一种快速合成糖基化磷脂酰乙醇胺的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速合成糖基化磷脂酰乙醇胺的方法。该方法通过建立新的溶剂体系，使具有不同脂肪酸结构的磷脂酰乙醇胺和还原糖充分溶解混合后，通过匀速振荡加热反应，合成糖基化磷脂酰乙醇胺。本发明专利技术方法的产物得率高于70%，同时大大缩短了反应时间，得到的糖基化磷脂酰乙醇胺产物纯度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及糖基化磷脂酰乙醇胺的合成方法，具体涉及一种快速合成糖基化磷脂酰乙醇胺的方法。
技术介绍
糖基化磷脂酰乙醇胺(Amadoriphosphatidylethanolamine，Amadori-PE)是食品或生物体中的磷脂酰乙醇胺和还原糖等化合物的醛酮基发生羰胺反应而产生的一类物质。糖基化磷脂酰乙醇胺是一种潜在的化学危害物。大量的动物和临床实验表明，糖基化脂类和糖尿病并发症、衰老性功能障碍、癌症等疾病的发病存在着密切相关性。糖基化磷脂酰乙醇胺的前体物质——磷脂广泛存在于日常膳食中。在日常膳食中，蛋黄、大豆、动物肝脏、鱼肉、植物油和谷类等食物中都富含磷脂。同时由于磷脂的营养价值和生理调节功能逐步被人们所认识，磷脂作为功能食品添加剂在食品工业中的应用也非常广泛。这些磷脂类食品在加工、储藏过程中都可能引发食源性糖基化磷脂酰乙醇胺的安全问题。提纯制备高纯度糖基化磷脂酰乙醇胺是糖基化脂类研究的首要问题，目前还没有合成糖基化磷脂酰乙醇胺的标准方法。各实验室报道的数据相差也较大。已报道的糖基化磷脂酰乙醇胺的合成方法主要将磷脂酰乙醇胺和还原糖进行混合，加热反应后合成糖基化磷脂酰乙醇胺再进行纯化。SittiwatLertsiri等将纯度大于99％的5mg蛋黄PE混合物和200mgD-葡萄糖混合溶于添加了3mgBHT的5mL甲醇溶液中，37℃反应4天制备糖基化蛋黄PE(SittiwatLERTSIRI,M.S.A.T.,IdentificationofDeoxy-D-FructosylPhosphatidylethanolamineasaNon-enzymicGlycationProductofPhosphatidylethanolamineanditsOccurenceinHumanBloodPlasmaandRedBloodCells[J].BiosciBiotechBioch,1998.5(62):893-901.)。Jeong-HoOak等将27μmol的1,2-二(顺式9-十八碳烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸和2.0mmol的D-葡萄糖溶解于30mL含有0.1M磷酸盐缓冲溶液的甲醇溶液中，37℃反应15天后用体积比2:1的氯仿-甲醇混合溶液进行萃取，萃取物溶解于甲醇-30％氢氧化铵溶液中后进行纯化(Jeong-HoOak,KiyotakaNakagawa,andTeruoMiyazawa.UVanalysisofAmadori-glycatedphosphatidylethanolamineinfoodsandbiologicalsamples[J].JournalofLipidResearch,2002,43(3):523-529.)。PhumonSookwong等将15μmolPE(18:0-18:1)和5mmol葡萄糖溶解在50mL甲醇中，60℃反应24小时后经制备型反相柱分离提纯，制得Amadori-PE(PhumonSookwong,KiyotakaNakagawa,IkukoFujita,NaokiShoji,TeruoMiyazawa.Amadori-GlycatedPhosphatidylethanolamine,aPotentialMarkerforHyperglycemia,inStreptozotocin-InducedDiabeticRats[J].Lipids,2011,46:943–952.)。TeruoMiyazawa等人将二油酸酰磷脂酰乙醇胺(DioleoylPE)和葡萄糖溶于甲醇溶液中，60℃反应12h之后用体积比2:1的氯仿-甲醇混合溶液进行萃取，萃取物溶解于甲醇中后用高效液相色谱法进行纯化，得率只有28％(TERUOMIYAZAWA,JEONG-HOOAK,ANDKIYOTAKANAKAGAWA.AConvenientMethodforPreparationofHigh-Purity,Amadori-GlycatedPhosphatidylethanolamineandItsProoxidantEffect[J].NewYorkAcademyofSciences[J].2005,1043:276-279.)。