一种葡聚糖制造技术

本发明专利技术涉及一种葡聚糖，尤其涉及一种抗肺癌的葡聚糖。本发明专利技术的葡聚糖其主链由右式重复结构单元构成，分子量为１５０万－２５０万道尔顿。本发明专利技术的葡聚糖主要用于制备抗肺癌的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种葡萄糖聚合物，尤其涉及一种抗肺癌用葡聚糖。
技术介绍
肺癌这种恶性肿瘤己成为威胁人类健康的头号杀手，肺癌的发病率随着环境 污染的加剧，近IO年以来以11.90%的速度上升。2000年全球恶性肿瘤新发病已 超过1000万以上，死亡620万例，其中肺癌新发病例123.9万例，占癌症总发病 例12.32%，肺癌死亡110.3万例，占总死亡人数的17.77%，均居首位。目前全球 每年有150万-180万人死于肺癌，我国肺癌危害形势更为严重，按每10万人的 83.43发病率计算。我国每年新发肺癌病人不下100万，每年死于肺癌者已达60 万之多！肺癌这种恶性肿瘤已成为威胁人类健康的头号杀手。因此，研制有效的 防治肺癌的新特药，已成为国内外医药界的当务之急，重点和热点。当前治疗肺癌的方法与相关药品都存在一定的局限性,如治疗肺癌传统的方 法有手术切除、放射治疗和化疗(药物治疗)。但一旦经临床确诊为肺癌，80%的 病人就失去了手术切除的机会；而放射治疗存在局部的限制性和射线对正常组织 的损伤性；化学(药物)治疗存在普遍性细胞毒性作用及其剂量的限制性；特别 对肝、肾、骨髓和消化系统毒副作用严重，大大制约了肺癌的治疗效果。新兴的 介入治疗对原发灶有一定的作用，但难以对付不断散发的转移灶；现代分子靶向 性(基因)治疗给肺癌患者带来曙光，但其载体构建、载体与弹头的交链及其在 机体分布、代谢过程中的变化等诸多问题还在探讨之中。本专利技术人先前有研究说明，蛞蝓P E - 4 0糖蛋白对小细胞肺癌和非小细胞肺癌 细胞均有直接抑制作用和对化疗药物如DDP和5-FU以及细胞因子TNF-a有增效 作用，而且无明显毒副作用；总体效应优于其他中药，但由于含有蛋白质成份， 存在致敏和稳定性难以质控的问题，在一定程度上限制了适应范围。本专利技术旨在进一步地，在对肺癌有效的蛞蝓糖蛋白基础上，除去蛋白质，提取多糖，并保持 药效不减。蛞蝓多糖是通过干扰癌细胞内DNA和RNA的正常代谢以及促进癌细 胞凋亡、阻抑癌灶滋养血管生长的机制来实现治疗效果的。现在更进一步地，通过高通量细胞活性筛选技术，确定了上述蛞蝓多糖中最 佳活性蛞蝓粗多糖组分(KY—1)。并明确了 KY—1中的成分之一的蛞蝓葡聚糖 (KY—1一1)的分子结构。
技术实现思路
本专利技术的葡聚糖的主链由下述重复结构单元构成，分子量为150万一250万 道尔顿的葡聚糖。本专利技术的葡聚糖，它是从蛞蝓中提取出来的。先前有研究，从蛞蝓提取蛞蝓糖蛋白PE-40，所述糖蛋白不仅对小细胞肺癌 和非小细胞肺癌细胞均有直接抑制作用和对多种化疗药物如DDP和5-FU，以及 细胞因子TNF-a，有增效减毒作用，总体效应优于其他中药，但由于含有蛋白质 成份，存在致敏性难以质控的问题，在一定程度上限制了适用的范围。为了解决 这一问题，后又在蛞蝓糖蛋白的基础上，除去蛋白质，提取多糖，并保持药效不 减。此时的蛞蝓多糖是一种含有多种多糖的混合多糖(粗多糖)，该多粗糖可以 通过干扰癌细胞内DNA和RNA的TH常代谢以及促进癌细胞凋亡、阻抑癌灶滋养 血管生长的机制来达到治疗的效果。本专利技术为了进一步研究l:述混合多糖的药用 机理和作用效果，从混合多糖(粗多糖)中进一步分离出来各种组分如KY-1、 KY-2和KY-3等，进一步的从K丫-1中又分离出来KY-1-1和KY-1-2，经实验验 证本专利技术申请保护的多糖组分(KY-1-1)是目前研究获得的具有最佳的活性和药用效果的KY-1中的其中一个均一组分，并通过科学的实验方法，确定了KY-1-1分子结构是一种葡聚糖。本专利技术的葡聚糖主要用于制备抗肺癌药物。本专利技术的葡聚糖再添加药学上可 接受的药物辅料，可以制成各种形式的抗肺癌药物。