制备高纯去铁胺甲磺酸盐的多步法制造技术

本发明专利技术提供一种纯化方法，其中通过微生物生产并处于与其它通过微生物生产的多异羟肟酸盐的混合物中的去铁胺Ｂ可以转化为基本上不合其它多异羟肟酸盐和基本上不含氯离子的其甲磺酸盐。所述方法包括去铁胺Ｂ在吸附树脂上的吸附及解吸附过程，去铁胺游离碱从来自于吸附树脂的洗脱液中的直接沉淀，将去铁胺Ｂ游离碱与甲磺酸接触以及通过沉淀分离去铁胺Ｂ甲磺酸盐。该方法将去铁胺Ｂ的分解降到最小。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请根据35 U.S.C.§119，本申请要求1999年12月1日提出的匈牙利专利申请P 99 04454的优先权。有人指出，去铁胺B可用于处理由于输血性贫血引起的急性铁中毒和慢性铁过载。它能促进重复输血引起中等铁过载的病人的铁排泄，并可以用于处理一些慢性贫血，如地中海贫血症。长期治疗可减慢肝脏铁的积聚和阻止或消除肝脏纤维化的进展。参见Physicians DeskReference 2010(第54版，1999)。去铁胺B不能很好地经口吸收；它必须不经肠道给药。用于制备去铁胺B的大规模发酵方法是在一种缺铁培养介质中使用链霉菌属pilosus细菌菌株，它能制备各种各样的多异羟肟酸盐化合物，但主要是去铁胺B。参见比利时专利619,532。通常，去铁胺B从发酵液中以盐酸盐的形式分离出来。该盐酸盐不是药学上接受的用于对人体实行肠胃外投药的盐。因此，必须将它转化为一种药学上可接受的盐。甲磺酸盐盐是FDA批准的去铁胺盐。U.S.Pharmacopeia &National Formulary指出，药品级去铁胺B甲磺酸盐含有不超过120ppm的氯化物。参见，USP/NF 24/19，499-500页(1999)。业已证明，这是需要满足的一个富有挑战性的标准，需要有一种改进的方法将由发酵生产的去铁胺B转化成可施药于病人的药学上可接受的纯甲磺酸盐。比利时专利619,532公开了使用吸附色谱法纯化经发酵获得的去铁胺B的方法。活性碳、活化硅藻土(例如漂白土)或离子交换树脂(Asmit)被推荐为吸附剂。据称供选择的吸附剂包括氧化铝、硅酸镁、硅胶、石膏和离子交换树脂。根据比利时专利619,532，可以使用甲醇-水、吡啶-水或乙酸-甲醇流动相洗脱去铁胺B。国际公开WO 93/09088和欧洲专利EP 347163描述了硅胶色谱法作为纯化由合成方式，而不是微生物方式生产的去铁胺B的方法。国际公开WO 93/03045描述了使用聚苯乙烯吸附树脂纯化去铁胺B的铁螯合物配合物和在结构上相关的化合物的方法。U.S.专利3,153,621和3,118,823公开了使用离子交换树脂分离纯化去铁胺B的方法。人们相信这些专利的教导会产生由链霉菌属pilosus菌株生产的含有其它多异羟肟酸盐的去铁胺B。比利时专利616,139公开了可以通过使去铁胺盐酸盐水溶液经由Dowex-1、X-16阴离子交换树脂(呈OH-形式)，然后在得到的去铁胺碱水溶液中加入等当量的甲磺酸，之后蒸发除去水，最后通过重结晶从含水酒精或水-甲醇-丙酮混合物中提纯去铁胺甲磺酸盐而从去铁胺B盐酸盐中获得去铁胺B甲磺酸盐。U.S.专利5,374,771描述了通过离子交换色谱和多次重结晶而纯化粗去铁胺B的方法。所述甲磺酸盐可以通过将纯化的去铁胺B盐酸盐与含有甲磺酸盐反离子的阴离子交换树脂接触而直接进行制备。通过冷冻干燥从水溶液中获得去铁胺B甲磺酸盐。Bickel H.等人在Helvetica Chimica Acta，1385-1389(1963)中描述了通过多次重结晶从水和酒精混合液中提纯去铁胺B碱。通过阴离子交换、蒸发干燥和多次重结晶制备去铁胺B碱。然后将去铁胺B碱悬浮在水与甲醇混合液中并制备一种无机酸盐。随后蒸发去铁胺B溶液，并从水与甲醇混合液中重结晶残余物。