人源化C5和C3动物制造技术

提供了包含人或人源化C3和/或C5核酸序列的非人动物以及使用其来鉴定能够调控补体系统的化合物的方法。描述了包含人或人源化C5基因和/或C3基因对内源C5基因和/或C3基因的替换的非人动物，以及生成和使用该非人动物的方法。还提供了包含在非人C5调节元件控制下的人或人源化C5基因的非人动物，包括具有内源非人C5基因座处人C5编码序列对非人C5编码序列的替换的非人动物。还提供了包含在非人C3调节元件控制下的人或人源化C3基因的非人动物，包括具有内源非人C3基因座处人或人源化C3蛋白编码序列对非人C3蛋白编码序列的替换的非人动物。提供了包含人或人源化C3和/或C5序列的非人动物，其中该非人动物是啮齿动物，例如小鼠或大鼠。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人源化C5和C3动物对相关申请的交叉援引本申请要求于2014年5月5日提交的美国临时专利申请No.61/988,581和于2014年10月23日提交的美国临时专利申请No.62/067,836的优先权，通过援引将每篇的公开内容完整收入本文。专利
本文中公开了包含编码包含人序列的C3蛋白和/或C5蛋白的核酸序列的非人动物以及包含整个或部分人的C3和/或C5基因的转基因非人动物。本文中还公开了表达人或人源化C3和/或C5蛋白的非人动物和使用包含人或人源化C3和/或C5核酸序列的非人动物的方法。专利技术背景补体蛋白C5和C3是用于治疗与补体活化有关的多种人疾病，病症和状况(例如眼炎症和视网膜变性疾病)的治疗性靶物。在非人动物，例如啮齿动物，例如小鼠或大鼠中例行实施特异性靶向人C5或人C3蛋白的治疗性分子的药动学(PK)和药效学(PD)的评估。然而，由于这些治疗性分子不靶向内源C5或C3蛋白，在某些非人动物中不能正确测定此类治疗性分子的PD。此外，在与活化的补体系统有关的疾病的各种非人动物模型中评估人特异性C5或C3蛋白拮抗剂的治疗功效在此类物种特异性拮抗剂不与内源C5或C3蛋白相互作用的非人动物中是成问题的。因而，需要如下的非人动物，例如啮齿动物，例如鼠类动物，例如小鼠或大鼠，其中所述非人动物的C5和/或C3基因是整个或部分人源化的或者是用包含分别编码人或人源化C5和/或C3蛋白的序列的人C5和/或C3基因替换的(例如，在内源非人基因座处)。需要以分别与分别表达功能性C5和/或C3蛋白但不包含人或人源化C5和/或C3基因的年龄匹配非人动物的血清中存在的C5和/或C3蛋白的浓度相似的浓度在血清中表达人或人源化C5和/或C3蛋白的此类人源化非人动物。贯穿本说明书，援引了多份专利，专利申请和其它类型的出版物(例如，期刊论文，电子数据库条目，等)。在此通过援引完整收录本文中引用的所有专利，专利申请，和其它出版物的公开内容用于所有目的。专利技术概述提供了非人动物，其包含编码包含人序列的C3和/或C5的核酸序列。提供了转基因非人动物，其包含整个或部分人的C3和/或C5基因。提供了非人动物，其表达人或人源化C3和/或C5蛋白。提供了非人动物，其具有内源非人动物C5和/或C3基因的替换(整个或部分)。提供了非人动物，其包含内源非人C5和/或C3基因座处的C5和/或C3人源化(整个或部分)。提供了具有人或人源化C5和/或C3基因的非人动物，其中所述非人动物不表达内源C5和/或C3蛋白，并且以分别与表达功能性内源C5和/或C3蛋白但不包含所述替换的年龄匹配非人动物的血清中存在的C5和/或C3蛋白的浓度相似的浓度在血清中表达人或人源化C5和/或C3蛋白。在一个方面，提供了包含人或人源化C3和/或C5核酸序列的非人动物。在一个方面，提供了经遗传修饰的非人动物，其包含内源C5和/或C3基因座处编码人或人源化C5和/或C3蛋白的基因对编码内源C5和/或C3的基因的替换。提供了如下的啮齿动物，例如小鼠或大鼠，其包含内源啮齿动物C5基因座处人C5基因对内源C5基因的替换，和/或包含内源啮齿动物C3基因座处人C3基因对内源C3基因的替换。在一个实施方案中，所述啮齿动物是小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是大鼠。在一个方面，提供了经遗传修饰的啮齿动物，例如小鼠或大鼠，其包含内源啮齿动物C5基因座处编码人或人源化C5蛋白的人C5基因对编码C5蛋白的啮齿动物基因的替换，其中编码人或人源化C5蛋白的所述人C5基因的表达在所述内源啮齿动物C5基因座处的啮齿动物调节元件的控制下。在一个实施方案中，所述啮齿动物是小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是大鼠。在一个实施方案中，编码人或人源化C5蛋白的所述人C5基因包含人C5基因的外显子2到外显子41。在一个实施方案中，所述啮齿动物是不能表达小鼠C5蛋白的小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是表达由内源小鼠C3基因编码的小鼠C3蛋白的小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是表达人或人源化C3蛋白的小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是小鼠，其包含内源小鼠C3基因座处编码人或人源化C3蛋白的人C3基因对编码C3蛋白的小鼠基因的替换。