一种红豆杉培养基及其制备方法技术

本发明专利技术属于植物培养技术领域，具体涉及一种红豆杉培养基及其制备方法。本发明专利技术红豆杉培养基，包括以下成分及其浓度：基础培养基B5 30‑40g/L，蔗糖20‑50g/L，果糖1‑10g/L，萘乙酸0.1‑2.5mg/L，吲哚‑3‑乙酸1‑5mg/L，2,4‑二氯苯氧乙酸1‑5mg/L，赤霉素1‑3mg/L，椰子汁1‑10g/L，猕猴桃汁1‑10g/L，活性炭0.1‑1g/L，水杨酸1‑5mg/L，茉莉酸甲酯0.01‑0.15mg/L，硝酸银1‑5mg/L，柠檬酸三铵0.1‑1.5mg/L。本发明专利技术培养基能够加快愈伤组织的形成，有效防止组织褐变，与此同时能够提高愈伤组织中紫杉醇的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物培养
，具体涉及一种红豆杉培养基及其制备方法。
技术介绍
红豆杉又称紫杉，树形优美，材质优良，具有较高的园艺观赏价值，还是珍贵的用材树种。红豆杉中的抗癌活性成分紫杉醇能够有效抑制肿瘤细胞的增生和繁殖，对多种癌症的防治具有显著疗效，被世人誉为“植物黄金”。目前紫杉醇的唯一来源是从红豆杉树皮中提取，分离，且紫杉醇的含量非常低，大约为干重的万分之一左右，加之红豆杉属植物生长极其缓慢，因而为了解决紫杉醇药源的问题，人们从化学合成，人工栽培，真菌发酵生产，植物细胞培养等方面进行了探索。由于目前化学合成大多只能从紫杉烷类物质合成，而紫杉烷类物质在红豆杉中含量同样很低，固其成本昂贵。如果人工栽培，至少需要30年以上树龄的的红豆杉才能提取紫杉醇，周期长，成本也比较高。而细胞培养能够连续均匀生产，外界条件影响不大，而且可以在生物反应器中大规模培养，易于提高产量和进行产物的分离提取纯化，是进行工业化生产的首选方法。目前，在红豆杉细胞培养过程中存在的主要问题：一是愈伤组织形成慢；二是产生的愈伤组织不能够利用；三是形成的愈伤组织容易褐化；四是形成的愈伤组织中紫杉醇含量低。中国专利申请(CN105400841A)公布了一种红豆杉培养基，解决现有技术中植物细胞培养基对红豆杉细胞培养密度较低的技术问题。该培养基以硝酸钠和磷酸氢二钾分别作为氮源和磷源，并添加了一定的氯化钙，在此基础上意外的发现通过添加特定种类及成分的中药材有助于提升细胞培养密度。基于以上有益的发现，本专利技术通过实验手段优选了黄蜀葵、火绒草、鸡眼草、剪刀草、腊梅花、苦木、辣蓼草、江南卷柏、瓜子金等原本用于人类疾病治疗的中药材成分，所得培养基意外获得了突出的培养效果，使得红豆杉细胞的培养密度得到显著提升，同时其生长速度更快。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种红豆杉培养基。本专利技术培养基能够加快愈伤组织的形成，有效防止组织褐变，与此同时能够提高愈伤组织中紫杉醇的含量。本专利技术还提供了一种红豆杉培养基制备方法。本专利技术通过以下技术方案实现：一种红豆杉培养基，包括以下成分及其浓度：基础培养基B530-40g/L，蔗糖20-50g/L，果糖1-10g/L，萘乙酸0.1-2.5mg/L，吲哚-3-乙酸1-5mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸1-5mg/L，赤霉素1-3mg/L，椰子汁1-10g/L，猕猴桃汁1-10g/L，活性炭0.1-1g/L，水杨酸1-5mg/L，茉莉酸甲酯0.01-0.15mg/L，硝酸银1-5mg/L，柠檬酸三铵0.1-1.5mg/L。优选地，所述红豆杉培养基由以下成分及其浓度组成：基础培养基B532g/L，蔗糖45g/L，果糖8g/L，萘乙酸1.75mg/L，吲哚-3-乙酸2.34mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸3mg/L，赤霉素1.42mg/L，椰子汁5g/L，猕猴桃汁7.8g/L，活性炭0.89g/L，水杨酸3.2mg/L，茉莉酸甲酯0.13mg/L，硝酸银2.43mg/L，柠檬酸三铵0.78mg/L。蔗糖和果糖是红豆杉细胞培养中主要的碳源，同时蔗糖和果糖的浓度对红豆杉细胞生长和紫衫醇的生成有重要影响。本专利技术技术人员发现在红豆杉培养基中将20-50g/L蔗糖和果糖1-10g/L共同加入，对红豆杉细胞的生长有明显的促进作用。激素是调节植物细胞生长发育和代谢产物形成的主要物质，在本专利技术培养基中，萘乙酸，吲哚-3-乙酸，2,4-二氯苯氧乙酸，并在相应的浓度范围内能够起到促进红豆杉细胞生长的作用。猕猴桃，也称奇异果拉丁学名：ActinidiaChinensis。猕猴桃汁含有丰富的维生素C、维生素E等抗氧化剂，糖类以及钙、磷、钾等扩物质元素；椰子(学名：CocosnuciferaL.)为棕榈科椰子属植物，椰子汁中含糖类、脂肪、蛋白质、生长激素、维生素和大量矿物质元素。本专利技术技术人员发现，在培养基中加入猕猴桃汁和椰子汁，不仅能够有效防止褐变，而且能够明显的促进细胞生长和紫杉醇的积累，取得了意想不到的的技术效果。