著降低，植物乳杆菌PLH1405组有升高趋势（图5）。酒精组肠道内乙醛含量增加，植物乳杆菌PLH1405组肠道乙醛含量降低（图6）。以上结果表明植物乳杆菌PLH1405通过产生ADH使酒精分解成乙醛，又通过调节菌群或刺激肠上皮细胞产生ALDH，分解乙醛成为无害的乙酸。取肝组织匀浆上清，用乙醇脱氢酶试剂盒检测肝组织ADH，用乙醛脱氢酶试剂盒检测ALDH，结果显示，植物乳杆菌PLH1405组小鼠肝内的ADH活性有升高趋势（图7），小鼠肝内的ALDH活性显著升高（图8）。肠道和肝脏的实验结果表明：植物乳杆菌PLH1405可促进ADH、ALDH的表达，促进小鼠肠肝酒精代谢，加速酒精分解，同时因促进了乙醛的分解减少了酒精代谢造成的损伤。3.植物乳杆菌PLH1405促进小鼠肠肝脑抗氧化反应酶的表达，消除自由基，降低氧化损伤处死小鼠后，取肠组织匀浆上清，用超氧化物歧化酶测定试剂盒，测定肠组织SOD；用过氧化氢酶试剂盒检测CAT；用丙二醛试剂盒检测MDA。计算数据得出：酒精组肠组织中SOD和CAT活性降低，MDA含量升高；植物乳杆菌PLH1405组肠组织中CAT活性显著升高（图9）。取小鼠肠粘液，采用LPS试本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物乳杆菌PLH1405（Lactobacillus plantarum），已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.12464。

【技术特征摘要】
1.一种植物乳杆菌PLH1405（Lactobacillusplantarum），已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微...

【专利技术属性】
技术研发人员：文姝，唐立，丁锐，宁凯婷，刘银辉，庞立园，张瑾，
申请(专利权)人：大连医科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21