本发明专利技术属于生物化学、药物学领域，提供了一种新的抗ＨＩＶ－１的Ｆｕｒｉｎ酶抑制剂及其制法。本发明专利技术在原有的绿豆胰蛋白酶抑制剂片段的基础上，改变某些特征位点的氨基酸，用合成的方法得到所需的粗肽样品，并用逐步还原－氧化的手段最终得到高纯度的样品，并证明其具有Ｆｕｒｉｎ酶抑制剂的效果（对Ｆｕｒｉｎ酶抑制活力的Ｋｉ值达到了１０↑［－９］Ｍ），而Ｆｕｒｉｎ酶对ＨＩＶ－１的ｇｐ１６０加工成ｇｐ１２０和ｇｐ４１起到了至关重要的作用，通过对Ｆｕｒｉｎ抑制剂的研究开发，达到了研制新型抗ＨＩＶ－１抑制剂的目的，为治疗艾滋病提供了一种新的途径。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物化学、药物学领域，涉及一种HIV抑制剂，更具体的讲，本专利技术涉及一种新的抗HIV-1的Furin酶抑制剂及其制法。
技术介绍
艾滋病全称为获得性免疫缺陷综合症(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，该病由人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV或艾滋病病毒)感染而引起，导致被感染者免疫功能的部份或完全丧失，CD4+细胞数目减少，继而发生机会性感染、肿瘤等，临床表现多种多样。该病传播速度快、病死率高，且目前无法治愈，引起了各国政府和社会的关注。HIV的感染是由外膜前体蛋白gp160的加工开始的，gp160经过前体加工酶(例如Furin酶)的加工后变为两个片段表面糖蛋白(surface glycoprotein，SU)gp120和跨膜蛋白(transmembrane protein，TM)gp41。HIV-1首先通过其囊膜糖蛋白复合物gp120-gp41中的gp120与靶细胞上的受体CD4结合，使得gp120的构象发生改变，并继而与靶细胞上的辅受体CXCR4或CCR5结合，导致gp41的构型改变，暴露出其融合肽并插入到宿主细胞膜，从而启动病毒膜与细胞膜的融合，完成病毒进入宿主细胞的感染过程。gp160前体的加工是入侵过程的第一步，若能抑制此步就可阻止病毒的入侵，是重要的药物作用靶点。gp160的加工主要是依赖Furin酶等前体加工酶的作用。在Thomas；Gary等人的专利(Thomas；Gary et al，UnitedStates Patent5604201，February 18，1997)中指出Furin对切割位点的要求是含有RXXR的序列(P1和P4位点为R，而P2和P3位点则为任意氨基酸)，而近年来的研究表明HIV-1外膜糖蛋白gp160中就含有这样的切割位点site 1Arg508-Glu-Lys-Arg511；site2Lys500-Ala-Lys-Arg503，证明了Furin对HIV-1病毒前体蛋白加工的重要意义，进一步说明抑制Furin酶的作用对抑制HIV-1病毒侵入人体宿主细胞的可行性。(McCune et al.，1988，Cell 5355-67；Hallenberger et al.，1992，Nature 360358-361；Etienne Decroly etal，1994，the journal of biological chemistry vol.269 No.16 pp12240-12247；RominaOliva et al，2002，Chem.Eur.J.，8，No.61467-1473；Ilia Tikhonov et al，2004，FEBS Letter56589-92)目前针对Furin酶的抑制剂抑制HIV的研究有一些的报道，主要有两种化学计量的肽基抑制剂(癸酰基-Arg Val-Lys-Arg-CH2Cl)和α1-抗胰蛋白酶Portland(α1-PDX)。其中癸酰基-Arg-Val-Lys-Arg-CH2Cl的烷基化属性限制了其应用，在抑制Furin酶时具有较低的活性。α1-PDX是通过对α1抗胰蛋白酶的反应活性位点进行突变使其包含普遍认为是最小的Furin切割位点-Arg-Ile-Pro-Arg-。α1-PDX在体外试验当中对Furin具有高选择性(Ki＝600pM)，但是当抑制剂浓度提高到高浓度时也将抑制其它的PCs。在细胞和动物研究当中，发现α1-PDX是有效的Furin酶抑制剂。(Komiyama，T.et al.