一种利用微生物发酵提高红景天酪醇含量的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用微生物发酵提高红景天中酪醇含量的方法，包括如下步骤：（1）红景天的预处理：将红景天切片粉碎并干燥；（2）红景天提取液的制备：将步骤（1）所得红景天粉和蒸馏水混合，提取，八层纱布过滤后混合提取液，沉降过夜，离心除杂，上清液用于配制发酵培养基；（3）种子培养基的配制；（4）发酵培养基的配制：将步骤（2）所得的红景天提取液加入0.5%‑2%的葡萄糖中即得；（5）发酵方法：取环酵母菌接种至种子培养基中，过夜培养，再接种至发酵培养基中培养，利用微生物发酵技术提高红景天提取液的酪醇含量。本发明专利技术的有益效果是能够提高酪醇含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物发酵领域，尤其涉及一种利用微生物发酵提高红景天酪醇含量的方法。
技术介绍
红景天系景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola)植物，多年生草本或亚灌木。我国红景天属植物约占世界红景天种资源总量的80％，分布广泛，一般生长在高寒、干燥、缺氧、强紫外线照射、昼夜温差大的高海拔地带，具有极强的环境适应性和顽强的生命力。因其生长环境恶劣，使其具有抗氧化、抗缺氧、抗疲劳、抗辐射、抗衰老、抗病毒，调节神经系统、心脑血管系统和提高免疫力等功效。红景天中的主要有效和活性成分是红景天苷及其苷元酪醇，常以其总含量的高低作为衡量红景天属植物原药材及其制剂质量的标准。但两者在红景天中的含量不高，利用化学方法合成产率低，污染环境，如何在温和的条件下提高有效成分是目前迫切需要解决的问题。中药发酵制药技术是在继承中药炮制学发酵法的基础上，吸取了微生态学研究成果，结合现代生物工程的发酵技术而形成的高科技中药制药新技术。在中药发酵过程中，微生物能产生纤维素酶、木质素酶、淀粉酶、蛋白酶等多种次生代谢产物，使复杂的生物化学反应在常温常压下迅速完成，比一般物理或化学的炮制手段更大幅度地增强和调整药性，提高疗效，降低毒副作用。经过发酵后，可以改变其原有性能，有效成分充分分离、提取，有的更具有生物活性，增强或产生新的功效，扩大临床用药范围，更加适应临床用药的需要。
技术实现思路
本专利提供了一种新的技术，利用微生物发酵制药技术来提高红景天中的酪醇含量，使有效成分增加。本专利技术所采用的技术方案是：一种利用微生物发酵提高红景天中酪醇含量的方法，包括以下步骤：(1)红景天的预处理：将红景天切片粉碎，过40-60目筛；再进行干燥，所述干燥温度为80-100℃，干燥时间2-3小时，使含水量2％-6％，即得红景天粉，备用；(2)红景天提取液的制备：将步骤(1)所得红景天粉和蒸馏水按料水比1:25-1:50的比例100℃提取两次，纱布过滤后混合提取液，补足损失的水分，将提取液在2-8℃冰箱沉降过夜，5000r离心20-30分钟除杂，上清用于配制发酵培养基；(3)种子培养基的配制：将10g酵母粉、20g蛋白胨，20g葡萄糖溶于水，定容至1L，分装在500ml的锥形瓶中，每瓶装液量100ml，115℃灭菌20min；(4)发酵培养基的配制：将步骤(2)所得的红景天提取液加入0.5％-2％的葡萄糖，分装在500ml的锥形瓶中，每瓶装液量100ml，115℃灭菌20min；(5)发酵方法：取环酵母菌CICC1339接种至种子培养基中，过夜培养，再按2％-5％的接种量接种至发酵培养基中，28℃200r培养2-3天；(6)酪醇含量检测方法：将发酵液12000r离心10min除去菌体，上清过0.22μm滤器，采用C18色谱柱，在220nm以25％甲醇为流动相，进样量10μl流速1ml/min，柱温30℃样品分析时间20min。为了取得更好的技术效果，步骤(1)中红景天过完40-60目筛后，未通过的粗粉再粉碎，至全部过40-60目筛。为了取得更好的技术效果，步骤(2)对红景天进行水提取时，每隔5分钟进行一次搅拌。为了取得更好的技术效果，步骤(2)对红景天进行水提取时，每次提取一小时。为了取得更好的技术效果，步骤(2)中纱布过滤时，所用纱布为八层纱布重叠一起。由于采用了上述技术方案，本专利技术与现有技术相比具有如下有益效果：本专利技术采用编号为CICC1339的酵母菌发酵红景天，经发酵后,其有效成分能被充分分离、提取。在酵母菌分泌的多种酶的作用下酪醇的含量明显提高，酪醇含量可由发酵前的0.6mg/g提高到发酵后1.8mg/g，有效成分得到明显提高。本方法可以比一般物理或化学的炮制手段更大幅度地增强和调整药性，提高疗效，降低毒副作用。该方法操作简单，成本低，周期短，是在温和条件下提高红景天有效成分的方法，有利于中药的综合利用，具有广阔的市场前景。具体实施方式实施例1(1)红景天的预处理：将红景天切片20g粉碎，过40-60目筛，中粉及细粉留用，粗粉再粉碎，至全部过60目筛；再进行干燥，所述干燥温度为80℃，干燥时间2小时，使含水量6％,即得红景天粉，备用。(2)红景天提取液的制备：将步骤(1)所得红景天粉和蒸馏水按料水比1:25的比例100℃提取两次，每次一小时，八层纱布过滤后混合提取液，补足水分。将提取液在4℃冰箱沉降过夜，5000r离心20分钟除杂，上清用于配制发酵培养基。(3)种子培养基的配制：将10g酵母粉、20g蛋白胨，20g葡萄糖溶于水，定容至1L，分装在500ml的锥形瓶中，每瓶装液量100ml，115℃灭菌20min。