本发明专利技术涉及一种纯化去氨加压素的方法。去氨加压素主要用于治疗血友病、尿崩症及治疗性控制出血和手术前预防出血，其效果较好且副作用小，是一种很有市场前景的多肽药物。本发明专利技术采取以下技术方案：第一步纯化：将合成所得粗肽溶解后用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸盐缓冲溶液为Ａ相、色谱纯乙腈（ＡＣＮ）为Ｂ相，进行梯度洗脱纯化。第二步纯化：将第一步纯化所得目的肽溶液浓缩后用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以冰醋酸水溶液为Ａ相、色谱纯乙腈（ＡＣＮ）为Ｂ相，进行梯度洗脱纯化。转盐：采用阴离子交换法将磷酸盐、三氟醋酸盐转成醋酸盐。本发明专利技术的优点在于操作简单方便，产品纯度高、收率好，达到产业化要求，成本低廉，利于推广。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药化工领域，具体涉及。
技术介绍
去氨加压素(Desmopressin)是天然精氨加压素的结构类似物，系对天 然激素的化学结构进行两处改动而得。它主要用来治疗血友病、尿崩症及 治疗性控制出血和手术前预防出血，其效果较好且副作用小，是一种很有 市场前景的多肽药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一条适于产业化纯化去氨加压素的工艺方 法，使用反相高效液相色谱法纯化去氨加压素，纯度高且收率好，达到产 业化要求。为实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案第一步纯化将合成所得粗肽溶解后用以十八烷基硅垸键合硅胶为固定相，以磷酸盐缓冲溶液为A相、色谱纯乙腈(ACN)为B相，进行梯度洗脱纯化。第二步纯化将第一步纯化所得目的肽溶液浓縮后用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以冰醋酸水溶液为A相、色谱纯乙腈(ACN)为B相， 进行梯度洗脱纯化。转盐采用阴离子交换法将磷酸盐、三氟醋酸盐转成醋酸盐。纯化规模包括以下规格色谱柱5 cm X 25 cm (柱子直径X长度)、 本专利技术的优点在于操作简单方便，产品纯度高、收率好，达到产业化 要求，成本低廉，利于推广。 具体实施例方式下面以实施例对本专利技术做进一步详细说明 实施例一1、 样品处理每克粗肽用10%-30%冰醋酸水溶液溶解，使样品完全溶 解后用滤膜过滤，收集滤液备用。2、 第一次纯化纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱,柱子直径和长度为5 cm X 25 cm 。流动相A相磷 酸二氢钾水溶液用氢氧化钾溶液调pH至5.0-7.0 ; B相色谱纯乙腈。 流速50-60 ml/min。检测波长230 nm。梯度B%: 10% 40% 40-60 min。 进样量为1-2 g 。纯化过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为 15-20ml样品溶液。线性梯度洗脱40-50min，收集目的峰，将收集的目的肽 溶液于水温不超过37 。C下减压旋蒸浓縮至约25-30 ml/g后备用。3、 第二次纯化纯化条件色谱柱以十八烷基硅垸键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为5 cm X 25 cm 。流动相A相0.1%-10% 冰醋酸水溶液为A相；B相色谱纯乙腈。流速50-60 ml/min。检测波长 230 nm。梯度B°/。 10% 40% 50-70 min。进样量为1-2 g 。纯化过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为15-20ml样品溶液。线性梯度洗脱50-70min，收集目的峰，将收集的目的肽 溶液于水温不超过37 r下减压旋蒸浓縮至约70-80 ml /g后备用。4、转盐取50-60 g阴离子交换树脂置于合适大小的^! 芯漏斗中，用 超纯水冲洗至中性后上样，可上样10-20 g，减压抽滤并收集滤液，滤液于 水温不超过37 'C下减压旋蒸浓縮至约5-8 ml/g后转至合适大小西林瓶。 冷冻干燥后即可得到纯度大于99%的醋酸去氨加压素，纯化收率可达87% 以上。实施例二1、 样品处理每克粗肽用10%-30%冰醋酸水溶液溶解，使样品完全溶 解后用滤膜过滤，收集滤液备用。2、 第一次纯化纯化条件色谱柱以十八垸基硅垸键合硅胶为固定相的色谱柱,柱子直径和长度为15 cm X 25 cm 。流动相A相:磷 酸二氢钾水溶液用氢氧化钾溶液调pH至5.0-7.0 ; B相色谱纯乙腈。 流速450-550 ml/min。检测波长230 nm。梯度B%: 10% 40% 80-100 min。进样量为10-20g 。纯化过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为 180ml-220ml样品溶液。