水杨酸，茉莉酸甲酯和硝酸银是生产紫衫醇的诱导子，柠檬酸三铵是红豆杉细胞生长所需的营养物质，本专利技术培养基中水杨酸，茉莉酸甲酯和硝酸银柠檬酸三铵共同作用，有效促进了紫杉醇的生成。一种红豆杉培养基制备方法，分为以步骤：(1)准确称取B5培养基，蔗糖，果糖，活性炭，硝酸银，柠檬酸三铵溶于1000mL超纯水中，搅拌均匀，116℃高温灭菌30min，得溶液I；(2)将压榨得到的新鲜椰子汁、猕猴桃汁与水杨酸，茉莉酸甲酯，萘乙酸，吲哚-3-乙酸，2,4-二氯苯氧乙酸，赤霉素在无菌条件下加入到上述溶液I中搅拌均匀，经0.22μm的滤膜过滤后，得溶液II；(3)调整上述溶液II的pH为5-6，即得。优选地，所述培养基的pH为5.5-5.8。本专利技术红豆杉培养基可用于红豆杉细胞悬浮培养、红豆杉愈伤组织诱导和继代培养。本专利技术红豆杉培养基各组分搭配合理，并且在相应的浓度范围内各组分相互之间能够起到协同作用。本专利技术红豆杉培养基与现有技术相比，具有以下显著效果：(1)本专利技术培养基用于红豆杉愈伤组织诱导培养时能够提高愈伤组织的生长率和缩短平均出愈时间；(2)本专利技术培养能够有效抑制愈伤组织的褐化情况；(3)本专利技术培养基培养基能够促进紫杉醇的合成积累。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。实施例1一种红豆杉培养基一种红豆杉培养基，由以下成分及其浓度组成：基础培养基B532g/L，蔗糖45g/L，果糖8g/L，萘乙酸1.75mg/L，吲哚-3-乙酸2.34mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸3mg/L，赤霉素1.42mg/L，椰子汁5g/L，猕猴桃汁7.8g/L，活性炭0.89g/L，水杨酸3.2mg/L，茉莉酸甲酯0.13mg/L，硝酸银2.43mg/L，柠檬酸三铵0.78mg/L。所述红豆杉培养基制备方法，分为以步骤：(1)准确称取B5培养基，蔗糖，果糖，萘乙酸，吲哚-3-乙酸，2,4-二氯苯氧乙酸，赤霉素，活性炭，硝酸银，柠檬酸三铵溶于1000mL超纯水中，搅拌均匀，116℃高温灭菌30min，得溶液I；(2)将压榨得到的新鲜椰子汁、猕猴桃汁，水杨酸3.2mg/L，茉莉酸甲酯，经滤径为0.22μm的滤膜过滤后，在无菌条件下加入到上述溶液I中搅拌均匀，得溶液II；(3)调整上述溶液II的pH为5.8，即得。实施例2一种红豆杉培养基一种红豆杉培养基，由以下成分及其浓度：基础培养基B540g/L，蔗糖50g/L，果糖10g/L，萘乙酸2.5mg/L，吲哚-3-乙酸5mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸5mg/L，赤霉素3mg/L，椰子汁10g/L，猕猴桃汁10g/L，活性炭1g/L，水杨酸5mg/L，茉莉酸甲酯0.15mg/L，硝酸银5mg/L，柠檬酸三铵1.5mg/L。所述红豆杉培养基制备方法与实施例1类似。实施例3一种红豆杉培养基一种红豆杉培养基，由以下成分及其浓度：基础培养基B530g/L，蔗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种红豆杉培养基，其特征在于，包括以下成分及其浓度：基础培养基B5 30‑40g/L，蔗糖20‑50g/L，果糖1‑10g/L，萘乙酸0.1‑2.5mg/L，吲哚‑3‑乙酸1‑5mg/L，2,4‑二氯苯氧乙酸1‑5mg/L，赤霉素1‑3mg/L，椰子汁1‑10g/L，猕猴桃汁1‑10g/L，活性炭0.1‑1g/L，水杨酸1‑5mg/L，茉莉酸甲酯0.01‑0.15mg/L，硝酸银1‑5mg/L，柠檬酸三铵0.1‑1.5mg/L。

【技术特征摘要】
1.一种红豆杉培养基，其特征在于，包括以下成分及其浓度：基础培养基B530-40g/L，蔗糖20-50g/L，果糖1-10g/L，萘乙酸0.1-2.5mg/L，吲哚-3-乙酸1-5mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸1-5mg/L，赤霉素1-3mg/L，椰子汁1-10g/L，猕猴桃汁1-10g/L，活性炭0.1-1g/L，水杨酸1-5mg/L，茉莉酸甲酯0.01-0.15mg/L，硝酸银1-5mg/L，柠檬酸三铵0.1-1.5mg/L。2.根据权利要求1所述红豆杉培养基，其特征在于，由以下成分及其浓度组成：基础培养基B532g/L，蔗糖45g/L，果糖8g/L，萘乙酸1.75mg/L，吲哚-3-乙酸2.34mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸3mg/L，赤霉素1.42mg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡波，钟勇财，谢玉国，
申请(专利权)人：江西宜信堂医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36