(4)发酵培养基的配制：将步骤(2)所得的红景天提取液加入2％的葡萄糖，分装在500ml的锥形瓶中，每瓶装液量100ml，115℃灭菌20min。(5)发酵方法：取一环酵母菌CICC1339接种至种子培养基中，过夜培养，再按5％的接种量接种至发酵培养基中，28℃200r培养3天。(6)酪醇含量检测方法：将发酵液12000r离心10min除去菌体，过0.22μm滤器，采用C18色谱柱，在220nm以25％甲醇为流动相，进样量10μl流速1ml/min，柱温30℃样品分析时间20min。最终得到酪醇含量1.5mg/g，比发酵前提高了150％。实施例2(1)红景天的预处理：将红景天切片粉碎20g，过60目筛，中粉及细粉留用，粗粉再粉碎，至全部过60目筛；再进行干燥，所述干燥温度为100℃，干燥时间3小时，使含水量5％,即得红景天粉，备用。(2)红景天提取液的制备：将步骤(1)所得红景天粉和蒸馏水按料水比1:25的比例100℃提取两次，每次一小时，八层纱布过滤后混合提取液，补足水分。将提取液在5℃冰箱沉降过夜，5000r离心30分钟除杂，上清用于配制发酵培养基。(3)种子培养基的配制：将10g酵母粉、20g蛋白胨，20g葡萄糖溶于水，定容至1L，分装在500ml的锥形瓶中，每瓶装液量100ml，115℃灭菌20min。(4)发酵培养基的配制：将步骤(2)所得的红景天提取液加入1％的葡萄糖，分装在500ml的锥形瓶中，每瓶装液量100ml，115℃灭菌20min。(5)发酵方法：取一环酵母菌CICC1339接种至种子培养基中，过夜培养，再按4％的接种量接种至发酵培养基中，28℃200r培养3天。(6)酪醇含量检测方法：将发酵液12000r离心10min除去菌体，过0.22μm滤器，采用C18色谱柱，在220nm以25％甲醇为流动相，进样量10μl流速1ml/min，柱温30℃样品分析时间20min，最终得到酪醇含量1.6mg/g，比发酵前提高了166％。实施例3(1)红景天的预处理：将红景天切片20g粉碎，过50目筛，中粉及细粉留用，粗粉再粉碎，至全部过50目筛；再进行干燥，所述干燥温度为90℃，干燥时间3小时，使含水量4％,即得红景天粉，备用。(2)红景天提取液的制备：将步骤(1)所得红景天粉和蒸馏水按料水比1:25的比例100℃提取两次，每次一小时，八层纱布过滤后混合提取液，补足水分。将提取液在4℃冰箱沉降过夜，5000r离心25分钟除杂，上清用于配制发酵培养基。(3)种子培养基的配制：将10g酵母粉、20本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用微生物发酵提高红景天中酪醇含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）红景天的预处理：将红景天切片粉碎，过40‑60目筛；再进行干燥，所述干燥温度为80‑100℃，干燥时间2‑3小时，使含水量2%‑6%，即得红景天粉，备用；（2）红景天提取液的制备：将步骤（1）所得红景天粉和蒸馏水按料水比1:25‑1:50的比例100℃提取两次，纱布过滤后混合提取液，补足损失的水分，将提取液在2‑8℃冰箱沉降过夜，5000r离心20‑30分钟除杂，上清用于配制发酵培养基；（3）种子培养基的配制：将10g酵母粉、20g蛋白胨，20g葡萄糖溶于水，定容至1L，分装在500ml的锥形瓶中，每瓶装液量100ml，115℃灭菌20min；（4）发酵培养基的配制：将步骤（2）所得的红景天提取液加入0.5%‑2%的葡萄糖，分装在500ml的锥形瓶中，每瓶装液量100ml，115℃灭菌20min；（5）发酵方法：取环酵母菌CICC1339接种至种子培养基中，过夜培养，再按2%‑5%的接种量接种至发酵培养基中，28℃ 200r培养2‑3天；（6）酪醇含量检测方法：将发酵液12000r离心10min除去菌体，上清过0.22μm滤器，采用C18色谱柱，在220nm以25%甲醇为流动相，进样量10μl流速1ml/min，柱温30℃样品分析时间20min。...

【技术特征摘要】
1.一种利用微生物发酵提高红景天中酪醇含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）红景天的预处理：将红景天切片粉碎，过40-60目筛；再进行干燥，所述干燥温度为80-100℃，干燥时间2-3小时，使含水量2%-6%，即得红景天粉，备用；（2）红景天提取液的制备：将步骤（1）所得红景天粉和蒸馏水按料水比1:25-1:50的比例100℃提取两次，纱布过滤后混合提取液，补足损失的水分，将提取液在2-8℃冰箱沉降过夜，5000r离心20-30分钟除杂，上清用于配制发酵培养基；（3）种子培养基的配制：将10g酵母粉、20g蛋白胨，20g葡萄糖溶于水，定容至1L，分装在500ml的锥形瓶中，每瓶装液量100ml，115℃灭菌20min；（4）发酵培养基的配制：将步骤（2）所得的红景天提取液加入0.5%-2%的葡萄糖，分装在500ml的锥形瓶中，每瓶装液量100ml，115℃灭菌20min；（5）发酵方法：取环酵母菌CICC1339接种至种子培养基中，过夜培养，再按2%-5%的接种量接种至发酵培养基中，28℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔长晟，宋明辉，
申请(专利权)人：天津北洋百川生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12