在一个实施方案中，编码人或人源化C3蛋白的所述人C3基因的表达在所述内源小鼠C3基因座处的小鼠调节元件的控制下。在一个方面，提供了经遗传修饰的啮齿动物，例如小鼠或大鼠，其包含内源啮齿动物C3基因座处编码人或人源化C3蛋白的人C3基因对编码C3蛋白的啮齿动物基因的替换，其中编码人或人源化C3蛋白的所述人C3基因的表达在所述内源啮齿动物C3基因座处的啮齿动物调节元件的控制下。在一个实施方案中，所述啮齿动物是小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是大鼠。在一个实施方案中，编码人或人源化C3蛋白的所述人C3基因包含人C3基因的外显子1到外显子41。在一个实施方案中，编码人或人源化C3蛋白的所述人C3基因包含人C3基因的外显子2到外显子41。在一个实施方案中，所述啮齿动物是不能表达小鼠C3蛋白的小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是表达由内源小鼠C5基因编码的小鼠C5蛋白的小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是表达人或人源化C5蛋白的小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是小鼠，其包含内源小鼠C5基因座处编码人或人源化C5蛋白的人C5基因对编码C5蛋白的小鼠基因的替换。在一个实施方案中，编码人或人源化C5蛋白的所述人C5基因的表达在所述内源小鼠C5基因座处的小鼠调节元件的控制下。在一个方面，提供了表达人或人源化C5蛋白的经遗传修饰的啮齿动物，例如小鼠或大鼠，其中表达人或人源化C5蛋白的啮齿动物包含正常的补体系统，例如表达人或人源化C5蛋白的啮齿动物的血液，血浆或血清中补体蛋白的水平与表达功能性内源C5蛋白的啮齿动物的血液，血浆或血清中补体蛋白的水平相似。在一个实施方案中，所述啮齿动物是小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是大鼠。在一个方面，提供了从人C5基因表达C5蛋白的经遗传修饰的啮齿动物，例如小鼠或大鼠，其中所述啮齿动物在其血清中表达人或人源化C5蛋白。在一个实施方案中，所述啮齿动物是小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是大鼠。在一个实施方案中，表达人或人源化C5蛋白的啮齿动物的血清与表达功能性内源C5蛋白的啮齿动物(例如野生型小鼠或大鼠)具有大致相同的C5蛋白水平。在一个实施方案中，所述啮齿动物是小鼠。在一个实施方案中，所述啮齿动物是大鼠。在一个实施方案中，所述小鼠以表达功能性内源C5蛋白但不包含内源小鼠C5基因座处人C5基因对内源C5基因的替换的年龄匹配小鼠的血清中存在的C5蛋白的水平的至少约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，100％，110％，120％，130％，140％，150％，160％，170％，180％，190％或200％的浓度在血清中表达人或人源化C5蛋白。在一个实施方案中，所述小鼠以表达功能性内源C5蛋白但不包含内源小鼠C5基因座处人C5基因对内源C5基因的替换的年龄匹配小鼠的血清中存在的小鼠C5蛋白水平的约10％和约200％之间，约20％和约150％之间，或约30％和约100％之间的浓度在血清中表达人或人源化C5蛋白。在一个实本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种啮齿动物，其包含内源啮齿动物C5基因座处编码人C5基因的至少一个外显子的核酸序列对编码C5基因的外显子的啮齿动物基因序列的替换以形成经修饰的C5基因，其中所述经修饰的C5基因的表达在所述内源啮齿动物C5基因座处的啮齿动物调节元件的控制下。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.05 US 61/988,581;2014.10.23 US 62/067,8361.一种啮齿动物，其包含内源啮齿动物C5基因座处编码人C5基因的至少一个外显子的核酸序列对编码C5基因的外显子的啮齿动物基因序列的替换以形成经修饰的C5基因，其中所述经修饰的C5基因的表达在所述内源啮齿动物C5基因座处的啮齿动物调节元件的控制下。2.权利要求1的啮齿动物，其中所述啮齿动物是小鼠或大鼠。3.权利要求1或权利要求2的啮齿动物，其中编码人C5蛋白的所述人C5基因包含人C5基因的外显子2到外显子41。4.权利要求1-3中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是不能表达小鼠C5蛋白的小鼠。5.权利要求1-4中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是表达由内源小鼠C3基因编码的小鼠C3蛋白的小鼠。6.权利要求1-5中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是表达人或人源化C3蛋白的小鼠。7.权利要求6的啮齿动物，其中所述小鼠包含内源小鼠C3基因座处编码人C3蛋白的人C3基因对编码C3蛋白的小鼠基因的替换。8.权利要求6或权利要求7的啮齿动物，其中所述人C3基因的表达在所述内源小鼠C3基因座处的小鼠调节元件的控制下。