从去铁胺B水溶液中去除氯离子是上述从发酵液中纯化去铁胺B的每一种方法中的一个步骤。在所有情况下，均使用阴离子交换树脂除去氯离子。但是，单独使用离子交换树脂对于分离不含氯离子的去铁胺B甲磺酸盐并不是有效的，比如为了获得药学上可接受的纯度时所要求的去铁胺B甲磺酸盐。使用硅胶或氧化铝作为吸附剂的上述提纯方法效率低、费时又费钱。其它常规的代用品--活性炭、硅藻土、硅酸镁、和石膏--对于去铁胺是一种差的吸附剂。为此，在本领域中需要一种快速、有效和廉价的从发酵液中获得不含氯离子、或至少氯阴离子含量不大于120ppm的去铁胺B甲磺酸盐的方法。此外，上述方法不能有效地除去在结构上与去铁胺B相关的发酵产品，其必须在去铁胺B用于药剂之前被除去。通常，来自于生产去铁胺的发酵液的提取物含有，相对于去铁胺B的含量大约为6-20摩尔％的在结构上与去铁胺B相关的多异羟肟酸盐化合物，这种化合物包括其它去铁胺，如去铁胺A、C、D1、D2、E、F和G。因为去铁胺B和其它的去铁胺具有类似的化学性质，所以还没有已知的净化方法或其结合能将杂质的量降低到约2.5％以下。除了它们不确定的治疗效果和可能的毒性效果之外，为了准确确定溶液，如灭菌注射液中去铁胺B的浓度而除去这些杂质是很重要的。USP/NF明确说明了去铁胺B注射液中含有90.0-110％的标称浓度。见USP/NF 24/19，500页(1999)。用于确定USP/NF中所述浓度的试验是在485nm处测定铁配合物的光度学吸收率强度。同样，在结构上相关的杂质也能形成在485nm范围内产生吸收的配合物，从而导致会过高估计去铁胺B含量。我们已经发现，根据本领域已知的方法通过发酵获得的去铁胺B甲磺酸盐溶液的光度学的试验会将去铁胺B的浓度过高估计约3％。由此，在本领域中需要一种快速、有效和廉价的方法用来从发酵液获得不含由链霉菌属(例如pilosus或101/87)代谢过程形成的其它多异羟肟酸盐以及氯离子的去铁胺B甲磺酸盐。因此，我们已经发现，为了有效地除去氯化物和多异羟肟酸盐杂质，将分解产物的形成减到最少，和将它们分离到其形成不可避免的程度上，应该连续地应用吸附树脂色谱法、从水和水溶性的有机溶剂的混合物中沉淀去铁胺B游离碱、形成去铁胺甲磺酸盐和从水和甲磺酸盐反溶剂的混合物或甲醇和甲磺酸盐反溶剂的混合物中将盐结晶出来。该方法生产的去铁胺B甲磺酸盐含有低于2.5摩尔％的其它多异羟肟酸盐杂质和90ppm以下的氯离子。专利技术的详细说明本专利技术提供一种用于从含有微生物方法生产的去铁胺B的原材料中生产高纯去铁胺B甲磺酸盐的纯化方法。该纯化方法可大规模实施，与其它已知的纯化方法相比，经济效益高。用于生产去铁胺B的微生物方法在本领域中是已知的、如描述于U.S.专利3,158,552中方法，其整体在此引入作为参考。如该552专利所描述，链霉菌属pilosus培养在一种铁含量低的浸没介质中以促进去铁胺的生产，微生物使用去铁胺从环境中提取铁。在发酵结束时，通过加入有竞争力的铁螯合剂，8-羟基喹啉而解脱去铁胺B与培养介质中的Fe3+络合。然后，将发酵液过滤以除去细胞团块，得到含有去铁胺B的水溶液。在另外加工之后，呈现与其它去铁胺混合物形式的去铁胺B盐酸盐从水溶液中沉淀出来。本专利技术的方法可以应用于从发酵液中获得的在进行加工，如552专利描写的浓缩或萃取或如U.S.专利5,374,771描写的加工后得到的原材料。同样，含有去铁胺B的蒸发的发酵液提取物可以以含水或者有机溶剂的形式进行处理并用作获得去铁胺B的原材料。优选，去铁胺B的原材料是去铁胺B浓度为约5-约70g/L-1，更优选约10-约30g/L-1的水溶液。纯化方法还被描述为它适用于这样一种去铁胺B水溶液(下文称粗去铁胺B溶液)。本专利技术的纯化方法包括三个阶段。第一，与去铁胺B在化学上不相关的杂质和极性显著不同的相关物质通过吸附树脂色谱法除去。第二，通过将去铁胺B本文档来自技高网...

