β-葡聚糖GFPBW1及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种具有如下所示的结构式的β-葡聚糖GFPBW1、其制备方法以及该β-葡聚糖在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。本发明专利技术所述的β-葡聚糖GFPBW1可以利用一种简单有效的多糖提取工艺和方法，从蕈菌灰树花中分离提取以及纯化而得到。药理实验表明GFPBW1能通过Dectin-1受体激活原代巨噬细胞释放细胞因子，而体内抗肿瘤实验也进一步表明GFPBW1具有免疫调节功能及相应的抗肿瘤活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及真菌提取多糖，更具体地说，涉及一种从灰树花中提取得到的β-葡聚糖GFPBWl、其制备方法以及该β-葡聚糖在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
技术介绍
灰树花(Grifola frondosa (Fr. ) S. F. Gray)(又名舞鸾)是药、食兼用蕈菌,属担子菌亚门层菌纲目多孔菌科树花菌属。野生的灰树花主要产于日本，野生的灰树花在封建社会时期的日本民间主要是由于其极佳的美味而用于烹调食材，直到上世纪八十年代，它的药用价值才逐渐被日本学者所研究和发现。灰树花提取物具有治疗AIDS、糖尿病、高血压等功能，而其中最主要的是其多糖具有通过增强免疫系统来达到抗肿瘤的作用。由于多糖是极性大分子化合物，酸性条件下能引起多糖苷链的断裂。它的提取分离十分复杂，大多采用沸水、碱溶液提取。提取液中的游离蛋白质主要用Sevage法、三氟乙酸法和三氟三氯乙烷法等三种方法去除。小分子杂质可用透析法除去。多糖的纯化方法很多，有分布沉淀法、盐析法、金属络合法、季铵盐沉淀法。DEAE-纤维素法和其他各种不同类型的凝胶柱层析法等，并采用硫酸-苯酚法等比色方法来测定多糖。多糖最主要的功能是免疫调节功能。其中作为真菌细胞壁组分的葡聚糖作为一种典型的生物反应调节剂(BRM)，同时又作为一种病原相关分子模式(PAMP)，进入人体后，能够被免疫细胞表面的模式识别受体(PRRs)所识别而激活信号传导，并最终促进巨噬细胞、NK细胞、中性粒细胞以及CTL细胞的活化和增殖，从而实现对肿瘤细胞的细胞免疫清除。同时多糖还能通 过诱导释放细胞因子(如TNF-α)以及激活补体系统而对肿瘤细胞进行体液免疫清除。目前发现的识别葡聚糖的PRRs包括Dectin-1、补体受体3(CR3)、清道夫受体(Sc)、乳糖基神经酰胺受体(LacCer)以及Toll样受体(TLRs)等，其中Dectin-1受体在β -葡聚糖的免疫调节过程中是最重要的受体。Dectin-1作为巨噬细胞的主要葡聚糖受体，在小鼠体内腹腔注射Dectin-1中和抗体后再给β _葡聚糖，结果表明β_葡聚糖的抗肿瘤效果大大降低甚至完全消失。而Dectin-1基因敲除小鼠也完全阻断巨噬细胞对真菌的免疫反应以及葡聚糖诱导的TNF-α等细胞因子的释放。Dectin-1作为一个II型跨膜C型凝集素受体家族成员，β -葡聚糖结合Dectin-1受体后通过几条信号通路激活内吞，活性氧(ROS)产生，诱导细胞因子表达。其中主要一条信号通路是Dectin-1在结合配体后，细胞质内结构域中的酪氨酸被Src激酶磷酸化后，招募Syk激酶结合和活化，然后激活CARD9-BCL10-MALT1复合物，并进一步诱导激活NF- κ B转录表达IL-2，TNF_a等细胞因子。同时，Dectin-1还能不依赖Syk的参与而行使巨噬细胞的吞噬功能以及依赖Syk的ROS释放。恶性肿瘤，也称癌症，是一种严重威胁人类健康的疾病，根据世界卫生组织WHO的统计,全球每年癌症患者的死亡人数高达六千万,继心血管疾病、传染性和寄生虫病之后位居第三位，并且在2015年将屈居第二。对于癌症的治疗主要采用手术、放疗以及化疗。对癌症患者的化疗由于目前临床上使用的烷化剂、抗代谢、抗生素等药物的作用靶点在正常的细胞中也表达，靶向性不强，因而造成了很大的毒副作用，如骨髓抑制、免疫抑制、白细胞减少等血液系统毒性、呕吐等胃肠道不良反应以及脱发等皮肤及附属器官反应。因而人类一直在寻找新的药物和治疗方法意图延长癌症患者的存活期，提高他们的生活质量以致最终达到根除肿瘤的目的。利用多糖的免疫调节功能的免疫治疗则由于靶向性强并且不容易产生副作用，近年来已经成为肿瘤治疗的热点，并且在未来的5-10年将有可能同传统的手术、放疗以及化疗一道在肿瘤的治疗中成为常用方法，同时鉴于肿瘤放疗、化疗经常导致的一些免疫抑制副作用，因而利用多糖的免疫增强功能并联合放、化疗来治疗肿瘤将更有其临床应用价值。
