一种注射用特利加压素的有关物质分析方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种注射用特利加压素的有关物质分析方法。本发明专利技术所述的注射用特利加压素的含量检测方法，包括以下步骤：步骤1，供试品溶液的制备：取注射用特利加压素配制成供试品溶液；步骤2，自身对照品溶液制备：将供试品溶液稀释，配制成自身对照品溶液；步骤3，有关物质的含量计算：分别将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，计算得到供试品溶液中有关物质含量。

【技术实现步骤摘要】
一种注射用特利加压素的有关物质分析方法
本专利技术属于医药
，具体涉及一种注射用特利加压素的有关物质分析方法。
技术介绍
注射用特利加压素的主要活性成分为特利加压素(三甘氨酸-8-赖氨酸-加压素)，为化学合成多肽类化合物。特利加压素的药理作用为：降低门静脉高压，同时减少门静脉区的血流，收缩食管平滑肌，持续压迫食管静脉曲张。注射用特利加压素的主要用于治疗食管静脉曲张出血。多肽类化合物，是一类重要的生物活性分子。多肽等生物技术药物的研究技术，如多肽固相合成技术及高效液相色谱纯化、分析技术等的发展，使得合成多肽药物的开发也成为药物研究中的一个活跃领域。合成多肽药物是指采用化学合成方法制备的多肽类药物。采用化学合成方法制备多肽，可以对天然多肽的结构进行修饰，从而增加多肽与受体的亲和力、选择性，增强对酶降解的抵抗力或改善药代动力学特性，甚至由受体的激动剂变为拮抗剂。多肽主要由氨基酸(包括天然氨基酸和非天然氨基酸)构成，这使得多肽类药物在质量研究方面不同于一般药物。由于合成工艺、结构等方面的独特性，合成多肽原料药中工艺杂质的来源和一般化学药物有所不同，其可能产生的工艺杂质有：缺失肽、断裂肽、去酰胺多肽、氨基酸侧链的不完全脱保护所形成的副产物、氧化肽、二硫键交换的产物、非对映异构的多肽等。同时，由于多肽的结构特点，这类药物的稳定性相对较差，引起多肽药物不稳定的原因主要有水解、氧化、外消旋化、二硫键的断裂及重排、β消除等。因此，在合成多肽药物的有关物质检查方法的研究中需要充分考虑对工艺杂质与降解杂质的检出效能。多肽类成分的各组成氨基酸均含有末端紫外吸收结构，因此可以使用紫外检测器进行检测。同时，由于不同结构多肽类成分疏水、亲水性质的差异，反相高效液相色谱结合梯度洗脱是多肽类成分常用的分离方法。因此，高效液相色谱-紫外检测器联用是多肽类成分杂质分析的最常用分析技术。目前，已公开的注射用特利加压素有关物质分析方法有：德国辉凌公司德国辉凌公司注射用特利加压素质量标准(标准号：YBH02332010)和德国辉凌翰宇药业注射用特利加压素质量标准(标准号：YBH07302009)。但上述已公开分析方法对注射用特利加压素有关物质的检测效能未经过对比研究。本专利技术对注射用特利加压素有关物质分析方法进行了充分的研究，并通过对不同条件下强制降解样品的检测，与已公开方法进行充分对比。研究结果表明，本专利技术建立的有关物质分析方法对特利加压素工艺及降解杂质的检出效能更高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种注射用特利加压素的含量检测方法。特利加压素为多肽类药物，易发生降解、断裂，使产品不稳定，因此需要在生产过程中对产品的含量与有关物质进行及时、有效、准确的分析与测定。与现有已公开的注射用特利加压素有关物质分析方法相比较，本专利技术所建立的分析方法，简单易行，灵敏、准确、精密度高，对特利加压素工艺及降解杂质具有更高的检出效能，能够在大生产中应用，更为有效的控制产品质量。本专利技术所述的注射用特利加压素的含量检测方法，包括以下步骤：步骤1，供试品溶液的制备：取注射用特利加压素配制成供试品溶液；步骤2，自身对照品溶液制备：将供试品溶液稀释，配制成自身对照品溶液；；步骤3，有关物质的含量计算：分别将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，计算得到供试品溶液中有关物质含量。其中，所述分析方法的液相色谱条件如下：色谱柱：AgilentPoroshell120EC-C18，规格4.6×100mm，2.7μm；流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钠(磷酸调pH值3.5)-乙腈，体积比：92:8；流动相B：0.1mol/L磷酸二氢钠(磷酸调pH值3.5)-乙腈，体积比：80:20；检测波长：210nm；流速：1.2ml/min柱温：40℃梯度洗脱程序如下表所示：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)010004100018653542010042.11000501000其中，步骤1，供试品溶液制备：方法如下：取注射用特利加压素5支，加水溶解并稀释至25ml，作为供试品溶液。其中，步骤2，自身对照品溶液的制备：方法如下：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为自身对照溶液。