一种赭曲霉毒素A的生物传感检测方法技术

本发明专利技术公开了一种赭曲霉毒素A的生物传感检测方法。本发明专利技术公开的赭曲霉毒素A的生物传感检测方法基于核酸适体与光纤之间的非特异性吸附能力，核酸适体的序列为序列表中序列1，核酸适体带有荧光基团，光纤为带有功能基团的石英光纤；赭曲霉毒素A的生物传感检测方法包括：利用缓冲液处理待测样品，得到待测液体或将待测样品作为待测液体；利用核酸适体与光纤间的非特异性吸附能力检测待测液体，确定待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或确定待测样品中赭曲霉毒素A的含量。实验证明，利用本发明专利技术的方法检测待测样品中的OTA，准确率高，快速、高效、简便，人工成本低，检测成本低，具有良好的社会效益和经济效益。

Biological sensing detection method of ochratoxin A

The invention discloses a biological sensing detection method of ochratoxin A. The invention discloses a method for detecting biological sensing of ochratoxin A based on aptamer nonspecific adsorption capacity between the body and the fiber, aptamer sequence to sequence 1 in the sequence table, the aptamer with a fluorophore, fiber quartz fiber with functional groups; including biological sensing detection method of aflatoxin and ochratoxin A treatment: the use of buffer sample, get the measured liquid or liquid samples to be tested as measured by aptamer; nonspecific adsorption ability to detect body and fiber of the liquid to be tested, to determine whether the test sample containing ochratoxin A or to determine the content of samples of ochratoxin A tested. The experiment proves that the method of the invention has the advantages of high accuracy, high speed, high efficiency, simplicity, low labor cost, low detection cost, good social benefit and economic benefit, and can be used for detecting the OTA in the sample to be tested.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及环境监测领域中，一种赭曲霉毒素A的生物传感检测方法。
技术介绍
环境监测作为环境保护工作中不可或缺的步骤,它可以对影响环境质量的各因素进行科学的测定。其主要的监测对象是水环境、大气、土壤、固体废料、以及生态环境。常见的环境监测方法如高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)、原子发射光谱仪(AES)、原子吸收光谱仪(AAS)、荧光光谱仪等。虽然这些方法具有较高的成熟度和精密度，但是这些监测仪器因为尺寸的局限，不能够进行原位实时检测，且价格昂贵，操作复杂，需要前过程处理。因此，环境监测领域急需研发快速简便、特异性强、可实时原位检测的监测方法。核酸适体是通过SELEX技术从核酸分子文库里利用寡核苷酸严格的识别和亲合力而人工合成的，与配体高效、专一结合的DNA或RNA寡核苷酸。当靶物质存在时，核酸适体能与靶物质相互作用，发生适应性折叠。核酸适体能通过氢键、疏水堆积作用、范德华力，与插入或包被的靶分子形成稳定的空间结构，如发夹、茎环、口袋、假结、凸环、G-四聚体等特殊三维空间结构。倏逝波光纤生物传感器是近几年发展很快的一种光学传感器。其原理主要是：一束光线以适当的角度进入光纤时，会以全反射方式在光纤中传播，产生一种横贯光纤的波，通过光纤与其它介质的交接处传出光纤，这种波随传播快速衰减，称为倏逝波。倏逝波光纤生物传感器利用这种性质，在倏逝波波导表面加上生物敏感元件(本方法中为核酸适体)，当倏逝波穿过生物敏感元件时，或产生光信号，或导致倏逝波与光纤内传播光线的强度、相位或频率改变。测量这些变化，即可获得生物敏感元件或者光纤变化的信息，即核酸适体与分析物相互作用的信息。在核酸适体生物传感器的构建中，核酸适体的固定化是关键步骤，此步骤将直接影响传感器的性能。为了获得理想的传感界面，往往需要借助物理或化学方法将核酸探针有效地固定在一定的界面上。目前核酸适体的固定方法大致有吸附法、共价键合法、亲和素-生物素固定法、自组装法四类。吸附法是通过氢键、范德华力、离子键、配位键、疏水作用等将核酸适体固定在载体上，这种方法一般不需要化学试剂，对生物组分的活性影响较小。赭曲霉毒素A(OTA)是曲霉属和青霉属等产毒菌株产生的一种次生有毒代谢产物，常见于于各种谷类食品、饲料及其他农副产品中。其具有肾脏毒性、肝脏毒性、免疫毒性、致畸变性等多种毒性，且OTA被国际癌症研究机构(IARC)认为对人类有潜在的致癌性，对动物和人体健康有很大的潜在危害。目前急需一种快速高效、可实时原位检测赭曲霉毒素A的方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何检测赭曲霉毒素A。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了基于核酸适体与倏逝波光纤生物传感器光纤探头之间的非特异性吸附能力的赭曲霉毒素A(OTA)的生物传感检测方法。本专利技术所提供的OTA的生物传感检测方法，包括利用核酸适体与光纤对OTA标准样品进行检测，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。