核酸衍生物的制备方法技术

本发明专利技术涉及作为药物具有有用的生理活性且低毒性的核酸衍生物。在以ＲＮＡ为基体的双键核酸衍生物中，在沉降定值下，全体分子大小分布在４Ｓ—１３Ｓ范围内，其中最大分布的分子，以碱基数表示，在５０—１０，０００范围内．本发明专利技术核酸衍生物可以维持高的生理活性，具有高的安全性。作为药物给药时，本发明专利技术核酸衍生物可以直接或者以在医药上可按受的无毒且惰性的载体中含有０．１—９９．５％，最好为０．５—９０％的医药组成物，给药于包括人在内的动物。（*该技术在2008年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及作为药物具有有用的生理活性且毒性低的核酸衍生物。核酸是核糖等的糖结合在嘌呤环或者嘧啶环上，由磷酸介于它们之间以链相连而成。核酸中的RNA(核糖核苷酸聚合物)是链状高分子化合物，它具有核糖作为糖，糖部分以磷酸的二酯键相连接。构成核酸的碱(例如肌苷、腺苷、胞苷、尿苷等)的嘌呤环或得嘧啶环部分两条链以所谓互补的方式由氢键相连，构成螺旋状的立体结构。由于具有两条链的核酸可以期待具有有用的生理活性，故至今，已有很多的研究。在本说明书中，其中把作为合成双链RNA的多聚肌苷酸多聚胞苷酸衍生物称之“polyI·polyC”衍生物，把其构成单元即多聚肌苷酸称之“polyI”，而把多聚胞苷酸称之“polyC”。近年来，人们业已知道，各种天然或合成的双链RNA具有干扰素产生能。以上经整理，归纳如下表作为干扰素·衍生物的合成核酸衍生物的一览表(Ⅰ)均聚物·均聚物复合体(以polyI·polyC作基体的双链核酸聚合物)(1)改性碱多聚肌苷酸·多聚(5-溴代胞苷酸)，多聚肌苷酸·多聚(2-硫代胞苷酸)，多聚(7-脱氮杂肌苷酸)·多聚胞苷酸，多聚(7-脱氮杂肌苷酸)·多聚(5-溴代胞苷酸)。(2)改性糖多聚(2′-叠氮肌苷酸)·多聚胞苷酸。(3)改性磷酸多聚肌苷酸·多聚(胞苷-5′-硫代磷酸)。(Ⅱ)交替变换共聚物多聚(腺苷酸-尿苷酸)。(Ⅲ)均聚物·共聚物复合体多聚肌苷酸·多聚(胞苷酸、尿苷酸);多聚肌苷酸·多聚(胞苷酸、4-硫代尿苷酸)。(Ⅳ)合成核酸与聚阳离子的复合体多聚肌苷酸·多聚胞苷酸·多聚-L-赖氨酸(称之“polyICLC”)。(Ⅴ)其他多聚肌苷酸·多聚(1-乙稀基胞苷酸)。如上所述，近年来已发表了许多双链RNA，特别是以polyI·polyC作基体的衍生物的报告。而且，有一篇有关含有它们的一系列核酸衍生物及其结构活性的综述。在文章中，特别叙述了核酸聚合物要具有干扰素产生能，则定必需是4S以上的高分子。polyI·polyC的其他生理作用人们已知的是具有阻止动物移植癌的增殖效果。据认为，其中不包括有助于生物体免疫活化作用。如上所述，过去曾期待，polyI·polyC以其抗病毒作用和抗癌作用在临床上的应用，但是了解到它具有预料不到的强毒性后，施用于人便成问题了。即使这样，现在，还在用polyI·polyC的衍生物作治疗试验。Levy研制了具有强的干扰素产生活性的polyICLC。上述的polyI·polyC及其衍生物的确可以充分地期待其具有有用的效果，但是在很多情况下其毒性也是不能否定的。为了达到施用于生物体的目的，还得想一些办法。本专利技术人以现有技术为基础，在多年的研究过程中，发现把双链核酸衍生物的链的长度控制在一定的范围内，它就具有必要的生理活性，同时显著地减少了它的毒性，从而完成本专利技术。因此，本专利技术的目的在于把双链核酸聚合物的链的长度限定在一定的范围内。本专利技术人最初对市售或者由通常反应合成的polyI·polyC具有毒性这一事很感兴趣，不断研究其产生原因，从而获得一定的成果。也就是说，本专利技术人把输癌小鼠的癌细胞阻止作用和对小鼠骨髓干细胞障碍性作为指标同时进行研究，结果了解清楚以下的事实，即在核酸聚合物的沉降为定值且其分子大小分布在13S以上的情况下，则它既有活性又有毒性，在处于4S-13S范围内时，它有活性但毒性显著减少，进而在4S以下的情况下，则它没有毒性，但活性也几乎消失了。polyI·polyC若在4S以下，则活性也消失，这与上述デクラ-ク等人的看法几乎是一致的，但是有关链长与毒性的关系的研至今尚没有人做过。以下这件事是本专利技术者最初发现的，就是使polyI·polyC及其衍生物的毒性显著地减少的第一因素是把核酸聚合物的分子大小(链长)控制在一定的范围内。