【技术保护点】
从含有由微生物方法生产的去铁胺Ｂ的原材料中分离去铁胺Ｂ甲磺酸盐的方法，包括如下步骤：ａ）通过将原材料与吸附树脂接触而将去铁胺Ｂ吸附到吸附树脂上，ｂ）通过用水与水溶性有机洗脱溶剂的混合物洗脱已经将去铁胺Ｂ吸附其上的吸附树脂而得到含有去 铁胺Ｂ的洗脱液，ｃ）用碱性离子交换树脂或碱性溶液或两者都用将洗脱液的ｐＨ调节到约８．６－１０．５，ｄ）通过加入去铁胺Ｂ游离碱反溶剂，任选在将洗脱液部分浓缩到去铁胺Ｂ浓度不超过１５０ｇＬ↑［－１］之后，从已调节了ｐＨ的洗脱液中结晶去铁 胺Ｂ游离碱，ｅ）将去铁胺Ｂ游离碱悬浮到包括去铁胺Ｂ甲磺酸盐反溶剂和选自水与甲醇的去铁胺Ｂ甲磺酸盐溶剂的混合溶剂中，ｆ）通过将悬浮液与甲磺酸接触将去铁胺Ｂ游离碱溶解于混合溶剂中，和ｇ）沉淀去铁胺Ｂ甲磺酸盐。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】HU 1999-12-1 P99044541.从含有由微生物方法生产的去铁胺B的原材料中分离去铁胺B甲磺酸盐的方法，包括如下步骤a)通过将原材料与吸附树脂接触而将去铁胺B吸附到吸附树脂上，b)通过用水与水溶性有机洗脱溶剂的混合物洗脱已经将去铁胺B吸附其上的吸附树脂而得到含有去铁胺B的洗脱液，c)用碱性离子交换树脂或碱性溶液或两者都用将洗脱液的pH调节到约8.6-10.5，d)通过加入去铁胺B游离碱反溶剂，任选在将洗脱液部分浓缩到去铁胺B浓度不超过150gL-1之后，从已调节了pH的洗脱液中结晶去铁胺B游离碱，e)将去铁胺B游离碱悬浮到包括去铁胺B甲磺酸盐反溶剂和选自水与甲醇的去铁胺B甲磺酸盐溶剂的混合溶剂中，f)通过将悬浮液与甲磺酸接触将去铁胺B游离碱溶解于混合溶剂中，和g)沉淀去铁胺B甲磺酸盐。2.权利要求1的方法，还包括将原材料通过吸附树脂预分离柱床的预备步骤。3.权利要求1的方法，还包括在原材料中加入无机盐的预备步骤。4.权利要求3的方法，其中无机盐为氯化铵或硫酸铵。5.权利要求1的方法，其中吸附树脂用水和一种选自甲醇、乙醇、乙腈和四氢呋喃的水溶性有机溶剂的混合物洗脱。6.权利要求5的方法，其中水溶性的有机溶剂为乙腈。7.权利要求1的方法，还包括在调节洗脱液pH前对洗脱液脱色的中间步骤。8.权利要求1的方法，还包括在调节洗脱液pH前调节洗脱液去铁胺B浓度的步骤。9.权利要求8的方法，其中通过蒸发将洗脱液中去铁胺B浓度调节到约50gL-1-约150gL-1。10.权利要求9的方法，其中将去铁胺B浓度调节到约80gL-1-约100gL-1。11.权利要求10的方法，其中将去铁胺B的浓度调节到约90gL-1。12.权利要求8的方法，还...

【专利技术属性】
技术研发人员：V克里，Z措维克，A梅佐，
申请(专利权)人：拜奥盖尔药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：HU[匈牙利]