上述OTA的生物传感检测方法中，所述核酸适体的序列可为下述A1)、A2)或A3)：A1)序列表中序列1的核苷酸序列；A2)与A1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由A1)衍生的DNA序列；A3)在严格条件下与A1)限定的DNA序列杂交的由A1)衍生的DNA序列；和/或，所述光纤为带有功能基团的石英光纤。所述功能基团可为羟基、氨基等。上述OTA的生物传感检测方法中，所述核酸适体带有荧光基团。所述荧光基团为Cy5.5。上述OTA的生物传感检测方法中，所述方法可包括：利用缓冲液处理所述待测样品，得到待测液体或将所述待测样品作为待测液体；利用所述核酸适体与所述光纤检测所述待测液体，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。所述缓冲液由溶质和溶剂组成，所述溶剂为10mMTris缓冲液，所述溶质及其浓度为200mMNaCl、5mMKCl和10mMCaCl2，pH值为6。所述10mMTris缓冲液由水和三羟甲基氨基甲烷(Tris)组成，三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mM。所述缓冲液的pH值可使用HCl进行调节。所述待测样品可为食品，也可为农产品、农副产品或由农产品或农副产品加工得到的产品，如谷类食品或饲料。所述待测样品具体可为水或饮料。进一步，所述待测样品可为农产品发酵得到的食品，如红酒或酒。上述OTA的生物传感检测方法中，所述利用所述核酸适体与所述光纤检测所述待测液体包括：将所述待测液体与核酸适体溶液反应，得到反应液；利用所述光纤测定所述反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量；所述核酸适体溶液为向所述缓冲液中加入所述核酸适体得到的溶液。所述核酸适体溶液中所述核酸适体的浓度可根据具体需要进行调整。在本专利技术的一个实施例中，所述核酸适体溶液中所述核酸适体的浓度为50nM。所述核酸适体溶液中所述核酸适体的浓度不仅限于本专利技术实施例中的浓度。所述反应的温度可为20-25℃。所述反应的时间可为30分钟。所述反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量可为吸附在所述光纤上所述核酸适体的量。更进一步，所述反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量可通过吸附在所述光纤上所述核酸适体的荧光信号来体现。在本专利技术中，所述确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量可根据荧光信号或其变化进行确定。上述OTA的生物传感检测方法中，所述方法可还包括OTA标准曲线的制备，所述OTA标准曲线的制备包括：将含有不同浓度OTA标准品的OTA标准溶液分别与所述核酸适体溶液进行反应，得到标准反应液；利用所述光纤测定所述标准反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量，根据所述OTA标准溶液中OTA浓度与所述标准反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量的关系建立OTA标准曲线。所述标准反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量可为吸附在所述光纤上所述核酸适体的量。更进一步，所述标准反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量可通过吸附在所述光纤上所述核酸适体的荧光信号来体现。上述OTA的生物传感检测方法中，所述利用核酸适体与光纤对待测样品进行检测为利用所述核酸适体与倏逝波全光纤生物传感器对待测样品进行检测，所述倏逝波全光纤生物传感器的探头为所述光纤或由所述光纤制备。所述倏逝波全光纤生物传感器包括光路系统、进样系统以及信号收集与处理系统。所述光路系统包括激光发射装置。所述进样系统包括所述探头。所述倏逝波全光纤生物传感器的激光发射装置发射的激光通过一系列转换，能够激发所述荧光物质，从而获得荧光信号。在本专利技术的一个实施例中，所述倏逝波全光纤生物传感器的激光发射装置发射的激光的波长为635nm，635nm的激光能够激发Cy5.5基团发出荧光。所述光纤可为根据不同需求带有不同修饰功能基团(如羟基或氨基)的光纤。所述光纤的锥角角度可为220°。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了检测OTA的物质。本专利技术所提供的检测OTA的物质可仅由所述核酸适体和P1组成；所述P1为所述光纤或所述倏逝波全光纤生物传感器。所述倏逝波全光纤生物传感器可利用所述探头或所述光纤进本文档来自技高网...

【技术保护点】
赭曲霉毒素A的生物传感检测方法，包括利用核酸适体与光纤对待测样品进行检测，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。

【技术特征摘要】
1.赭曲霉毒素A的生物传感检测方法，包括利用核酸适体与光纤对待测样品进行检测，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述核酸适体的序列为下述A1)、A2)或A3)：A1)序列表中序列1的核苷酸序列；A2)与A1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由A1)衍生的DNA序列；A3)在严格条件下与A1)限定的DNA序列杂交的由A1)衍生的DNA序列。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述光纤为带有功能基团的石英光纤；和/或，所述核酸适体带有荧光基团。4.根据权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述方法包括：利用缓冲液处理所述待测样品，得到待测液体或将所述待测样品作为待测液体；利用所述核酸适体与所述光纤检测所述待测液体，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述利用所述核酸适体与所述光纤检测所述待测液体包括：将所述待测液体与所述核酸适体溶液反应，得到反应液；利用所述光纤测定所述反应液中未与赭曲霉毒素A反应的所述核酸适体的含量确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所...

【专利技术属性】
技术研发人员：龙峰，吴君，王宏亮，
申请(专利权)人：中国人民大学，
类型：发明
国别省市：北京;11