如冻干粉针剂、注射剂、片 剂、胶囊剂等等常见剂型。本专利技术的葡聚糖(KY-1-1)的制备方法包括，粗多糖的提取和粗多糖的分离 纯化两个主要过程。粗多糖是通过醇沉和三氯乙酸脱蛋白及其透析等工艺而制备 得到的。其具体的确认过程将在下面的实施例中详细说明。本专利技术的葡聚糖是目前研究发现的蛞蝓粗多糖中活性最强部位的其中一种的 均一多糖，是目前抗肺癌效果最好的组分之一。本专利技术确定了该葡聚糖的分子结 构为以后药物合成和药理药效深入研究奠定了基础。以下将结合附图详细介绍本专利技术的葡聚糖的制备方法、分子结构确定和药效 学研究。附图说明图1是葡聚糖分子量与保留时间关系式的标准曲线；图2是水相组分经层析系统(S-1000)分离得到两种组分的HPLC图3是组分KY-1再经S-400凝胶柱分离得到两种组分的HPLC图4是组分KY-1-1的HPLC检测结果图5是组分KY-l-2的HPLC检测结果图6是组分KY-2的HPLC检测结果图7是组分KY-1-1的紫外全扫描图8是标准糖样中单糖的气相色谱图9是组分KY-1-1的气相色谱图10是组分KY-1-1甲基化后的总离子流图11是保留时间为3.44 min的质谱图12是27'C时KY-1-1的1H核磁共振图谱；图13是27。C时KY-1-1的13C核磁共振图谱；图14是27。C时KY-1-1的13C DEPT-135的核磁共振图谱；图15是KY-1-1的^-'H COSY核磁共振图谱；图16是KY-1-1的TOCSY核磁共振图谱；图17是KY-1-1的HMQC部分核磁共振图谱；图18是KY-1-1的HMBC核磁共振图谱；图19是KY-1-1的NOESY部分核磁共振图谱。具体实施例方式本专利技术提供的葡聚糖是从蛞蝓体内提取出来的，实验证明其具有很好的抗肺 癌作用。以下详细介绍本专利技术葡聚糖的提取方法、结构确认和疗效验证。 一、本专利技术葡聚糖的制备方法1. 粗多糖的提取材料高突足襞蛞蝓全虫(Vaginulus alte Ferussac,1821)，隶属软体动物门、 腹足纲、肺螺亚纲、柄眼目、足襞蛞愉蝓科、足襞蛞蝓属。称取鲜蛞蝓(1604g)加入1000 mL水、匀桨、离心6000 r/min， 15 min，得 上清液，残渣反复如上操作，最后上清液合并，浓縮，得上清液1000 mL，然后 往合并的上清液中加入乙醇，调最终浓度为60%，静置过夜，离心，得沉淀，冷 冻干燥，得鲜蛞蝓粗提物(40g，得率2.5%，多糖含量16.9%)。将以上鲜蛞蝓粗提物加水溶解，按照体积比1:10的30%的三氯乙酸混匀 15min后，静置30min，离心，弃渣，得上清液，用自来水，蒸馏水，流动透析 (截流分子量为1万Dalton的膜)，浓縮，冷冻干燥，得蛞蝓粗多糖(24g，得 率1.5%，多糖含量19.8%)。经药理活性筛选，此蛞蝓粗多糖组分是最有效组分。2、 粗多糖的分离纯化将冷冻的粗多糖在室温下缓慢溶解，离心(12000 r/min， 10min)去除沉淀。 上清液透析、脱三氯乙酸(1000D透析袋)，将截留液上离子交换柱，蒸馏水洗脱得水相组分，浓縮后经凝胶 柱(S-1000)分离可接收到两种组分，分别命名为KY-1和KY-2。随后，将KY-1 经凝胶柱(S-400)继续分离可得到另外两种组分，分别命名为KY-1-1和KY-l-2。其中KY-1-1则为本专利技术的葡聚糖。二、本专利技术提取物中葡聚糖的结构确认1. 纯度检测及多糖分子量的测定(1) 葡聚糖标准曲线称取Dextran本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种主链由下述重复结构单元构成，分子量为１５０万－２５０万道尔顿的葡聚糖。　　　　＊＊＊。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢金魁，张安强，曹建国，
申请(专利权)人：广州康采恩医药有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]