一种用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片制造技术

本实用新型专利技术公开了一种用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片，所述芯片包括由多个玻璃基板组成的一玻璃板、镀在每一所述玻璃基板上的铬膜、镀在所述铬膜上金银合金膜、在所述金银合金膜表面阵列式分布的真菌毒素抗原的点涂层；所述真菌毒素抗原为真菌毒素分子与载体蛋白的偶联物；所述真菌毒素分子为黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、T‑2毒素和伏马毒素的至少两种；所述每一玻璃基板之间设置有一待掰断线。本实用新型专利技术提供的用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片可一次检测样品中多种真菌毒素污染，具有高通量检测的优势。

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及了一种用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片。
技术介绍
真菌毒素是某些丝状真菌在适宜温度、适宜湿度条件下产生的二级代谢产物。目前已知的真菌毒素有300多种，主要污染粮油食品和饲料。有研究表明，一年中全世界粮食总产量的25%受到真菌毒素的污染。所有的农作物在生长、采后贮藏以及加工时期，都可能会被污染产毒真菌进而含有生物毒素。真菌毒素不仅污染粮食，造成食物中毒，大多真菌毒素还具有致癌、致畸、致突变作用，对人类的生存和健康造成巨大威胁。虽然可以控制粮食在生长和贮存的条件以减少污染的发生，以及粮食加工过程中可以去除部分真菌毒素，但不能完全去除，因此检测粮食生产工程中的真菌毒素含量非常有必要的。真菌毒素常用的检测方法主要分为仪器检测方法和免疫学检测法。仪器方法主要包括高效液相、气相色谱、以及其质谱联用色谱方法。免疫学检测方法主要包括ELISA、胶体金试纸条以及免疫亲和柱等。仪器检测方法虽然准确但由于设备昂贵、样品前处理复杂、检测成本高等缺点，无法满足廉价、快速现场检测的要求。而免疫学方法，基于抗原抗体的特异性反应，具有快速、廉价、低成本和特异性好的特点，十分适合大量样品的初筛和现场检测。基于以上原因，本课题利用免疫学原理，研究开发一系列生物毒素的高灵敏高特异的单克隆抗体，并在此基础上，开发出可用于实际样品检测的生物毒素免疫学快速检测方法。真菌毒素是一些真菌在生长过程中产生的致病性、致死性的二级代谢产物。到目前为止，已经查明的真菌毒素大概有300多种，其中危害较大、污染普遍的主要有：黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮T-2毒素、伏马毒素等等。其主要的产毒真菌主要集中在于曲霉菌、青霉菌属以及镰刀菌属等等。由于在世界范围内真菌毒素的污染非常普遍，再加上各种真菌毒素的在很低剂量就产生的各种毒性，因此世界各国的研究人员在几十年时间一直都在开发更加灵敏、更加快速、更加低成本和准确的检测方法。表面等离子共振技术，英文简写SPR，是从20世纪90年代发展起来的一种新技术，其应用SPR原理检测生物传感芯片（biosensorchip）上配位体与分析物之间的相互作用情况，广泛应用于各个领域。SPR光学生物传感器经过20年来的发展，已经成为生命科学和制药领域的一种重要的研究工具。随着SPR技术成为分析生物化学、药物研发和食物监控领域中的一个不可缺少的部分，SPR生物传感器的应用将更加趋向多样化，特别是它在小分子检测和脂膜领域的新兴应用将使其在未来的药物发现和膜生物学中扮演一个越来越重要的角色。近几年，其发展尤为迅猛，随着SPR仪器的不断完善和生物分子膜构建能力的不断增强，SPR生物传感器的应用前景极为广阔。
技术实现思路
本技术提供了一种用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片。一种用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片，所述芯片包括由多个玻璃基板组成的一玻璃板、镀在每一所述玻璃基板上的铬膜、镀在所述铬膜上金银合金膜、在所述金银合金膜表面阵列式分布的真菌毒素抗原的点涂层；所述真菌毒素抗原为真菌毒素分子与载体蛋白的偶联物；所述真菌毒素分子为黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、T-2毒素和伏马毒素的至少两种；所述每一玻璃基板之间设置有一待掰断线。进一步地，所述载体蛋白是牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）、酪蛋白中的一种或几种。进一步地，所述真菌毒素抗原为黄曲霉毒素B1-BSA偶联物、脱氧雪腐镰刀菌烯醇-OVA偶联物或玉米赤霉烯酮-BSA偶联物。进一步地，所述真菌毒素抗原是通过共价键固定于所述金银合金膜表面上的。