铜氧还蛋白衍生的转运制剂及其应用方法技术

本发明专利技术揭示了将货物化合物（ｃａｒｇｏ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ）输送进入癌细胞的方法与材料。货物化合物的输送是通过使用衍生自铜氧还蛋白的蛋白转导结构域完成的。本发明专利技术还揭示了治疗癌症与诊断癌症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请要求2004年10月7日提交的60/616,782号美国临时专利 申请、2005年5月13日提交的60/680,500号美国临时专利申请、2005 年7月19日提交的60/700,297号美国临时专利申请的优先权。以上 申请的全部内容全部并入本文做参考。政府权益声明本申请的主题受国立卫生研究院(NIH， National Institutes of Health, Bethesda， Maryland, U.S.A.)的一项研究基金的支持(基金号 ES 04050-18)。政府对本专利技术拥有某些权利。
技术介绍
蛋白质进入哺乳动物细胞常由所述蛋白质上的一个小片段介导， 通常称为"蛋白质转导结构域(protein transduction domain)"或PTD。 该片段可作为信号附着于外源蛋白质以帮助这种蛋白质转运进入哺 乳动物细胞。例如，两性肽可用来促进人成纤维细胞HS68或鼠淋巴 细胞性白血病细胞L1210对作为潜在抗肿瘤药物的DNA切割金属吓 啉(DNA-cleaving metalloporphyrins ) 的摄取(Chaloin, L. et al. Bioconjugate Chem. 12:691-700， (2001))。如penetratin、 transportan、 Tat(氨基酸47-57或48-60)以及模型两性肽MAP等称为细胞穿透肽 (cell-penetrating peptide)的肽已作为输送载体用来转运药理学上重 要的物质，如反义寡核苷酸、蛋白质和肽(Hallbrink,M.etal.Biochim. Biophys. Acta 1515:101-109 (2001); Lindgren， M.， et al. TrendsPharmacol. Sci. 21:99-103 (2000))。这种肽、尤其是果蝇转录因子Antennapedia的DNA结合同源结 构域或21残基肽载体Pep-l可在37'C或4。C被多种类型的培养细胞 如人HS68细胞或鼠NIH-3T3成纤维细胞内在化。温度变动没有作用 提示其穿透机制与经典的胞吞作用不同(Morris, M.C. et al. Nature Biotechnol. 19:1173-1176(2001))，后者需要手性受体蛋白。用来将药 理学活性化合物转运到哺乳动物细胞内的应用最广泛的一种肽是人 免疫缺陷病毒1型(HIV-I)反式激活蛋白Tat的11氨基酸富精氨酸蛋 白质转导结构域(PTD)(Schwarze， S.R. et al. Science 285:1569-1572 (1999), Schwarze， S.R. et al. Trends Cell Biol. 10:290-295 (2000))。小鼠 腹腔注射120 kDa f3-半乳糖苷酶/Tat融合蛋白可导致该融合蛋白跨细 胞转导进入几乎所有组织，包括通过血-脑屏障。HIV-I Tat的这一短 肽结构域己示出可介导包括磁性纳米粒子、噬菌体载体、脂质体及质 粒DNA等大分子或颗粒的细胞内在化。与上述的其它细胞穿透肽不 同，全长Tat或者其11氨基酸转导结构域介导的货物蛋白内在化在4 。C被显著抑制(Liu， Y. et al. Nat. Med. 6:1380-1387 (2000), Suzuki, T. et al. J. Biol. Chem. 277:2437-2443 (2002))，并且需要与受体例如细胞 膜硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的硫酸乙酰肝素链相互作用。