一种甲磺酸苦柯胺B有关物质质量控制方法技术

本发明专利技术涉及一种甲磺酸苦柯胺B有关物质质量控制方法，包括以下步骤：步骤1，系统适用性溶液制备：取杂质1、杂质2、杂质3及甲磺酸苦柯胺B配制成系统适用性溶液；步骤2，供试品溶液制备：取甲磺酸苦柯胺B原料药配制成供试品溶液；步骤3，对照溶液的制备：取供试品溶液配制成对照溶液；步骤4，分别将系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，得到色谱图；步骤5，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中各已知杂质、未知杂质及总杂质的含量。本发明专利技术所述的检测方法具有重现性好、准确度高等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种甲磺酸苦柯胺B有关物质检测方法
本专利技术属于医药
，具体涉及一种甲磺酸苦柯胺B有关物质质量控制方法。
技术介绍
苦柯胺B(KukoamineB)，化学结构下所示：天然产物苦柯胺B(KukoamineB)是ShinjiFunayama等首次从地骨皮中分离提取的生物碱类化合物。苦柯胺B能有效拮抗导致脓毒症的细菌病原体相关分子—内毒素/脂多糖(endotoxin/lipopolysaccharide,LPS)和细菌DNA(CpGDNA)，对治疗脓毒症表现出良好活性，且作用明显优于阳性对照药物，因而具有良好的成药前景。苦柯胺B在制备和放置过程中容易因为酸、碱、氧化等条件的改变而使得其有关物质增高。在研究过程中，我们分离纯化了如下三种苦柯胺B的杂质：杂质1：杂质2：杂质3：目前没有对苦柯胺B杂质的研究，也没有关于苦柯胺B杂质质量控制方法的详细研究报道。为了更好的研究苦柯胺B的药物性质，提高苦柯胺B的药物质量。实验人员对苦柯胺B的有关物质的质量控制方法进行了研究。找到了一种精密度高，操作简单，适用性强,可以用于苦柯胺B及相关制剂中上述三种杂质的质量控制。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种甲磺酸苦柯胺B的含量检测方法。本专利技术所建立的液相色谱法检测甲磺酸苦柯胺B的有关物质，通过系统适用性溶液对已知杂质定位，用含校正因子的自身对照法计算已知杂质含量，使有关物质的控制更加严格和准确。本专利技术所述的含量检测方法，包括以下步骤：步骤1，系统适用性溶液制备：取杂质1、杂质2、杂质3及甲磺酸苦柯胺B配制成系统适用性溶液；步骤2，供试品溶液制备：取甲磺酸苦柯胺B原料药配制成供试品溶液；步骤3，对照溶液的制备：取供试品溶液配制成对照溶液；步骤4，分别将系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，得到色谱图；步骤5，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中各已知杂质、未知杂质及总杂质的含量；其中，液相色谱的色谱条件如下：色谱柱：迪马DiamondC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-20mM四丁基氢氧化铵水溶液；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：1ml/min进样量10μL。色谱条件中，流动相为甲醇-20mM四丁基氢氧化铵水溶液，二者体积比为10:90-20:80，以浓氨水调溶液的pH值范围为2.5-3.5。具体的，本专利技术所述的检测方法，步骤如下：步骤1，系统适用性溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B,杂质1、杂质2、杂质3各1-4mg，同置于12.5-50ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到系统适用性溶液；步骤2，供试品溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B12.5-50mg，置于12.5-50ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到供试品溶液；步骤3，对照溶液的制备：精密量取供试品溶液0.5-2ml，置50-200ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到对照溶液；步骤4，注入液相色谱仪：分别精密吸取上述系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，得到色谱图；步骤5，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中各已知杂质、未知杂质及总杂质的含量；其中，液相色谱的色谱条件如下：色谱柱：迪马DiamondC18，型号250mm×4.6mm，5μm；流动相：甲醇-20mM四丁基氢氧化铵水溶液；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量10μL；流动相为甲醇-20mM四丁基氢氧化铵水溶液，二者体积比为10:90-20:80，以浓氨水调溶液的pH值范围为2.5-3.5。优选的，本专利技术所述的检测方法，步骤如下：步骤1，系统适用性溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B,杂质1、杂质2、杂质3各2mg，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到系统适用性溶液；步骤2，供试品溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B25mg，置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到供试品溶液；步骤3，对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到对照溶液；步骤4，注入液相色谱仪：分别精密吸取上述系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，得到色谱图，如附图1所示。步骤5，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中各已知杂质、未知杂质及总杂质的含量。其中，液相色谱的色谱条件如下：色谱柱：迪马DiamondC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-20mM四丁基氢氧化铵水溶液；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：1ml/min进样量10μL。色谱条件中，流动相为甲醇-20mM四丁基氢氧化铵水溶液，二者体积比为10:90-20:80，以浓氨水调溶液的pH值范围为2.5-3.5。本专利技术的检测方法是经过大量实验筛选和验证后得到的，筛选过程如下：1、系统适用性试验取杂质1、杂质2、杂质3、甲磺酸苦柯胺B对照品适量，加水溶解，制成含有杂质1、杂质2、杂质3、甲磺酸苦柯胺B浓度为80μg/ml的样品作为系统适用性溶液，进样测定。表1系统适用性试验结果物质名称浓度(μg/ml)保留时间(min)相对保留时间分离度杂质1803.2930.325.45杂质28013.5261.345.70杂质38028.2332.7915.20甲磺酸苦柯胺B8010.1231.0019.73表2系统适用性试验结果进样序列杂质1杂质2杂质3甲磺酸苦柯胺B18.7463.69104.2668.0028.7863.6999.5368.9738.4363.6794.3569.0448.4563.7191.4269.5758.3662.5686.7670.1068.3562.9584.9070.37平均峰面积8.5263.3893.5469.34RSD(％)2.250.797.951.24从上表中结果我们可以看出：各色谱峰之间的分离度符合规定，峰面积相对标准偏差符合规定。2、专属性试验2.1干扰及定位试验分别取供试品溶液、各杂质溶液、空白溶剂分别进样，各杂质与主峰均能达到完全分离，且空白溶剂不干扰测定。