The present invention relates to the field of molecular biology, and discloses a method for using the droplet digital PCR technology of cattle and pig derived ingredients were detected, and used in the method of the combination of primers and probes, corresponding kit. The sequence of primers and probes for the SEQ ID No.1~6. This method is suitable for the quantitative detection of doping of pork beef or beef products in bovine ingredients, overcomes the defect of real-time fluorescence quantitative detection of PCR relies on the standard, in the absence of any standard or reference case, this method can be measured accurately by two kinds of nucleic acid components and meat and to calculate the copy number the exact content of a certain kind of meat ingredients, a very important practical significance to safeguard the interests of consumers with the fake market.
【技术实现步骤摘要】
一种基于微滴式数字PCR的牛、猪源性成分定量检测方法、引物和探针及试剂盒
本专利技术涉及分子生物学领域,具体来说是一种利用微滴式数字PCR技术对牛、猪源性成分进行定量检测的方法,以及在该方法中用到的引物和探针组合、相应的试剂盒。
技术介绍
近年来,遭到媒体曝光的阿胶不含驴皮成分,假牛肉,假猪蹄,用鸭肉制成涮羊肉和烤串,花旗参里掺萝卜干,山寨蜂胶,假鱼丸、假燕窝、假虫草等掺假售假事件,涉及集贸市场、餐饮饭馆,乃至深受消费者信赖的知名超市以及各大电商平台。面对这些真假难辨的食品和保健品,消费者总是一筹莫展。该如何鉴别这些商品是否掺假或假冒已成为食品安全监管和检测机构迫切需要解决的问题。事实上,相关的检测并不困难,利用DNA检测技术鉴别动、植物源性成分早已应用于物种资源的鉴定工作中。针对市面上掺杂、掺假牛肉普遍的现象,经过调查分析我们发现,牛肉制品中最普遍的掺假成分是猪肉,因为猪肉成本低廉,并且容易获得。目前常用的DNA检测手段是PCR(聚合酶链式反应)技术。不同的动、植物DNA都具有唯一性,根据这一特性采用PCR技术对相应物种的DNA进行特异性扩增,可迅速准确地鉴定产品中是否含有其他外源性成分。但是同时存在一个问题,由于PCR技术非常灵敏,尤其是实时荧光PCR,这样就有可能在加工过程被污染了其他动物成分,或用的调味料中带进了其他成分,从而造成误判的情况发生,因此有必要针对此类样品开发定量检测方法。微滴式数字PCR(dropletdigitalpolymerasechainreaction,ddPCR)作为DNA定量的新技术,克服了实时荧光定量PCR(realt ...
【技术保护点】
一种基于微滴式数字PCR的牛、猪源性成分定量检测的引物和探针,包括:两条检测牛源性成分的引物,其序列分别为Bov‑BGH‑F:5′‑CCGATGGATGTGTTCAGAGCT‑3′;Bov‑BGH‑R:5′‑GCCAAATGTCTGGGTGTAGATACC‑3′;一条检测牛源性成分的探针,其序列为Bov‑BGH‑Pr:5′‑TGGGCTTTAGGGCTTCCGAATGTGAA‑3′;两条检测猪源性成分的引物,其序列分别为Sus
【技术特征摘要】
1.一种基于微滴式数字PCR的牛、猪源性成分定量检测的引物和探针,包括:两条检测牛源性成分的引物,其序列分别为Bov-BGH-F:5′-CCGATGGATGTGTTCAGAGCT-3′;Bov-BGH-R:5′-GCCAAATGTCTGGGTGTAGATACC-3′;一条检测牛源性成分的探针,其序列为Bov-BGH-Pr:5′-TGGGCTTTAGGGCTTCCGAATGTGAA-3′;两条检测猪源性成分的引物,其序列分别为Sus-β-Actin-F:5′-CGAGACCTTCAACACCCCAG-3′;Sus-β-Actin-R:5′-GGCGTACCCCTCGTAGATG-3′;一条检测猪源性成分的探针,其序列为Sus-β-Actin-Pr:5′-TGTGGGTGACCCCGTCTCCGGA-3′。2.根据权利要求1所述的引物和探针,其特征在于,所述Bov-BGH-Pr的5′端标记有荧光报告基团FAM,3′端标记有荧光淬灭基团BHQ1;所述Sus-β-Actin-Pr的5′端标记有荧光报告基团HEX,3′端标记有荧光淬灭基团BHQ1。3.一种基于微滴式数字PCR的牛、猪源性成分定量检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物和探针。4.一种基于微滴式数字PCR的牛、猪源性成分定量检测方法,...
【专利技术属性】
技术研发人员:黄永辉,张卫东,廖力,徐淼锋,迟远丽,权永兵,
申请(专利权)人:珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心,
类型:发明
国别省市:广东,44
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