一种筛选具有不同生育时期的大豆品种的方法及其专用试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种筛选具有不同生育时期的大豆品种的方法及其专用试剂盒。本发明专利技术所提供的方法包括如下步骤：检测待测大豆品种的基因组DNA中在多态性位点组合的基因型，根据检测结果判断待测大豆品种的生育时期长短；多态性位点组合由InDel_‑1120、InDel_‑904～‑866、InDel_‑655、InDel_‑557、SNP_‑293和InDel_‑201～‑200组成。实验证明，利用本发明专利技术提供的方法筛选不同生育时期的大豆品种，操作简单且准确率高；通过检测大豆品种的基因组DNA即可预测大豆品种的生育时期，具有重要的应用价值。

A Method for Screening Soybean Varieties with Different Growth Periods and Its Special Kit

The invention discloses a method for screening soybean varieties with different growth stages and a special kit thereof. The method provided by the invention comprises the following steps: detecting the genotype of the polymorphic locus combination in the genomic DNA of the soybean varieties to be tested, judging the growth period of the soybean varieties to be tested according to the test results; the polymorphic locus combination consists of InDel____________________________ The experiment proves that the method provided by the invention is simple and accurate in screening soybean varieties at different growth stages, and can predict the growth period of soybean varieties by detecting the genomic DNA of soybean varieties, which has important application value.

【技术实现步骤摘要】
一种筛选具有不同生育时期的大豆品种的方法及其专用试剂盒
本专利技术属于植物育种领域，具体涉及一种筛选具有不同生育时期的大豆品种的方法及其专用试剂盒。
技术介绍
大豆是研究光周期现象的重要模式植物，许多光周期现象的发现均是以大豆为实验材料。研究表明大豆在全生育期(出苗至成熟)都具有较强的感光性。大豆是短日植物且具有短日诱导累积效应，光照不仅影响大豆的开花时间还影响大豆的品质和其它的农艺性状。随着分子生物技术的发展，重要基因的功能不断被揭示，如何将优异基因用于大豆新品种的选育，成为分子生物学家、遗传学家和大豆育种工作者共同关注的焦点。从大豆种质资源中发掘与生育期等农艺性状相关的等位基因，然后通过传统杂交和分子标记辅助选择相结合加以利用，是最直接有效且最易被接受的大豆品种改良方法。大豆GmRAV基因受生物钟调控，且在短日照(SD)条件的mRNA转录物丰度显著高于长日照(LD)条件，进一步地，GmRAV干涉对植株的生长有促进作用并且提早开花(LuQ，ZhaoL，LiD，etal.AGmRAVorthologisinvolvedinphotoperiodandsucrosecontroloffloweringtimeinsoybean.[J].PlosOne，2014，9(2):e89145.)。因此GmRAV基因是与大豆花期相关的优异基因资源，然而目前尚未开发出与GmRAV基因相关的分子标记。
技术实现思路
本专利技术的目的是筛选具有不同生育时期的大豆品种。本专利技术首先保护与大豆始花期、盛花期、始荚期、盛荚期、始粒期、鼓粒期和初熟期相关的多态性位点组合，可为如下(X1)或(X2)：(X1)包括下表所示的InDel_-1120、InDel_-904～-866、InDel_-655、InDel_-557、SNP_-293和InDel_-201～-200；(X2)由所述InDel_-1120、所述InDel_-904～-866、所述InDel_-655、所述InDel_-557、所述SNP_-293和所述InDel_-201～-200组成；本专利技术还保护成套引物，可包括下表所示的引物对甲、引物对乙和引物对丙；所述成套引物具体可由所述引物对甲、所述引物对乙和所述引物对丙组成。本专利技术还保护所述成套引物的应用，可为a-1)至a-16)中的任一种：a-1)制备用于鉴定待测大豆始花期长短的试剂盒；a-2)制备用于鉴定待测大豆盛花期长短的试剂盒；a-3)制备用于鉴定待测大豆始荚期长短的试剂盒；a-4)制备用于鉴定待测大豆盛荚期长短的试剂盒；a-5)制备用于鉴定待测大豆始粒期长短的试剂盒；a-6)制备用于鉴定待测大豆鼓粒期长短的试剂盒；a-7)制备用于鉴定待测大豆初熟期长短的试剂盒；a-8)制备用于鉴定待测大豆生育时期长短的试剂盒；a-9)筛选具有不同始花期的大豆品种；a-10)筛选具有不同盛花期的大豆品种；a-11)筛选具有不同始荚期的大豆品种；a-12)筛选具有不同盛荚期的大豆品种；a-13)筛选具有不同始粒期的大豆品种；a-14)筛选具有不同鼓粒期的大豆品种；a-15)筛选具有不同初熟期的大豆品种；a-16)筛选具有不同生育时期的大豆品种。本专利技术还保护含有所述成套引物的试剂盒；所述试剂盒的用途可为a-9)至a-16)中的任一种：a-9)筛选具有不同始花期的大豆品种；a-10)筛选具有不同盛花期的大豆品种；a-11)筛选具有不同始荚期的大豆品种；a-12)筛选具有不同盛荚期的大豆品种；a-13)筛选具有不同始粒期的大豆品种；a-14)筛选具有不同鼓粒期的大豆品种；a-15)筛选具有不同初熟期的大豆品种；a-16)筛选具有不同生育时期的大豆品种。所述试剂盒的制备方法也属于本专利技术的保护范围。所述试剂盒的制备方法可包括将各条引物单独包装的步骤。本专利技术还保护一种筛选不同生育时期大豆品种的方法，可包括如下步骤：检测待测大豆品种基于上述任一所述多态性位点组合的基因型，“所述InDel_-1120无缺失和/或所述InDel_-904～-866无缺失和/或所述InDel_-655无缺失和/或所述InDel_-557无缺失和/或所述SNP_-293为CC纯合型和/或所述InDel_-201～-200无缺失”的待测大豆品种的生育时期短于“所述InDel_-1120有缺失和/或所述InDel_-904～-866有缺失和/或InDel_-655有缺失和/或所述InDel_-557有缺失和/或所述SNP_-293为AA纯合型和/或所述InDel_-201～-200有缺失”的待测大豆品种。上述方法中，所述生育时期可为始花期、盛花期、始荚期、盛荚期、始粒期、鼓粒期和初熟期中的至少一种。上述方法中，所述“短于”可为在统计学上的短于(即具有统计学意义)。上述任一所述方法中，所述“检测待测大豆品种基于所述多态性位点组合的基因型”的方法如下：以待测大豆品种的基因组DNA为模板，采用所述引物对甲、所述引物对乙或所述引物对丙进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；将所述PCR扩增产物进行测序，从而评判待测大豆品种基于所述多态性位点组合的基因型。所述多态性位点组合、或、所述成套引物、或、所述试剂盒、或、上述任一所述的方法在大豆育种中的应用也属于本专利技术的保护范围。上文中，所述InDel_-1120有缺失可为GmRAV基因的第-1120位的T缺失。所述InDel_-904～-866有缺失可为GmRAV基因的第-904位和第-866位的TATTTATAATAAATATTATTATAAGTCTTTTTTATCTTT缺失。所述InDel_-655有缺失可为GmRAV基因的第-655位的T缺失。所述InDel_-557有缺失可为GmRAV基因的第-557位的T缺失。所述InDel_-201～-200有缺失可为GmRAV基因的第-201位和第-200位的TA缺失。上文中，含有“-”的多态性位点(如所述InDel_-1120、所述InDel_-904～-866、所述InDel_-655、所述InDel_-557、所述SNP_-293、所述InDel_-201～-200)表示该多态性位点位于GmRAV基因的转录起始位点(即ATG)之前。上文中，以待测大豆品种的基因组DNA为模板，采用所述引物对甲进行PCR扩增，得到的PCR扩增产物的核苷酸序列如序列表中序列7或序列8所示。以待测大豆品种的基因组DNA为模板，采用所述引物对乙进行PCR扩增，得到的PCR扩增产物的核苷酸序列如序列表中序列9或序列10所示。以待测大豆品种的基因组DNA为模板，采用所述引物对丙进行PCR扩增，得到的PCR扩增产物的核苷酸序列如序列表中序列11或序列12所示。实验证明，利用本专利技术提供的方法筛选不同生育时期的大豆品种，操作简单且准确率高；通过检测大豆品种的基因组DNA即可预测大豆品种的生育时期，具有重要的应用价值。附图说明图1为实施例1步骤二中3的部分实验结果。图2实施例2步骤三中2的部分实验结果。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.与大豆始花期、盛花期、始荚期、盛荚期、始粒期、鼓粒期和初熟期相关的多态性位点组合，为如下(X1)或(X2)：(X1)包括下表所示的InDel_‑1120、InDel_‑904～‑866、InDel_‑655、InDel_‑557、SNP_‑293和InDel_‑201～‑200；(X2)由所述InDel_‑1120、所述InDel_‑904～‑866、所述InDel_‑655、所述InDel_‑557、所述SNP_‑293和所述InDel_‑201～‑200组成；

