本发明专利技术公开了氨基酸组成为SEQ ID NO.1—SEQ ID NO.7中任一种多肽，以及该多肽作为动脉粥样硬化相关抗原，可用于制备治疗动脉粥样硬化的疫苗。本发明专利技术利用一种新的多肽，特别是胶原蛋白VI的COL6A5(SEQ ID NO.1)、COL6A6(SEQ ID NO.2)片段作为抗原，免疫受试对象，从而达到治疗动脉粥样硬化的效果，对临床预防动脉粥样硬化具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学领域，特别是涉及一种胶原蛋白肽段预防和治疗动脉粥样硬化的 应用。
技术介绍
动脉粥样硬化是一种慢性、渐进性的动脉疾病，主要临床表现为血管中脂质沉积 后血液流通受阻，进而部分或全部中断，最终引起中风、心肌梗死等生命危象。存在于血 液中的脂类则是能量储存以及某些组织激素合成所必需的成分，当血液中的脂肪含量增加 时，血流速度减慢，动脉壁上脂肪条纹逐渐形成，进而促使脂肪和胆固醇沉积并依附在平滑 的动脉内膜上形成小结。小结下长出纤维化的瘢痕组织，加促钙沉积且逐渐演变为无法祛 除的白垩状坚硬薄膜（即动脉粥样硬化斑块）。这层永久薄膜会阻碍动脉的正常扩张和收 缩，从而减缓动脉内血流速度，逐渐形成血块，妨碍或阻止血液流经动脉。虽然该病的确切 病因尚未确定，但是高血压，高脂血症，糖尿病以及吸烟史均已被证实为重要的致病因素。 近年来人们发现动脉粥样硬化同时还是一种多因素作用的自身免疫性疾病，它是 由脂代谢失衡引起的一个慢性炎症性血管疾病，这个炎症反应是经过人体免疫系统精细调 节的；免疫反应的初衷是要加速清除引起炎症反应的例如氧化的低密度脂蛋白（ox-LDL)、 死亡细胞碎片及其毒性产物、暴露的血管基质蛋白（matrix)降解产物等，然而激活的免疫 网络失衡、免疫耐受被打破，使得免疫反应成为促进动脉硬化的（pro-atherogenic)炎症 反应，因此动脉粥样硬化已经被认为是一个自身免疫性疾病；随着免疫反应的保护作用被 逐渐揭示，应用疫苗和抗体治疗已经在动物实验中得到证实。 Palinski等第一个应用氧化LDL免疫高脂血症的兔子动物模型。最初的目的是 想看看〇x-LDL激活免疫系统是否会加重疾病的发展，与预期恰恰相反的是，ox-LDL免疫的 动物实际上是部分地得到了保护。这个观察的结果被后续的许多不同的动物模型实验证 实，从而得到一个诱人的可能，就是用氧化LDL的抗原来制作动脉硬化的疫苗。然而，由于 ox-LDL是一个复杂的分子颗粒，有许多的抗原成分，难以标准化操作，同时它还含有有害的 抗原，因而氧化LDL本身不是一个好的疫苗选择。于是最近几年的大量努力工作就是试图 从氧化LDL上找到真正能够诱导动脉保护免疫反应的抗原。 另一类氧化LDL的抗原是用蛋白水解醛（MDA)修饰的ApoB-100的肽段。ApoB-100 是唯一与LDL始终联系在一起的蛋白。这些抗原有它的优势就是对氧化LDL的特异性，因 为它们有独一无二的氨基酸顺序。抗原被MHC-II分子提呈通常是以12-18个氨基酸链的 形式。Fredrikson等将ApoB-100等分为20个氨基酸为基本单位的多肽文库（共计302个 多肽），人工合成并通过动脉粥样硬化病人的血清，ELISA筛选相关肽段，阳性肽段制备疫 苗免疫ApoE7小鼠后发现，p45(661_680)可明显降低斑块面积达50%左右，同时在残存的 斑块上巨噬细胞的数量降低，胶原蛋白的表达提高。免疫使得特异性的Ig G显著增高，但 对Ig Μ的作用很小。Ig G的表达同时由Ig G2a转变为Ig G1，提示由Thl向Th2转变。 目前已经发现的动脉粥样硬化相关抗原包括ox-LDL，HSP65/60， β 2-glycoprotein I (0 2GPI)和纤维连接蛋白（fibronectin)，其中ox-LDL的疫苗和抗体 研究已经接近或正在进行临床试验。 胶原蛋白是动物体内最常见的一种蛋白，构成细胞外基质的骨架，已知的胶原蛋 白有十余种。I、π、ιπ型胶原为间质性或纤维性胶原蛋白，体内含量最为丰富；ιν、ν、νι型 胶原为非纤维性或无定形胶原蛋白，存在于间质和基底膜内。