进一步地，所述铬膜厚度为1~5nm；所述金银合金膜厚度为0.02~0.15mm，银组分的原子百分比为65%。进一步地，所述玻璃基板尺寸为10mm×10mm×1mm。本技术具有如下有益效果：本技术提供的用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片可一次检测样品中多种真菌毒素污染，具有高通量检测的优势。本技术所提供的用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片可通过再生重复使用，大大降低了检测成本。此外，表面等离子共振检测技术具有实时检测、样本用量低、高灵敏等天然优势。附图说明图1为本技术共振芯片的结构示意图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本技术进行详细的说明。一种用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片，所述芯片包括由多个玻璃基板1组成的一玻璃板、镀在所述玻璃板上的厚度1~5nm的铬膜2、镀在所述铬膜2上厚度为0.02~0.15mm的金银合金膜3、通过共价键固定于所述金银合金膜3表面且阵列式分布的真菌毒素抗原的点涂层4；其中，所述每一玻璃基板1之间设置有一待掰断线11，通过掰断线11轻易从玻璃板中分离出所需的玻璃基板1；所述真菌毒素抗原为真菌毒素分子与载体蛋白的偶联物；所述真菌毒素分子为黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、T-2毒素和伏马毒素的至少两种。进一步地，所述载体蛋白是牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）、酪蛋白中的一种或几种。进一步地，所述真菌毒素抗原为黄曲霉毒素B1-BSA偶联物、脱氧雪腐镰刀菌烯醇-OVA偶联物或玉米赤霉烯酮-BSA偶联物。进一步地，所述玻璃基板1尺寸为10mm×10mm×1mm。所述共振芯片通过以下方法制得：（1）根据玻璃基板的尺寸，从玻璃板一侧刻出待掰断线，此时玻璃板还是完整一块。在玻璃板另一侧上依次镀上铬膜和金银合金膜。应用前，玻璃板为一整板，便于整理收纳，当需要使用时，可通过掰断线掰断获取，简单易操作，节约资源，便于管理。铬膜作为过渡膜，用于增强玻璃板与金银合金膜的粘结力；采用金银合金膜不仅灵敏度比金膜更高，且成本更低。（2）用去离子水冲洗金膜表面的灰尘等杂质：双氧水、氨水、去离子水的混合液（双氧水：氨水：去离子水=1:1:5），55℃浸泡10分钟；去离子水淋洗三次；乙醇淋洗，氮气吹干；放入4℃冰箱备用。（3）羧基的引入及抗原的固定：清洗好的芯片放入50mL离心管中，加入5mL10mmol/L12-巯基十二烷酸，室温孵育过夜；用去离子水淋洗芯片2min，氮气吹干；在芯片表面滴加200μL新鲜配制的50mmol/LNHS和200mmol/LEDC混合溶液，室温静置15min，以活化芯片表面的羧基基团；去离子水淋洗芯片2min，氮气吹干；在芯片表面滴加不同浓度的真菌毒素抗原（黄曲霉毒素B1-BSA偶联物、脱氧雪腐镰刀菌烯醇-OVA偶联物、玉米赤霉烯酮-BSA偶联物），抗原浓度在2mg/ml-50µg/ml之间，0.3µL/点，在潮湿密封环境下，室温静置过夜；去离子水淋洗芯片2min，氮气吹干；在芯片表面滴加200μL1mol/L盐酸乙醇胺溶液，室温静置10min，以封闭没有反应的活化基团；用去离子水淋洗2min，氮气吹干，4℃冰箱保存，备用。以上所述实施例仅表达了本技术的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本技术专利范围的限制，但凡采用等同替换或等效变换的形式所获得的技术方案，均应落在本技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片，其特征在于，所述芯片包括由多个玻璃基板组成的一玻璃板、镀在每一所述玻璃基板上的铬膜、镀在所述铬膜上金银合金膜、在所述金银合金膜表面阵列式分布的真菌毒素抗原的点涂层；所述真菌毒素抗原为黄曲霉毒素B1‑BSA偶联物、脱氧雪腐镰刀菌烯醇‑OVA偶联物或玉米赤霉烯酮‑BSA偶联物；所述真菌毒素抗原是通过共价键固定于所述金银合金膜表面上的；所述每一玻璃基板之间设置有一待掰断线。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测真菌毒素的表面等离子共振芯片，其特征在于，所述芯片包括由多个玻璃基板组成的一玻璃板、镀在每一所述玻璃基板上的铬膜、镀在所述铬膜上金银合金膜、在所述金银合金膜表面阵列式分布的真菌毒素抗原的点涂层；所述真菌毒素抗原为黄曲霉毒素B1-BSA偶联物、脱氧雪腐...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵芳，洪小柳，葛丽雅，张恒，吕敬章，涂晓波，刘慧玲，
申请(专利权)人：深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心，
类型：新型
国别省市：广东;44