鲨鱼软骨萃取物及其制法制造技术

本发明专利技术是有关动物软骨萃取物，尤指一种含８ＫＤａ至２５Ｋｄａ的鲨鱼软骨萃取组成物及其制法及用途。其包括：（ａ）以不致使鲨鱼软骨变性的水溶液萃取鲨鱼软骨碎片数小时至数天，分离固态物，得粗萃液；（ｂ）由粗萃液中分离分子量为８ＫＤａ至２５Ｋｄａ的有效成份；其特征在于：步骤（ａ）的萃取温度为室温。具有抗新生血管作用及／或抑制肿瘤功能，或取有效量的上述有效成份，配成抗新生血管作用及／或抑制肿瘤的组成物。该抗新生血管作用及／或抑制肿瘤组成物的有效成份，以含分子量约１０ＫＤａ和约１４Ｋｄａ的有效成份为较佳。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是有关动物软骨萃取物，尤指一种含8KDa至25Kda的鲨鱼软骨萃取组成物及其制法及用途。鲨鱼软骨萃取组成物对多种疾病具有疗效为已知知识，例如参见美国第3895103、5075112、5562535、5618925、5843920、5888514号专利。其中用于抗新生血管作用及／或抑制肿瘤的为第5075112、5618925、5843920号专利，其中第5075112号专利是以鲨鱼软骨切细后，直接使用，并未萃取其有效成份；第5618925号专利是萃取后的固态有效成份，其分子量分别为1～2．5KDa，5．3～6．25KDa，7．29～7．94KDa，29KDa，35KDa，48KDa，60KDa，60～70KDa，70～120KDa等有效成份或其组合；而第5843920号专利是以鲨鱼软骨的蛋白质和外加的寡醣(oligosaccharide)所形成的复合物(complex)作为有效成份；其均和本专利技术是以鲨鱼软骨萃取物中分子量为约10KDa和约14KDa作为有效成份不同。此外，涉及鲨鱼软骨的处理或萃取的专利有第5562535、5618925和5843920号专利，其中第5562535号专利是单纯取用鲨鱼软骨，但在干燥脱水时以声波(sound waves)取代加热，其未萃取或分离鲨鱼软骨的有效成份；第5618925号专利在约4℃的低温下萃取鲨鱼软骨，得萃取后固态物和粗萃液，再由该粗萃液中分离分子量为1～2．5KDa，5．3～6．25KDa、7．29～7．94KDa、29KDa、35KDa、48KDa、60KDa、60～70KDa和70～120Kda的有效成份，该方法必须在约4℃下进行萃取，较适用于实验室，并不适合工业化生产；第5843920号专利，是以寡醣和鲨鱼软骨形成错合物，必要时，再以无机盐自该错合物中分离抗新生血管作用的蛋白质。本专利技术的目的之一，在于提供一种鲨鱼软骨萃取组成物。本专利技术的另一目的，在于提供一种鲨鱼软骨萃取组成物的制法。本专利技术的再一目的，在于提供一种可以用抗新生血管作用的鲨鱼软骨萃取组成物。本专利技术的又一目的，在于提供一种可用于抑制肿瘤的鲨鱼软骨萃取组成物。本专利技术是在室温条件下萃取鲨鱼软骨，去除固态物，得粗萃液，再由粗萃液中分离含8KDa～25Kda的有效成份，其有效成份不同于上述目前技术的有效成份，其萃取方法也不同上述目前技术。本专利技术鲨鱼软骨萃取组成物的制法，其包括(a)以不致使鲨鱼软骨变性的水溶液萃取鲨鱼软骨碎片数小时至数天，分离固态物，得粗萃液；(b)由粗萃液中分离分子量为8KDa至25Kda的有效成份；其特征在于步骤(a)的萃取温度为室温。步骤(a)可使用任意不致于使鲨鱼软骨变性的水溶液，例如含胍(guanidine)的水溶液，含MES的水溶液，其混合物或组成物的水溶液，其个别衍生物的水溶液，其个别盐类(例如胍·HCl)的水溶液，或其衍生物及或盐类的混合物或组成物的水溶液。即胍衍生物的水溶液、胍的酸式盐的水溶液、MES衍生物的水溶液或MES碱金属盐的水溶液，或其混合物或组成物的水溶液；含胍或其衍生物或盐类，及MES或其衍生物或盐类的水溶液。为了使步骤(a)能在室温下进行萃取，以采用含胍和MES的水溶液萃取鲨鱼软骨为较佳，以含0．1M以上胍和0．005M至0．1M的MES的水溶液为更佳。而所谓室温，意指萃取时无需刻意加温或冷却下的环境温度，或相近的温度。当然步骤(a)也能在低温冷却或加热升温下进行，但温度降低将使萃取速度变慢，而过度加热，将使鲨鱼软骨变性，一般而言，以10℃至40℃为较佳。由于本制法过程可在室温下进行萃取，使得本制法过程的产量大幅提高。