高耐盐性的工程核酸酶制造技术

本发明专利技术提供了一种具有高耐盐性的工程化核酸酶。该多肽包含一个或多个突变，使其三维结构中具有更多带正电荷的表面积。与具有SEQ ID NO:1序列的核酸酶相比，该多肽在溶液离子强度超过200mM的条件下仍具有至少60％的核酸酶活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本公开涉及蛋白质工程和重组表达。尤其涉及通过在蛋白质一级序列中组合氨基酸残基突变来改变粘质沙雷氏菌(serratia marcescens)来源核酸酶的生化特性，以增强突变体在高盐浓度下的酶活性。

技术介绍

1、核酸酶是一类通过内切/外切方式切割核酸分子中磷酸二酯键的酶。粘质沙雷氏菌核酸酶a(uniprot编号：p13717)已被证实为非特异性核酸酶，其通过切割磷酸二酯键催化单链/双链dna及rna的水解反应。晶体结构显示，该酶是一种依赖镁离子(mg2+)的二聚体核酸酶，其活性依赖于一个关键的水簇。它已被广泛用于蛋白质生产和药用病毒生产中的核酸去除。该酶还以的名称由emd millipore公司商业化。

2、尽管粘质沙雷氏菌核酸酶a已在工业和研发领域得到广泛应用，但其易被高盐浓度抑制是该酶的一个显著缺陷。这种酶的高盐不利特性限制了其应用，并在某些药品生产中增加了额外的缓冲液更换步骤。当溶液离子强度>200mm时，酶活性会受到显著抑制。然而，近期研究表明，高盐缓冲液更有利于病毒生产。因此，一种耐高盐的粘质沙雷氏菌核酸酶a应能在许多高盐条件下本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种源自粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)核酸酶A的多肽，具有高耐盐性，所述多肽包含一个或多个突变，使所述多肽在其三维结构中具有更多带正电荷的表面积，

2.一种多肽，其包含：

3.根据权利要求2所述的多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO:1或其成熟多肽具有至少70％相同性的氨基酸序列，并且在以下位点具有突变：(1)A95以及选自S74、N79、T98、N101、A102、S137、D138、Q141、D149、D156的至少3个位点；或(2)D149以及选自S74、N79、A95、T98、N101、A102、S137、D138、Q141、...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种源自粘质沙雷氏菌(serratia marcescens)核酸酶a的多肽，具有高耐盐性，所述多肽包含一个或多个突变，使所述多肽在其三维结构中具有更多带正电荷的表面积，

2.一种多肽，其包含：

3.根据权利要求2所述的多肽，所述多肽包含与seq id no:1或其成熟多肽具有至少70％相同性的氨基酸序列，并且在以下位点具有突变：(1)a95以及选自s74、n79、t98、n101、a102、s137、d138、q141、d149、d156的至少3个位点；或(2)d149以及选自s74、n79、a95、t98、n101、a102、s137、d138、q141、d156的至少3个位点；

4.根据权利要求2所述的多肽，所述多肽包含与seq id no:1或其成熟多肽具有至少70％相同性的氨基酸序列，并且在选自n79、a95、a102和d149的至少三个位点处具有突变，并且任选地在选自s74、t98、n101、s137、d138、q141、d156的至少一个位点处具有突变；

5.根据权利要求2所述的多肽，所述多肽包含与seq id no:1或其成熟多肽具有至少70％序列相同性的氨基酸序列，其中所述多肽在高溶液离子强度下具有核酸酶活性，且所述多肽包含选自以下的一个或多个突变：(1)n79k或n79r，(2)a95k或a95r，(3)a102k或a102r，(4)d149k或d149r，(5)s74k，(6)t98k，(7)n101k，(8)s137k，(9)d138k，(10)q141k，和(11)d156r，

6.一种组合物或试剂盒，包含一种或多种如权利要求1-3中任一项所述的多肽，

7.一种核酸，其包含：

8.一种核酸构建体，其包含权利要求5所述的核酸的多核苷酸序列，

【专利技术属性】
技术研发人员：廖善晖，邱存家，陈晓悦，蔡洁行，周伟昌，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：