9.权利要求1-9中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是以表达功能性内源小鼠C5蛋白但不包含所述替换的年龄匹配小鼠的血清中存在的小鼠C5蛋白水平的至少约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，100％，110％，120％，130％，140％，150％，160％，170％，180％，190％或200％的浓度在血清中表达人C5蛋白的小鼠。10.权利要求1-10中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是以表达功能性内源C5蛋白但不包含所述替换的年龄匹配小鼠的血清中存在的小鼠C5蛋白水平的约10％和约200％之间，约20％和约150％之间，或约30％和约100％之间的浓度在血清中表达人C5蛋白的小鼠。11.权利要求1-11中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是以约10μg/ml和约150μg/ml之间，约10μg/ml和约125μg/ml之间，或约15μg/ml和约100μg/ml之间的浓度在血清中表达人C5蛋白的小鼠。12.权利要求1-12中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是以至少约10，20，30，40，50，60，70，80，90，100，125或150μg/ml的浓度在血清中表达人C5蛋白的小鼠。13.一种啮齿动物，其包含内源啮齿动物C3基因座处编码人C3基因的至少一个外显子的核酸序列对编码C3基因的外显子的啮齿动物基因序列的替换以形成经修饰的C3基因，其中所述经修饰的C3基因的表达在所述内源啮齿动物C5基因座处的啮齿动物调节元件的控制下。14.权利要求13的啮齿动物，其中所述啮齿动物是小鼠或大鼠。15.权利要求13或权利要求14的啮齿动物，其中编码人C3蛋白的所述人C3基因包含人C3基因的外显子1到外显子41。16.权利要求13-15中任一项的啮齿动物，其中编码人C3蛋白的所述人C3基因包含人C3基因的外显子2到外显子41。17.权利要求13-16中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是不能表达小鼠C3蛋白的小鼠。18.权利要求13-17中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是表达由内源小鼠C5基因编码的小鼠C5蛋白的小鼠。19.权利要求18或权利要求19的啮齿动物，其中所述小鼠表达人或人源化C5蛋白。20.权利要求19的啮齿动物，其中所述小鼠包含内源小鼠C5基因座处编码人C5蛋白的人C5基因对编码C5蛋白的小鼠基因的替换。21.权利要求19或权利要求20的啮齿动物，其中所述人C5基因的表达在所述内源小鼠C5基因座处的小鼠调节元件的控制下。22.权利要求13-21中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是以表达功能性内源小鼠C3蛋白但不包含所述替换的年龄匹配小鼠的血清中存在的小鼠C3蛋白水平的至少约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，100％，110％，120％，130％，140％，150％，160％，170％，180％，190％或200％的浓度在血清中表达人C3蛋白的小鼠。23.权利要求13-22中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是以表达功能性内源小鼠C3蛋白但不包含所述替换的年龄匹配小鼠的血清中存在的小鼠C3蛋白水平的约10％和约200％之间，约20％和约150％之间，或约30％和约100％之间的浓度在血清中表达人C3蛋白的小鼠。24.权利要求13-23中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是以约100μg/ml和约1500μg/ml之间，约200μg/ml和约1250μg/ml之间，或约300μg/ml和约1000μg/ml之间的浓度在血清中表达人C3蛋白的小鼠。25.权利要求13-24中任一项的啮齿动物，其中所述啮齿动物是以至少约100，200，300，400，500，600，700，800，900，1000，1250或1500μg/ml的浓度在血清中表达人C3蛋白的小鼠。26.一种用于生成人源化啮齿动物的方法，其包括用包含编码人或人源化C5蛋白的人C5基因序列的一个或多个外显子的人C5基因序列替换编码啮齿动物C5蛋白的啮齿动物C5基因序列，其中所述替换在内源啮齿动物C5基因座处，并且将包含编码人或人源化C5蛋白的人C5基因序列的一个或多个外显子的所述人C5基因序列与所述内源啮齿动物C5基因座处的啮齿动物调节元...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y·胡，A·阿特斯泽克，J·曹，A·穆伊察，S·威甘德，J·麦克沃特，A·墨菲，L·麦克唐纳，
申请(专利权)人：再生元制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US