用于治疗动脉粥样硬化的肽基被动免疫接种疗法制造技术

使用针对至少一种载脂蛋白Ｂ的氧化片断产生的至少一种分离的人类抗体或抗体片断制造药物组合物，通过被动免疫接种方法治疗或预防性治疗动脉粥样硬化。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对载脂蛋白B的衍生物肽产生的新分离的人类抗体，尤其涉及用于免疫接种疗法的抗体治疗动脉粥样硬化，它们的制备方法，以及用所述抗体进行被动免疫接种的方法。本专利技术尤其包括对表1中列出的肽的氧化形式，特别是MDA-改性肽所产生的任何一种分离的抗体，优选与合适的载体和佐剂配合使用，作为预防和治疗局部缺血心血管性疾病的免疫疗法或抗动脉粥样硬化“疫苗”。
技术介绍
已知体液免疫的保护效果是通过结构相关的糖蛋白一族称为抗体来调节。抗体通过与抗原结合启动它们的生物活性。抗体与抗原结合通常对一种抗原是特异的，并且这种结合通常有高的亲和性。抗体由B-淋巴细胞产生。血液中含有很多不同的抗体，一种源于B-细胞克隆，一种具有独特的结构并对抗原有特异性。抗体存在于B-淋巴细胞表面上，血浆中，组织间质液中，以及分泌液如唾液和黏膜表面上的黏液中。所有抗体在整体结构上是相似的，这解释了物理化学特征如电荷和溶解度具有一定的相似性。所有抗体具有由两个相同的轻链，每个约24千道尔顿，和两个相同的重链，每个约55-70千道尔顿组成的共同的核结构。一个轻链连在每个重链上，两个重链相互连在一起。轻链和重链都包含一系列重复的同系单元，每个约有110个氨基酸残基长，以普通的球型独立折叠，叫做免疫球蛋白(Ig)域。两个重链结合形成的抗体区是疏水性的。已知抗体，特别是单克隆抗体，当它们处于相反的物理或化学条件时，轻链与重链的连接点处裂开。由于抗体含有许多半胱氨酸残基，它们有很多半胱氨酸-半胱氨酸二硫键。所有免疫球蛋白(Ig)域都包含两层具有三或四股反平行多肽链的β-折叠片。尽管它们整体相似，根据物理化学特性如尺寸、电荷和溶解度以及它们与抗原结合的性能，抗体分子可分为少量的不同类和亚类。人类的抗体分子类别为IgA，IgD，IgE，IgG和IgM。每类中的个体称作相同的同型。IgA和IgG同型进一步细分为亚型，称作IgA1，IgA2及IgG1，IgG2，IgG3和IgG4。在一个同型中所有抗体的重链共用氨基酸序列单元的广延区，但与属于其它同型或亚型的抗体不同。重链用希腊字母表的字母对应抗体全部的同型来命名，例如，IgA包含.α.，IgD包含.δ.(delta)，IgE包含.ε.(epsilon)，IgG包含.γ.(gamma)，及IgM包含.μ.(mu)重链。IgG，IgE和IgD以单体循环，而隐藏形式的IgA和IgM分别是二聚体或五聚体，并通过J链使其稳定。一些IgA分子以单体或三聚体存在。在每个个体中有108至1010个结构不同的抗体分子，每个在它们的抗原结合部位都有唯一的氨基酸序列。抗体中的序列差异主要存在于重链和轻链的氨基末端区称为可变(V)区以区别于更稳定的恒定(C)区里的三次短伸缩中。动脉粥样硬化是一种慢性疾病，它引起大动脉和中等尺寸动脉的最内层(内膜)变厚。它使血流量降低，并能在含有受影响脉管的器官里引起局部缺血和组织损坏。动脉粥样硬化是心血管性疾病包括心肌梗塞，中风和末梢动脉疾病的主要原因。它在西方国家是导致死亡的主要原因，并预计在二十年内将变成全世界范围内导致死亡的原因。脂蛋白，主要是低密度脂蛋白(LDL)在脉管的细胞外间质中的积聚作用引起了疾病。这些低密度脂蛋白(LDL)颗粒聚集并受到氧化变性。氧化的低密度脂蛋白是有害的，并引起血管损伤。动脉粥样硬化在很多方面表现出对这种包括炎症和纤维化在内的损伤的应答。1989年Palinski与其合作者在人类中识别出对氧化的低密度脂蛋白产生的循环自身抗体。这一观察表明动脉粥样硬化可能是由对氧化的脂蛋白产生的免疫反应所引起的一种自身免疫病。