其中，应当控制的分子大小的分布，在沉降定值下最好在4S-13S(碱基数为50-10000左右)的范围内。这时的最大分布的链长通常在100-600碱基数附近。作为表示核酸的分子大小的单位常用的碱基对(以下称“bp”)，是由核酸的碱基数来表示其分子的大小(10bp表示为具有10个碱基对的双链聚合物)。在本说明书中，因为还要处理双链聚合物以外的核酸聚合物，故而使用“碱基数”的术语代替bp(例如，所谓“10碱基数则表示具有10个碱基的核酸聚合物)。当要使核酸的分子大小特定时，则广泛地使用通常的沉降定值(S值)，本专利技术人把具有已知分子大小的双链DNA(M13噬菌体片断)作为对照组，采用下述的用凝胶过滤柱的高效液相色谱法(HPLC)或者电泳法，通过与其对照组进行比较换算，可求得上述的碱基数。以往，在表示核酸高分子的分子量时。曾广泛地用沉降定值(S值)。现在市售的核酸高分子也以S值表示。但是，由于近年来实验技术的进步，采用了凝胶电泳法、凝胶过滤色谱法、离子交换色谱法等，确立了更精确地测定分子量的手段，现在已经可以对其链长作测定。因此存在的问题是S值表示与链长表示的关系，而由于用S值表示时各个核酸分子是取固有的值，因此从作为表示核酸的分子量的方法，S值表示和链长表示是否能正确适应的意义上看，并不是没有问题。在本专利技术的说明书中，当表示分子量时，按照至今的核酸化学的惯例，本专利技术人也记载了S值表示。但是，因为S值表示是把核酸高分子作为整个分子的集团(或者分子形态)来进行测定的方法，故今后有必要更明确地表现分子量分布的界限，因此把基于链长(本说明书中为“碱基数”)测定的表示值也一并记载。作为本专利技术的核酸衍生物可以列举出一些把上述合成核酸衍生物的一览表中所述的衍生物经定尺寸(短链化)的衍生物。这时，是具有与polyI·polyC相同的基本结构的衍生物，而本专利技术核酸衍生物的特征在于对其分子大小分布进行了特定。作为本专利技术的核酸衍生物可以列举出诸如以下的一些衍生物。多聚肌苷酸·多聚(5-溴代胞苷酸，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。多聚肌苷酸·多聚(2-硫代胞苷酸)，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。多聚(7-脱氮杂肌苷酸)·多聚胞苷酸，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。多聚(7-脱氮杂肌苷酸)·多聚(5-溴代胞苷酸)，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。多聚(2′-叠氮肌苷酸)·多聚胞苷酸，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。多聚肌苷酸·多聚(胞苷-5′-硫代磷酸)，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。多聚(腺苷酸-尿苷酸)，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。多聚肌苷酸·多聚(胞苷酸、尿苷酸)，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。多聚肌苷酸·多聚(胞苷酸、4-硫代尿苷酸)，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。多聚肌苷酸·多聚胞苷酸·多聚-L-赖氨酸，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。多聚肌苷酸·多聚(1-乙烯基胞苷酸)，S值为4-13，最大分布的分子以碱基数表示最好为100-600。制备本专利技术核酸衍生物时，可以通过使上述的聚合物和上述一览表中所列的聚合物衍生物的磷酸一侧的本文档来自技高网...

【技术保护点】
核酸衍生物，其特征在于在以ＲＮＡ为基体的双链核酸衍生物中，全体分子大小分布，以沉降定值表示，集中在４Ｓ－１３Ｓ范围内。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：矢野纯一，大木忠明，
申请(专利权)人：日本新药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]