，2000，Biochemistry 3915156-15165；Cameron.A.et al.，2000，J.Biol.Chem.27536741-36749；FeiHao et al.，2001，ActaBiochimica et Biophysica Sinica，33(6)591-599；Jean，F.et al.，1998，Proc.Nati.Acad.Sci.U.S.A.957293-7298；Anderson，E.D.et al.，1993，J.Biol.Chem.26824887-24891；Molloy，S.S.et al.，Academic Press San Diego，CA，2001，The Enzymes199-235；Gary Thomas，Nat Rev Mol Cell Biol，2002 Oct；3(10)753-66；Pierre Cordelieret al.Jul 2003，Biochim Biophys Acta，1638(3)197-207；Bouchaib BAHBOUHI，2001，Biochem.J.360127-134)这些现有的Furin酶抑制剂一般都是天然大分子的基础上构建的，本领域迫切需要分子小且活性高的人工构建的Furin酶抑制剂，能成为更有效的抗HIV-1抑制剂。
技术实现思路
基于以上现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种分子量小，活性高的抗HIV-1抑制剂。本专利技术的另一目的就是提供所述抗HIV-1抑制剂的序列设计、制法和用途。在本专利技术的第一方面，提供了一种新的Furin酶抑制剂片段，具有以下氨基酸序列 其中P1位点是R；P2位点是K；P4位点是R；P6位点为X1，可以是R或者K；P7位点是X2，可以为Ala等所有碱性氨基酸；C的配对情况为C4-19，C9-17；合成过程中所指出的C由乙酰胺甲基(Acm)保护基保护得到中间产物。所述的氨基酸序列的结构如下 在本专利技术的第二方面，提供了一种抗HIV-1抑制剂，含有所述的Furin酶抑制剂，具有以下氨基酸序列 其中P1位点是R；P2位点是K；P4位点是R；P6位点为X1，可以是R或者K；P7位点是X2，可以为A等所有碱性氨基酸；C的配对情况为C4-19，C9-17。在本专利技术的第三方面，提供了一种制备该抑制剂的方法，包括步骤A.利用多肽合成的方法，合成出所需要的Furin酶抑制剂片段，所合成的粗产物具有以下氨基酸序列 其中，P1位点是R，P2位点是K，P4位点是R，P6位点为R，P7位点是A，合成过程中所指出的C由Acm保护基保护得到中间产物；B.将合成粗产物还原，脱盐后得到还原形态的产物并用HPLC进行分离纯化；C.将纯化的还原形态的产物用2-PDS氧化3h后冻干，将氧化产物脱盐后进行HPLC纯化分离，得到较纯的氧化中间形态产物；D.将氧化中间形态的产物进行碘氧化，脱去C的Acm保护从而使C正确配对，经过脱盐和HPLC的纯化分离得到较纯的抗HIV-1抑制剂。在本专利技术的第三方面，提供了所述的Furin酶抑制剂片段在制备治疗获得性免疫缺陷综合症的药物中的应用。在本专利技术的第四方面，提供了一种对于HIV感染有效的药物组合物，含有权利要求1所述的Furin酶抑制剂片段以及药学可接受的载体或赋形剂。可将Furin酶抑制剂片段配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种新的Ｆｕｒｉｎ酶抑制剂片段，其特征在于，具有以下氨基酸序列： ＊＊＊ 其中，Ｐ↓［１］位点是Ｒ；Ｐ↓［２］位点是Ｋ；Ｐ↓［４］位点是Ｒ；Ｐ↓［６］位点为Ｘ↓［１］，可以是Ｒ或者Ｋ；Ｐ↓［７］位点是Ｘ↓［２］，可以为Ａ等所有碱性氨基酸；Ｃ的配对情况为Ｃ４－１９，Ｃ９－１７；合成过程中Ｃ由乙酰胺甲基保护基保护得到中间产物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：戚正武，张友尚，崔大傅，陶虎，石嘉浩，汪世龙，张震，邵晓霞，
申请(专利权)人：同济大学，中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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