技术实现思路
本专利技术利用一种简单有效的多糖提取工艺和方法，以灰树花为原料获得了一种新的均一的β -葡聚糖(GFPBWl)，药理实验表明GFPBWl能通过Dectin-1受体激活原代巨噬细胞释放细胞因子，而体内抗肿瘤实验也进一步表明GFPBWl具有免疫调节功能及相应的抗肿瘤活性。因此GFPBWl有望开发成为一种免疫调节剂作为抗肿瘤药物或者辅佐药物而用于临床。因此，本专利技术的一个目的在于提供一种化学结构特征明确的均一的葡聚糖GFPBffl。·本专利技术的另一个目的是提供一种制备GFPBWl方法。本专利技术的再一个目的是提供一种用于治疗肿瘤的药物组合物，其包含有效剂量范围的GFPBWl作为有效成分，并且优选地，其可进一步含有药学上可接受的载体及辅料。本专利技术的又一个目的是提供β-葡聚糖GFPBWl在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。为实现上述目的，本专利技术提供了一种具有如下所示的结构式的β_葡聚糖GFPBffl本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有如下所示的结构式的β?葡聚糖GFPBW1：其中，n表示150～750的整数。FDA0000100533770000011.tif

【技术特征摘要】
1.一种具有如下所示的结构式的β-葡聚糖GFPBWl 2.根据权利要求1所述的GFPBWl，其特征在于，所述β-葡聚糖GFPBWl的平均分子量为3 X IO5Da,分子量范围为I 5 X IO5Da03.一种制备如权利要求1所述的β -葡聚糖GFPBWl的方法，包括如下步骤 (a)用醇溶液浸泡干燥的灰树花子实体，离心，固体物晾干，然后用沸水提取，所得固体残渣用碱溶液浸泡，离心将残渣丢弃，收集上清；调PH至7，再进行透析、浓缩，随后用醇溶液进行沉淀，离心收集沉淀，再经无水乙醇和丙酮依次洗涤，干燥后得棕黄色固体GFPB粗产物； (b)用适量蒸馏水溶解步骤(a)所得GFPB粗产物，离心除去不溶物，收集上清液并进行DEAE-纤维素柱层析，然后将得到的洗脱组分进行浓缩、透析和干燥以得到β -葡聚糖GFPBffl。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(a)中所述的醇溶液为95%乙醇，优选地用醇溶液浸泡为用95%乙醇浸泡灰树花子实体两周，每周更换乙醇一次。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(a)中所述的沸水提取的条件为每次加约2倍体积蒸馏水，提取时间为4 6小时，并用苯酚-硫酸法检测提取液中糖含量，提取3 5次，优选提取4次。6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(a)中所述的碱溶液浸泡的条件为于4 °C下用5 % NaOH溶液浸泡两次，每次4小时。7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(a)中所述的透析条件为采用对流动水透析2天。8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(b)中所述DEAE-纤维素柱层析的条件为先以蒸馏水做洗脱液，然后分别用O...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁侃，王滢，方建平，董群，
申请(专利权)人：中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：