目前己经鉴别的大多数PTD都来自病毒和哺乳动物来源。其它 来源的PTD对于设计不同实验序列以及动物及人体的治疗和预防程 序是所需的。PTD的一个来源是细菌细胞。虽然已知细菌蛋白如霍乱 毒素能进入哺乳动物细胞胞质溶质(Sofer， A, and Futerman， A.H. J. Biol. Chem. 270: 12117-12122 (1995))，但此类蛋白的细胞毒性限制了 应用细菌蛋白及其衍生的PTD将药理学重要的货物转运进入哺乳动 物细胞。专利技术简述本专利技术的一个方面是一种肽，该肽与少于全长的野生型铜氧还蛋白(cupredoxin)或H.8外膜蛋白具有至少约90%的氨基酸序列相同 性，并且其能促进相连的货物分子进入哺乳动物癌细胞。在某些实施 方案中，该肽与少于全长的天青蛋白、质体蓝素、铁硫菌蓝蛋白(msticyanin)、假天青蛋白、橙绿曲挠素(auracyanin)、天青蛋白样 蛋白或SEQIDNO: 1、 SEQIDNO:2、 SEQIDNO:3、 SEQIDNO:4、 SEQIDNO:29、 SEQIDNO:30、 SEQIDNO:31、 SEQIDNO:32、 SEQ ID NO: 33、 SEQ ID NO: 34、 SEQ ID NO: 36和SEQ ID NO: 43 具有至少约90%的氨基酸序列相同性。在某些实施方案中，该肽来自 ,同纟录假单胞菌(尸化wdo附o"os awwg/"c^fl)、层理席藻(尸/7or附/cZ/ww /a/M/"oyw附)、氧^f七亚铁硫t干菌(T7n'oZn3c/〃z^々厂roox/(i(a7w )、裂环无色 杆菌(爿c/zramo6acter cyc/oc/osto1 )、 丁香假单胞菌 (/^ew(io,nas s>W"ga)、月囟月莫炎奈瑟氏球菌(A^zi化r/a附e"/"g/"'^y)、畐ll溶血弧菌(W6n'o ; ara/7eamo(^/cw )、支气管败血性包特氏菌(Sorafefe〃a Z^owcto—ca)、百日咳杆菌(Bwcfe/e〃a戸f脇&)、橙色绿屈挠菌(C/z/orq/fecws awraw"'acws ) 禾口淋病奈瑟氏球菌 (7Ve^en'a go"o/r/zo^e)。在其它实施方案中，该肽长度为至少10个残基且不超 过50个残基。在某些实施方案中，该肽包含与SEQ ID NO: 5、 SEQ ID NO: 6、 SEQ ID NO: 7、 SEQ ID NO: 9、 SEQ ID NO: 37、 SEQ ID NO: 38、 SEQ ID NO: 39、 SEQ ID NO: 40、 SEQ ID NO: 41、 SEQ ID NO: 42、 SEQ ID NO: 43、 SEQ ID NO: 44、 SEQ ID NO: 46或SEQ ID NO: 47 具有至少约90%的氨基酸序列相同性的序列。在其它实施方案中，该 肽包含或由SEQ ID NO: 5、 SEQ ID NO: 6、 SEQ ID NO: 7、SEQIDNO: 9、 SEQ ID NO: 37、 SEQ ID NO: 38、 SEQ ID NO: 39、 SEQ ID NO: 40、 SEQ ID NO: 41、 SEQ ID NO: 42、 SEQ ID NO: 43、 SEQ ID NO: 44、 SEQ ID NO: 46、 SEQ ID NO: 47或SEQ ID NO: 47组成。在某些实施 方案中，该肽包含氨基酸序列DGXXXXXDXXYXKXXD和DGXXXXDXXYXKXXD,其中D是天本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肽，其由与少于全长的野生型铜氧还蛋白或Ｈ．８外膜蛋白具有至少约９０％的氨基酸序列相同性的序列组成，并且其能促进相连的分子进入哺乳动物癌细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿南达查克拉博蒂，塔帕斯达斯古普塔，山田亨，阿塞尼奥菲亚略，
申请(专利权)人：阿南达查克拉博蒂，塔帕斯达斯古普塔，山田亨，阿塞尼奥菲亚略，
类型：发明
国别省市：US[美国]