其中，步骤3，有关物质的含量计算：方法如下：取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的10％-20％，精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。各杂质相对保留时间和相对响应因子(f)如下所示。以各杂质与自身对照溶液主峰的峰面积，按百分之一自身对照法计算，[D-Phe6]特利加压素不得过0.3％；des-Gly1,Gly2,Gly3特利加压素不得过0.1％；des-Gly1,Gly2特利加压素+[β-Asp8]特利加压素不得过0.3％；des-Gly1特利加压素不得过0.3％；δAva10特利加压素不得过0.3％；[Des-Gly12]特利加压素不得过0.3％；[Gly12-OH]特利加压素不得过0.3％；[Glu7]特利加压素不得过0.3％；[Asp8，Gly12-OH]特利加压素峰不得过0.3％；[Glu7，Gly12-OH]特利加压素不得过0.3％；[AC-Gly1]特利加压素不得过0.3％；其它任一未知杂质不得超过0.3％；总有关物质不得过3.0％。杂质名称相对保留时间相对响应因子des-Gly1特利加压素1.010.91des-Gly1,Gly2特利加压素0.960.95des-Gly1,Gly2,Gly3特利加压素0.861.00[AC-Gly1]特利加压素1.410.95[D-Phe6]特利加压素0.760.97[Glu7]特利加压素1.201.00[Asp8,Gly12-OH]特利加压素1.250.96[β-Asp8]特利加压素0.960.98[Gly12-OH]特利加压素1.130.91[Glu7,Gly12-OH]特利加压素1.270.92δAva10特利加压素1.031.00[Des-Gly12]特利加压素1.091.01特利加压素1.001.00将本专利技术所建立的分析方法与现有已公开的德国辉凌公司注射用特利加压素质量标准(标准号：YBH02332010)和翰宇药业注射用特利加压素质量标准(标准号：YBH07302009)进行对比，在特利加压素有关物质控制情况方面的差异见下表。如表所示，本专利技术建立的分析方法对特利加压素有关物质的控制更为严格，表现在杂质控制数量更多，更全面。另外，经过对比，本专利技术建立的液相色谱条件与德国辉凌公司注射用特利加压素质量标准(标准号：YBH02332010)和翰宇药业注射用特利加压素质量标准(标准号：YBH07302009)中所采用的液相色谱条件有较大差异，主要表现在：(1)色谱柱的选择；(2)流动相体系的选择；(3)梯度洗脱程序的选择。三种分析方法所采用的色谱条件如下：(1)德国辉凌公司注射用特利加压素质量标准使用方法：色谱柱：WatersSymmetryC18(5μm，150*3.0mm)流动相A：(硫酸铵3.30g加超纯水至5000ml，加硫酸1ml混匀)-甲醇(1708g：292g)；流动相B：硫酸铵缓冲液-甲醇(758g：24本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种注射用特利加压素的含量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，供试品溶液的制备：取注射用特利加压素配制成供试品溶液；步骤2，自身对照品溶液制备：将供试品溶液稀释，配制成自身对照品溶液；步骤3，有关物质的含量计算：分别将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，计算得到供试品溶液中有关物质含量。

【技术特征摘要】
1.一种注射用特利加压素的含量检测方法，包括以下步骤：步骤1，供试品溶液的制备：取注射用特利加压素配制成供试品溶液；步骤2，自身对照品溶液制备：将供试品溶液稀释，配制成自身对照品溶液；步骤3，有关物质的含量计算：分别将对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，计算得到供试品溶液中有关物质含量；其特征在于，色谱条件如下：色谱柱：AgilentPoroshell120EC-C18，规格4.6×100mm，2.7μm；流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钠-乙腈，体积比：92:8；流动相B：0.1mol/L磷酸二氢钠-乙腈，体积比：80:20；检测波长：210nm；流速：1.2ml/min；柱温：40℃；梯度洗脱程序如下表所示：2.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，供试品溶液制备：取注射用特利加压素5支，加水溶解并稀释至25ml，作为供试品溶液；步骤2，自身对照品溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：许磊，王桂梅，吴文锁，阚晓臣，郭嘉林，董凯，孙长海，姚小青，
申请(专利权)人：天津红日药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12