胶原蛋白在核糖体内合成后， 经过一系列酶的修饰，形成三螺旋结构的前胶原分子，在分泌出细胞时或稍后，前胶原分子 被切去两端的前肽链后形成胶原原纤维，胶原原纤维再通过共价键结合形成胶原纤维。在 创伤愈合过程中，伤口处出现大量的成纤维细胞，其功能正是合成和分泌胶原蛋白。COL VI 是一种细胞外基质蛋白，以纤维网状结存在于结缔组织中，并与基底膜紧密连接，最早发现 于人的主动脉内膜，随后又在人和牛的胎盘中分离得到。COL I与COL III是心脏细胞外基 质的重要组成部分，为心肌细胞间信号传导提供结构和功能支持，而COL VI则与心急梗死 后心脏重构与功能变化有关，COL VI可以聚集COL I与COL III组成纤维网状结构，进而阻塞 冠状动脉左前降支，促进心肌梗死后心室重构，COL VI缺失后可以明显增强心脏功能降低心 肌梗死后心室重构几率。近来研究表明COL VI三条肽链（α 1、α 2、α 3)发生基因突变时， 可引起 Ullrich 先天性肌营养不良（Ullrich Congenital Muscular Dystrophy，UCMD)和 Bethlem肌病（Bethlem Myopathy, BM)的发生，主要临床表现为机体肌张力降低，还会出现 皮肤异常瘢痕及毛发角质化。除此之外，COL VI的三条新肽链也被发现并定义，即（14、（15 和α6。三条肽链N-末端主要为七个VWA(von Willebrand factor A)结构域，C-末端则 为两或三个VWA结构域和一或两个独特序列，其中a 4C-末端还含有一个Kunitz结构域， 中间为胶原蛋白三重螺旋结构域。三条肽链在COL VI α?-/-小鼠体内均无表达，说明三者 的聚集需要ct 1的存在，与ct 3相似的空间结构则可以替代α 3组成α1α2α4、α1(?2α5 或（11(12(16而发挥作用。虽然三者空间结构类似，但在人体内的分布于具体功能各异， α 6在人体内广泛分布，而α 5在人体内则主要分布于肺及皮肤，且广泛分布于小鼠体内 各器官组织，具体差异性缘由还有待探索；α 4已被证实与亚洲人膝关节炎发病相关，α 5 则分布于真皮乳头层与网状层间血管周围，保持表皮完整性阻止外界抗原通过皮肤渗透体 内，其主要与过敏性皮炎发病相关，近来也被定义为C0L29A1。 中国专利200710195398. 9涉及肽在治疗动脉粥样硬化方面的应用。该中国专利 所公开的技术主要是一种被动免疫疗法，利用载脂蛋白Β的一个或多个片段经纯化或重组 产生的抗体来达到治疗动脉粥样硬化的效果的。 目前，仍未有公开报道胶原蛋白多肽在预防和治疗动脉粥样硬化的应用。
技术实现思路
本专利技术需要解决的技术问题之一在于提供一种新的动脉粥样硬化相关抗原多肽。 具体技术方案如下。 氨基酸组成为SEQ ID NO. 1 - SEQ ID Ν0. 7中任一种的动脉粥样硬化相关抗原多 肽。 本专利技术需要解决的技术问题之二在于提供一种多肽在制备动脉粥样硬化的抗原 中的应用。 具体技术方案如下。 氨基酸组成为SEQ ID NO. 1 - SEQ ID NO. 7中任一种的多肽在制备动脉粥样硬化 的抗原中的应用。 本专利技术需要解决的技术问题之二在于提供一种多肽在制备动脉粥样硬化的疫苗 中的应用。 具体技术方案如下。 氨基酸组成为SEQ ID NO. 1 - SEQ ID N0. 7中任一种的多肽在制备动脉粥样硬化 的疫苗中的应用。 本专利技术的需要解决的技术问题之四在于提供一种治疗动脉粥样硬化的疫苗。 本文档来自技高网...
【技术保护点】
氨基酸组成为SEQ ID NO.1—SEQ ID NO.7中任一种的动脉粥样硬化相关抗原多肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵明，
申请(专利权)人：广州文瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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