由于磷脂酰乙醇胺种类繁多，高纯度磷脂酰乙醇胺非极性强，在极性溶剂中的溶解度非常小，因此，已有的合成方法一般直接采用PE混合物或者纯度不高的磷脂酰乙醇胺，将磷脂酰乙醇胺和极性强的还原糖混合溶解于一定比例的甲醇与水的混合溶液中。由于磷脂酰乙醇胺的纯度不高，反应物在极性反应溶剂中溶解度低，因此合成反应副产物多，终产物糖基化磷脂酰乙醇胺的合成率低，且纯度不高。为解决反应物的溶解度问题，本专利技术根据相似相容原理，建立氯仿-甲醇-水的溶剂体系，同时溶解纯度大于95％的不同脂肪酸结构的磷脂酰乙醇胺和纯度大于95％的葡萄糖，合成反应副反应少，糖基化磷脂酰乙醇胺生成率在70％以上，同时反应时间缩短10小时以上。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述现有技术中所存在的不足，提供一种快速合成高纯度糖基化磷脂酰乙醇胺的方法。该方法通过溶解试剂的相似相溶原理，建立稳定的氯仿-甲醇-水溶剂体系，可溶解纯度95％以上的不同脂肪酸结构的磷脂酰乙醇胺以及纯度大于95％的不同种类的还原糖。本专利技术方法使得反应物充分溶解混合，合成反应副产物少，反应产物得率高，反应时间缩短。本专利技术的目的以下述技术方案实现。本专利技术通过选择适合的溶剂和调整溶剂比例，建立新的溶剂体系，使得磷脂酰乙醇胺和还原糖充分溶解混合后，通过匀速振荡下，水浴加热反应，合成糖基化磷脂酰乙醇胺。一种快速合成糖基化磷脂酰乙醇胺的方法，包括如下步骤：(1)将磷脂酰乙醇胺溶于氯仿-甲醇混合溶液中，得到混合溶液A；将还原糖溶于水-甲醇混合溶液中，得到混合溶液B；(2)将混合溶液A和混合溶液B均匀混合后，转移至密封容器中，匀速振荡下，水浴加热进行反应；反应结束后，分离提纯，氮气吹干，得到所述糖基化磷脂酰乙醇胺。进一步地，步骤(1)中，所述氯仿-甲醇混合溶液中，氯仿与甲醇的体积比为1:5～2:1。进一步地，步骤(1)中，所述水-甲醇混合溶液中，水与甲醇的体积比为1:4～2:3。进一步地，步骤(1)中，所述还原糖包括葡萄糖或果糖。进一步地，步骤(2)中，混合溶液A和混合溶液B按照磷脂酰乙醇胺与还原糖摩尔比1:10～1:200的比例进行混合。进一步地，步骤(2)中，所述匀速振荡的速度为80～150r/min。进一步地，步骤(2)中，所述反应是在40～100℃下反应6～18小时。进一步地，所述糖基化磷脂酰乙醇胺的得率高于70％。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术通过选择和调整溶剂比例建立新的溶剂体系，使得反应物充分溶解并反应，降低了反应副产物的生成，提高了产物合成率，缩短了10小时以上的反应时间；(2)本专利技术通过匀速振荡加热反应，有利于避免反应过程中产物糖基化磷脂酰乙醇胺的析出，提高产物的得率，产物得率高于70％；(3)本专利技术所得的糖基化磷脂酰乙醇胺产物纯度高，可用作生物、医学和食品等领域的检测标准品。附图说明图1为实施例2中合成的糖基化1,2-二棕榈酰基-SN-丙三基-3-磷脂酰乙醇胺的质谱图；图2为实施例3中合成的糖基化1,2-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速合成糖基化磷脂酰乙醇胺的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将磷脂酰乙醇胺溶于氯仿‑甲醇混合溶液中，得到混合溶液A；将还原糖溶于水‑甲醇混合溶液中，得到混合溶液B；（2）将混合溶液A和混合溶液B均匀混合后，转移至密封容器中，匀速振荡下，水浴加热进行反应；反应结束后，分离提纯，氮气吹干，得到所述糖基化磷脂酰乙醇胺。

【技术特征摘要】
1.一种快速合成糖基化磷脂酰乙醇胺的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将磷脂酰乙醇胺溶于氯仿-甲醇混合溶液中，得到混合溶液A；将还原糖溶于水-甲醇混合溶液中，得到混合溶液B；（2）将混合溶液A和混合溶液B均匀混合后，转移至密封容器中，匀速振荡下，水浴加热进行反应；反应结束后，分离提纯，氮气吹干，得到所述糖基化磷脂酰乙醇胺。2.根据权利要求1所述的一种快速合成糖基化磷脂酰乙醇胺的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述氯仿-甲醇混合溶液中，氯仿与甲醇的体积比为1:5~2:1。3.根据权利要求1所述的一种快速合成糖基化磷脂酰乙醇胺的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述水-甲醇混合溶液中，水与甲醇的体积比为1:4~2:3。4.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘国琴，林清娜，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44