转基因油菜品系OXY235检测方法、试剂和试剂盒技术

本申请公开了一种转基因油菜品系OXY235检测方法、试剂和试剂盒。本申请的检测方法，包括在PCR反应体系中同时加入品系OXY235外源基因和PEP基因的特异性引物和探针，并加入矿物油，混匀后制成微滴，在微滴中进行双重ddPCR反应，反应结束后，读取每个微滴扩增信号，计算外源基因和PEP的拷贝数；品系OXY235外源基因和PEP的探针分别用FAM和HEX荧光标记。本申请的检测方法，设计配套使用的内源基因PEP和品系特异性引物探针，采用双通道法，分别定量出两者在油菜基因组中的拷贝数，计算出转基因油菜品系OXY235绝对含量，对油菜转基因成分研究和进出境油菜产品中转基因成分精准定量检测有重要意义。

Detection methods, reagents and kits of transgenic rapeseed strain OXY235

This application discloses a detection method, reagent and kit for genetically modified rapeseed strain OXY235. The detection method of this application includes adding specific primers and probes of exogenous gene and PEP gene of strain OXY235 simultaneously in the PCR reaction system, adding mineral oil, mixing them into micro-droplets, and double DD PCR reaction in micro-droplets. After the reaction, the amplified signals of each micro-droplet are read, and the copy number of exogenous gene and PEP is calculated; the probe score of exogenous gene and PEP of strain OXY235 is calculated. Do not label with FAM or HEX fluorescence. In this application, we designed a pair of endogenous gene PEP and strain-specific primer probes to quantify the copies of PEP and strain-specific primer in rapeseed genome by two-channel method, and calculated the absolute content of OXY235, which is of great significance for the research of genetically modified components in rapeseed and the precise quantitative detection of genetically modified components in import and export rapeseed products.

【技术实现步骤摘要】
转基因油菜品系OXY235检测方法、试剂和试剂盒
本申请涉及转基因油菜检测领域，特别是涉及一种转基因油菜品系OXY235检测方法、试剂和试剂盒。
技术介绍
随着生物技术产业的迅速发展，全球转基因作物的研发速度和种植面积持续增加。推进转基因技术已经成为了着眼于未来的发展战略和解决粮食短缺、确保国家粮食安全的必然选择。但是转基因生物安全问题也随之成为世界关注的热点。目前世界各国出于经济、卫生、环保等各种目的纷纷对转基因生物及其产品加强管理和检测。包括中国在内的50个左右国家和地区相继颁布并实行了“转基因标识制度”，对转基因生物及其加工产品进行标识和管理。近年来，随着各国有关GMO(GeneticallyModifiedorganism)标签法的建立和不断完善，对食品中的GMO含量下限已有所规定。很多国家不但要求对转基因食品进行定性检测，还需要对食品中的GMO含量进行定量检测，以便标识。其标识的阈值一般在0.9％–5％之间(EuropeanCommission,2003；Notification,2000)。建立转基因产品的检测技术标准尤其是精准定量检测技术是实施转基因产品标识的技术前提。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转基因油菜品系OXY235的检测方法，其特征在于：包括以下步骤，PCR扩增体系配制步骤，包括将品系OXY235特异引物组、品系OXY235特异探针、PEP基因特异引物组、PEP基因特异探针和待测样品的DNA加入到PCR反应液中，制成双重PCR反应体系；微滴生成步骤，包括在双重PCR反应体系中加入微滴生成油，混匀后，将其转移到微滴生成仪上，震荡生成微滴；PCR反应和微滴分析步骤，包括将微滴转移到反应管中进行PCR反应，PCR反应结束后，采用微滴分析仪读取每个微滴的扩增信号；定量检测步骤，根据读取的扩增信号，采用软件分析品系OXY235的特异扩增拷贝数占内源参考基因PEP基因特异扩增拷贝数...

【技术特征摘要】
1.一种转基因油菜品系OXY235的检测方法，其特征在于：包括以下步骤，PCR扩增体系配制步骤，包括将品系OXY235特异引物组、品系OXY235特异探针、PEP基因特异引物组、PEP基因特异探针和待测样品的DNA加入到PCR反应液中，制成双重PCR反应体系；微滴生成步骤，包括在双重PCR反应体系中加入微滴生成油，混匀后，将其转移到微滴生成仪上，震荡生成微滴；PCR反应和微滴分析步骤，包括将微滴转移到反应管中进行PCR反应，PCR反应结束后，采用微滴分析仪读取每个微滴的扩增信号；定量检测步骤，根据读取的扩增信号，采用软件分析品系OXY235的特异扩增拷贝数占内源参考基因PEP基因特异扩增拷贝数的百分比，以此表示转基因油菜品系OXY235的含量；所述品系OXY235特异引物组的正向引物为SeqIDNo.1所示序列，品系OXY235特异引物组的反向引物为SeqIDNo.2所示序列，所述品系OXY235特异探针为SeqIDNo.3所示序列，所述PEP基因特异引物组的正向引物为SeqIDNo.4所示序列，PEP基因特异引物组的反向引物为SeqIDNo.5所示序列，所述PEP基因特异探针为SeqIDNo.6所示序列；SeqIDNo.1：5’-ATTGACCATCATACTCATTGCTGA-3’SeqIDNo.2：5’-AGAGAATCGTGAAATTATCTCTACCG-3’SeqIDNo.3：5’-CCATGTAGATTTCCCGGACATGAAGCC-3’SeqIDNo.4：5’-CCCTTGTGAAGCTCGACATC-3’SeqIDNo.5：5’-CTTGTCCTCTGACCATTCTTTGT-3’SeqIDNo.6：5’-CCGACCGTCACACCGATGTTTTAGA-3’其中，SeqIDNo.3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘广，凌杏园，章桂明，李芳荣，向才玉，卢小雨，刘新娇，杨帆，
申请(专利权)人：深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：广东,44