这时，一些实验室开始研究对氧化的低密度脂蛋白产生的抗体滴定度与心血管性疾病之间的联系。然而，这些研究中出现的图片很不清楚。对氧化的低密度脂蛋白中大量不同的抗原决定部位存在抗体，但这些抗原决定部位的结构并不知道。于是“氧化的低密度脂蛋白抗体”一词是指不同抗体的未知混合物，而并非一个特定的抗体。T细胞-非依赖性IgM抗体比T-细胞依赖性IgG抗体更常见。对氧化的低密度脂蛋白产生的抗体在患心血管性疾病的病人和健康对比者中均出现。虽然有一些早期研究报道了氧化的低密度脂蛋白抗体滴定度与心血管性疾病之间的联系，其余的研究没有找到这种关联。这些研究的主要缺点是用于测定抗体滴定度的ELISA测试使用氧化的低密度脂蛋白颗粒作为配体。低密度脂蛋白组合物在不同个体中是不同的，氧化改性的程度很难控制与评估，并且不能测定对氧化的低密度脂蛋白颗粒中不同抗原决定部位产生的抗体的水平。某种程度上，由于技术问题，用现有的技术评价对氧化的低密度脂蛋白产生的抗体响应作用迄今为止还是很困难的，然而，如果用完好的氧化的低密度脂蛋白颗粒不可能产生清晰的并可重现的疫苗成份。另一方面研究对血管壁中氧化的低密度脂蛋白产生的自身免疫反应可能在动脉粥样硬化发展方面起着重要作用，使动物对自身氧化的低密度脂蛋白产生免疫。支持这一方法的思想是如果利用传统的免疫接种技术加强对氧化的低密度脂蛋白产生的自身免疫反应，将导致血管炎症加重且动脉粥样硬化加重。为验证这种假设，用同种氧化的低密度脂蛋白使兔子免疫，然后用高胆固醇食物喂养动物3个月而诱发动脉粥样硬化。然而，与原始的假设相反，用氧化的低密度脂蛋白的免疫接种具有减少了约50％的动脉粥样硬化的保护效果。在随后的高胆固醇膳食与血管囊状损伤相结合产生更具攻击性斑块的研究中也获得了类似的结果。与我们的研究同时，一些其它实验室也报道了类似的观察结果。汇集现有的数据清楚地表明，存在防止动脉粥样硬化发展的免疫反应，并且这些免疫反应包括对氧化的低密度脂蛋白产生的自身免疫。这些观察也说明了开发一种免疫疗法或“疫苗”用来治疗人类基于动脉粥样硬化的心血管性疾病的可能性。一种方法是自身的低密度脂蛋白通过暴露于例如铜中而被氧化之后，用其对个体进行免疫。然而，由于不知道在氧化的低密度脂蛋白中哪种结构负责诱发保护性免疫，以及是否氧化的低密度脂蛋白也可以包含能导致相反免疫反应的抗原决定部位，使这种方法变得复杂化。识别氧化的低密度脂蛋白中的抗原决定部位在以下几个方面很重要首先，一个或几个这些抗原决定部位可能负责激活抗致动脉粥样化免疫应答，在用氧化的低密度脂蛋白进行免疫的动物身上可观察到这一点。因此含有这些抗原决定部位的肽提供了开发出用于人类的免疫疗法或“动脉粥样硬化疫苗”的可能性。进而，可用它们来治疗在人类中逐步扩展的动脉粥样硬化。其次，含有识别的抗原决定部位的肽可用于开发ELISAs，它能检测出针对氧化的低密度脂蛋白中特定结构产生的抗体。这样的ELISAs将比目前使用氧化的低密度脂蛋白颗粒作抗原的ELISAs更精确更可靠。它还可以分析对氧化的低密度脂蛋白中不同的抗原决定部位产生的免疫应答与心血管性疾病之间的联系。美国专利5,972,890涉及用肽诊断动脉粥样硬化。所述美国专利提供的技术原理上是一种放射物理诊断形式。肽序列被放射性标记并被注入血流中。如果这个肽序列与在载脂蛋白B中存在的序列相同，它将连接到为载脂蛋白B存在的受体的组织上。在脉管中，这在所有动脉粥样硬化斑块的上面。于是可以测定脉管壁中的放射性浓度，例如，用γ照相方法。因此该技术是放射物理诊断方法，它基于被放射性标记了的肽序列本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：扬·尼尔森，罗兰·卡尔松，詹妮·本特松，莱夫·斯特兰德博格，
申请(专利权)人：南方佛斯卡专利公司，
类型：发明
国别省市：