上述步骤(a)之后，宜以超滤法滤除该粗萃液中的杂质，再以无机酸酸化，并去除酸化后产生的固态物。其中该无机酸可为任意适用的无机酸，以硫酸、盐酸为较佳，而酸化后的pH值以1．0至3．0为较佳。上述酸化并去除杂质后的粗萃液，宜以无机碱中和，而该无机碱为MOH，其中M为碱金属，使其pH值为6．0至9．0，并去除固态物，得实质上为中性的粗萃液，其中该无机碱可为任意适用的无机碱，以碱金属的氢氧化物为较佳。上述中和后并去除杂质后的粗萃液，宜加铵盐，使其成低饱和度的铵盐溶液，并去除固态物，至铵盐成30wt％(重量百分比)的低饱和度，弃置固体，继续加入该铵盐至铵盐成30wt％以上的高饱和度(以35wt％以上为较佳，以40wt％以上为更佳)，形成高饱和度的铵盐溶液和固态物，分离该固态物，取其固体，并使该固态物溶于不致于使鲨鱼软骨变性的水溶液中，其中该铵盐以硫酸铵或氯化铵为较佳。以不致于使鲨鱼软骨变性的水溶液使上述经铵盐处理后的固体溶解，其中该不致于使鲨鱼软骨变性的水溶液为含胍或其衍生物或盐类以水溶液为较佳，以含胍的水溶液为更佳，以含胍和Tris-HCl pH为6．0至9．0的缓冲液为较佳。上述步骤(b)的分离方法，可采用层析法，电泳法(electrophoresis)或凝胶过滤法(gel filtration)，或类似的分离方法，或其组合方法，以层析法为较佳。本专利技术由鲨鱼软骨萃取的有效成份，有别于传统已知分子量分别为1～2．5KDa，5．3～6．25KDa、7．29～7．94KDa、29KDa、35KDa、48KDa、60KDa、60～70KDa和70～120Kda的有效成份。本专利技术鲨鱼软骨萃取组成物的有效成份，其分子量为8KDa至25KDa，以含分子量约10KDa及／或14Kda的有效成份为较佳。本专利技术含分子量8KDa至25KDa有效成份的鲨鱼软骨萃取组成物，其是将以不致于使鲨鱼软骨变性的水溶液萃取鲨鱼软骨所得的粗萃液，是利用层析法分离所得；具有抗新生血管作用及／或抑制肿瘤功能，必要时，可取有效量的上述有效成份，配成抗新生血管作用及／或抑制肿瘤的组成物。该抗新生血管作用及／或抑制肿瘤组成物的有效成份，以含分子量约10KDa和约14Kda的有效成份为较佳。下面结合实施例及附图对本专利技术的技术方案作进一步的描述，这些较佳实施例并非用以限制本专利技术的申请专利范围。附图说明图1为本专利技术鲨鱼软骨萃取组成物的SDS／PAGE图。图2为本专利技术鲨鱼软骨萃取组成物的抑制HUVEC移动效益图。图3为本专利技术鲨鱼软骨萃取组成物抑制HUVEC增生的效益图。图4为本专利技术鲨鱼软骨萃取组成物抑制胶原分解活性的作用图。图5为本专利技术鲨鱼软骨萃取组成物的抗新生血管作用图。图6为本专利技术鲨鱼软骨萃取组成物的抑制肿瘤细胞生长的效益图。图7为本专利技术鲨鱼软骨萃取组成物的抑制肿瘤细胞转移的效益图。图8为本专利技术鲨鱼软骨萃取组成物的抑制肿瘤细胞转移的效益图。SDS／PAGE(Sodium dodecyl sulfate／polyacrylamide gel-electrophoresis)是以聚丙烯醯胺凝胶(polyacrylamide gel)，配合标准蛋白质来评断本专利技术产物的分子量。其于电泳后，以10％(重量／体积比)的戊二醛预固定(pre-fixed)凝胶30分钟，并以CBB(Coomassie Brilliant Blue)染色1小时，而后使之脱色。并以标准蛋白质评断本专利技术产物的分子量。细胞培养由台北疾病防治研究所(Institute of Preventive Medicine本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鲨鱼软骨萃取组成物的制法，其包括：（ａ）以不致使鲨鱼软骨变性的水溶液萃取鲨鱼软骨碎片数小时至数天，分离固态物，得粗萃液；（ｂ）由粗萃液中分离分子量为８ＫＤａ至２５Ｋｄａ的有效成份；其特征在于：步骤（ａ）的萃取温度为室温。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张家福，许准榕，庄伟哲，蔡美丽，
申请(专利权)人：国强药品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：71[中国|台湾]