【技术特征摘要】
1.与大豆始花期、盛花期、始荚期、盛荚期、始粒期、鼓粒期和初熟期相关的多态性位点组合，为如下(X1)或(X2)：(X1)包括下表所示的InDel_-1120、InDel_-904～-866、InDel_-655、InDel_-557、SNP_-293和InDel_-201～-200；(X2)由所述InDel_-1120、所述InDel_-904～-866、所述InDel_-655、所述InDel_-557、所述SNP_-293和所述InDel_-201～-200组成；2.成套引物，包括下表所示的引物对甲、引物对乙和引物对丙；3.权利要求2所述成套引物的应用，为a-1)至a-16)中的任一种：a-1)制备用于鉴定待测大豆始花期长短的试剂盒；a-2)制备用于鉴定待测大豆盛花期长短的试剂盒；a-3)制备用于鉴定待测大豆始荚期长短的试剂盒；a-4)制备用于鉴定待测大豆盛荚期长短的试剂盒；a-5)制备用于鉴定待测大豆始粒期长短的试剂盒；a-6)制备用于鉴定待测大豆鼓粒期长短的试剂盒；a-7)制备用于鉴定待测大豆初熟期长短的试剂盒；a-8)制备用于鉴定待测大豆生育时期长短的试剂盒；a-9)筛选具有不同始花期的大豆品种；a-10)筛选具有不同盛花期的大豆品种；a-11)筛选具有不同始荚期的大豆品种；a-12)筛选具有不同盛荚期的大豆品种；a-13)筛选具有不同始粒期的大豆品种；a-14)筛选具有不同鼓粒期的大豆品种；a-15)筛选具有不同初熟期的大豆品种；a-16)筛选具有不同生育时期的大豆品种。4.含有权利要求2所述成套引物的试剂盒；所述试剂盒的用途为a-9)至a-16)中的任一种：a-9)筛选具有不同始花期的大豆品种；a-10)筛选具有不同盛花期的大豆品种；a-11)筛选具有不同始荚期的大豆品种；a-12)筛选具有不同盛荚期的大豆品种；a-13)筛选具有不同始粒期的大豆品种；a-14)筛选具有不同鼓粒期的大豆品种；a-15)筛选具有不同初熟期的大豆品种；a-16)筛选具有不同生育时期的大豆品种。5.权利要求4所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵琳，李文滨，李敏敏，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23