2.2破坏性实验取本品按下表中的方法进行酸、碱、高温和光照破坏性实验，用上述色谱条件检查降解产物。表3降解实验表由图可以看出，在本法色谱条件下，能够很好地检测出破坏后的各有关物质及降解产物，且杂质峰可分离完全，具体数据见表4。表4降解实验结果汇总因此，采用上述色谱条件来测定本品的有关物质及其降解产物可行。3、检测限定量限验证在本实验条件下，将杂质对照品溶液稀释进样检测，以信噪比S/N＝3计算，杂质1的检测限为37.5ng，杂质2的检测限为6.25ng，杂质3的检测限为4ng，色谱图见附图；以信噪比S/N＝10计算，杂质1的定量限为75ng，杂质2定量限为25ng，杂质3的定量限为16ng。4、线性验证分别称取杂质1、杂质2、杂质3、甲磺酸苦柯胺B对照品适量，用水溶解并稀释制成每1ml约含杂质1、杂质2、杂质3、甲磺酸苦柯胺B为0.1mg的溶液，作为对照储备液，分别精密量取对照储备液适量置于量瓶中，用水稀本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甲磺酸苦柯胺B的含量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，系统适用性溶液制备：取杂质1、杂质2、杂质3及甲磺酸苦柯胺B配制成系统适用性溶液；步骤2，供试品溶液制备：取甲磺酸苦柯胺B原料药配制成供试品溶液；步骤3，对照溶液的制备：取供试品溶液配制成对照溶液；步骤4，分别将系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，得到色谱图；步骤5，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中各已知杂质、未知杂质及总杂质的含量；其中，液相色谱的色谱条件如下：色谱柱：迪马Diamond C18，型号250mm×4.6mm，5μm；流动相：甲醇‑20mM四丁基氢氧化铵水溶液；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：1ml/min，进样量10μL，其中，所述杂质1‑3的化学结构如下：杂质1：杂质2：杂质3：

【技术特征摘要】
1.一种甲磺酸苦柯胺B有关物质检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，系统适用性溶液制备：取杂质1、杂质2、杂质3及甲磺酸苦柯胺B配制成系统适用性溶液；步骤2，供试品溶液制备：取甲磺酸苦柯胺B原料药配制成供试品溶液；步骤3，对照溶液的制备：取供试品溶液配制成对照溶液；步骤4，分别将系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，得到色谱图；步骤5，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中各已知杂质、未知杂质及总杂质的含量；其中，液相色谱的色谱条件如下：色谱柱：迪马DiamondC18，型号250mm×4.6mm，5μm；流动相：甲醇-20mM四丁基硫酸氢铵水溶液，二者体积比为10:90-20:80，以浓氨水调溶液的pH值范围为2.5-3.5；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：1ml/min，进样量10μL，其中，所述杂质1-3的化学结构如下：杂质1：杂质2：杂质3：2.根据权利要求1所述的有关物质检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，系统适用性溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B,再分别称取杂质1、杂质2、杂质3各1-4mg，同置于12.5-50ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到系统适用性溶液；步骤2，供试品溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B12.5-50mg，置于12.5-50ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到供试品溶液；步骤3，对照溶液的制备：精密量取供试品溶液0.5-2ml，置50-200ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到对照溶液；步骤4，注入液相色谱仪：分别精密吸取上述系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，得到色谱图；步骤5，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中各已知杂质、未知杂质及总杂质的含量；其中，液相色谱的色谱条件如下：色谱柱：迪马DiamondC18，型号250mm×4.6mm，5μm；流动相：甲醇-20mM四丁基硫酸氢铵水溶液，二者体积比为10:90-20:80，以浓氨水调溶液的pH值范围为2.5-3.5；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量10μL。3.根据权利要求1所述的有关物质检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，系统适用性溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B,再分别称取杂质1、杂质2、杂质3各2mg，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到系统适用性溶液；步骤2，供试品溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B25mg，置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到供试品溶液；步骤3，对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到对照溶液；步骤4，注入液相色谱仪：分别精密吸取上述系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，得到色谱图；步骤5，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中各已知杂质、未知杂质及总杂质的含量；其中，液相色谱的色谱条件如下：色谱柱：迪马DiamondC18，型号250mm×4.6mm，5μm；流动相：甲醇-20mM四丁基硫酸氢铵水溶液，二者体积比为10:90-20:80，以浓氨水调溶液的pH值范围为2.5-3.5；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：1ml/min；进样量10μL。4.根据权利要求1所述的有关物质检测方法，其特征在于，步骤如下：步骤1，系统适用性溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B25mg，杂质1、杂质2、杂质3各2mg，同置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到系统适用性溶液；步骤2，供试品溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B25mg，置于25ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到供试品溶液；步骤3，对照溶液的制备：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到对照溶液；步骤4，注入液相色谱仪：分别精密吸取上述对照溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算，即得；其中，液相色谱...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩冬，王琳琳，董凯，孙长海，姚小青，
申请(专利权)人：天津红日药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12