线性梯度洗脱80-100min，收集目的峰，将收集的 目的肽溶液于水温不超过37 'C下减压旋蒸浓縮至约30-40 ml/g后备用。3、 第二次纯化纯化条件色谱柱以十八垸基硅烷键合硅胶为固定 相的色谱柱，柱子直径和长度为15 cm X 25 cm 。流动相A相 0.1%-10%冰醋酸水溶液为A相；B相色谱纯乙腈。流速450-550 ml/min。 检测波长230 nm。梯度B%: 10% 40% 130-150 min。进样量为10-20 g °纯化过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为180ml-220ml样品溶液。线性梯度洗脱90-110min，收集目的峰，将收集的 目的肽溶液于水温不超过37 'C下减压旋蒸浓縮至约70-80 ml /g后备用。4、转盐取200-250 g阴离子交换树脂置于合适大小的砂芯漏斗中， 用超纯水冲洗至中性后上样，可上样25-35 g，减压抽滤并收集滤液，滤液 于水温不超过37 'C下减压旋蒸浓縮至约5-8ml/g后转至合适大小西林瓶。 冷冻干燥后即可得到纯度大于99%的醋酸去氨加压素，纯化收率可达89% 以上。实施例三1、 样品处理每克粗肽用10%-30%冰醋酸水溶液溶解，使样品完全溶 解后用滤膜过滤，收集滤液备用。2、 第一次纯化纯化条件色谱柱以十八烷基硅垸键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为30cm X 25 cm 。流动相A相磷 酸二氢钾水溶液用氢氧化钾溶液调pH至5.0-7.0 ; B相色谱纯乙腈。 流速1900-2200 ml/min。检测波长230 nm。梯度B%: 10% 40% 150-180 min。进样量为55-75 g 。纯化过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为 700ml-900ml样品溶液。线性梯度洗脱180-220min，收集目的峰，将收集的 目的肽溶液于水温不超过37 'C下减压旋蒸浓縮至约25-30 ml/g后备用。3、 第二次纯化纯化条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定 相的色谱柱，柱子直径和长度为30 cm X 25 cm 。流动相A相 0.1%-10%冰醋酸水溶液为A相；B相色谱纯乙腈。流速1900-2200 ml/min。 检测波长230 nm。梯度B%: 10% 40% 200-240 min。进样量为55-75 g 。纯化过程将色谱柱用50%以上的乙腈冲洗干净后上样，上样量为 700ml-卯0ml样品溶液。线性梯度洗脱200-240 min，收集目的峰，将收集 的目的肽溶液于水温不超过37 。C下减压旋蒸浓縮至约60-70 ml /g后备用。4、转盐取1000-1200g阴离子交换树脂置于合适大小的砂芯漏斗中， 用超纯水冲洗至中性后上样，可上样90-120g，减压抽滤并收集滤液，滤液 于水温不超过37 'C下减压旋蒸浓縮至约5-8ml/g后转至合适大小西林瓶。 冷冻干燥后即可得到纯度大于99%的醋酸去氨加压素，纯化收率可达88% 以上。权利要求1.，其特征在于它包括以下步骤第一步纯化将合成所得粗肽溶解后用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸盐缓冲溶液为A相、色谱纯乙腈(ACN)为B相，进行梯度洗脱纯化。第二步纯化将第一步纯化所得目的肽溶液浓缩后用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以冰醋酸水溶液为A相、色谱纯乙腈(ACN)为B相，进行梯度洗脱纯化。转盐采用阴离子交换法将磷酸盐、三氟醋酸盐转成醋酸盐。2、 根据权利要求1所述的，其特征在于采 用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，作为A相的磷酸盐缓冲溶液pH应 小于7，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种纯化去氨加压素的方法，其特征在于它包括以下步骤： 第一步纯化：将合成所得粗肽溶解后用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸盐缓冲溶液为Ａ相、色谱纯乙腈（ＡＣＮ）为Ｂ相，进行梯度洗脱纯化。 第二步纯化：将第一步纯化所得目的肽溶液浓缩后用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以冰醋酸水溶液为Ａ相、色谱纯乙腈（ＡＣＮ）为Ｂ相，进行梯度洗脱纯化。 转盐：采用阴离子交换法将磷酸盐、三氟醋酸盐转成醋酸盐。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：覃亮政，李红玲，马亚平，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]
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