利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群的方法技术

本发明专利技术公开一种利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群的方法，步骤包括：1)构建含有待表达的编码目标蛋白基因和抗生素筛选基因的基因片段的质粒，和含有piggyBac转座子序列的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒转染同时引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞直接在摇瓶中进行抗生素筛选。本方法能够在一到两周时间内构建稳定的细胞群，并能够高效的表达目标蛋白。以及，本发明专利技术还公开一种利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群并直接放大生产目标蛋白的方法，可满足50升以上的生产。

【技术实现步骤摘要】
利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群的方法
本专利技术涉及生物制药领域，特别是涉及一种在CHO(ChineseHamsterOvary，中国仓鼠卵巢细胞)细胞中利用piggyBac转座子快速高效表达蛋白的方法。
技术介绍
DNA转座子是天然存在于动物细胞基因组中的重复序列。PiggyBac转座子最初发现于昆虫细胞中，核心原件包括转座酶和末端反向重复序列。PiggyBac转座子的基因序列以及末端反向重复序列已经公开，其在GENBANK中的编号为GU937109.1和ABS12111.1。PiggyBac转座系统能够通过“剪切和粘贴”的方式在基因组和质粒间转移DNA序列。与其他转座系统相比，piggyBac转座酶可以将两个末端反向重复序列以及二者之间的序列精确插入基因组核酸序列为TTAA的位置，且不造成原位置的碱基增加或缺失。随着对转座子机理研究的不断深入以及在哺乳动物细胞中应用的逐渐成熟，转座子被越来越多的用于干细胞诱导，基因转移等动物细胞工程领域中。快速高效的蛋白表达在科研和工业领域有着广泛的需求。瞬时转染技术可以在两周内表达近克级别蛋白，然而其表达量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群的方法，其特征在于，步骤包括：1)构建含有编码目标蛋白基因和抗生素筛选基因的基因片段的质粒，和含有piggyBac转座子序列的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒转染同时引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞直接在在摇瓶中进行抗生素筛选。

【技术特征摘要】
1.一种利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群的方法，其特征在于，步骤包括：1)构建含有编码目标蛋白基因和抗生素筛选基因的基因片段的质粒，和含有piggyBac转座子序列的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒转染同时引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞直接在在摇瓶中进行抗生素筛选。2.一种利用piggyBac转座子在CHO细胞中获得表达目标蛋白的稳定细胞群并直接放大生产目标蛋白的方法，其特征在于，步骤包括：1)构建含有编码目标蛋白基因和抗生素筛选基因的基因片段的质粒，和含有piggyBac转座子序列的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒转染同时引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞直接在在摇瓶中进行抗生素筛选；4)将步骤3)筛选后的细胞通过批次补料的方法生产目标蛋白。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)，所述目标蛋白为抗体，融合蛋白，重组蛋白或者酶中任意一种。4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)，所述抗生素选自真核动物抗生素中任意一种或者几种。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1)，所述真核动物抗生素包括嘌呤霉素，杀稻瘟菌素，博莱霉素以及潮霉素。6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)，含有编码目标蛋白基因和抗生素筛选基因的基因片段的上游和下游分别有一个piggyB...

【专利技术属性】
技术研发人员：张峥，李晓璐，蔡洁行，周伟昌，陈智胜，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，无锡药明康德生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31