利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，包括以下步骤：步骤一，选取水蛭放入烧杯中，将处理得到的水蛭和甘油混合后放入超声振荡仪，超声振荡得到备用液A，步骤二，将备用液A置于容器内，往容器内添加维生素，调整pH得到备用液B，步骤三，将备用液B进行无氧发酵，获得发酵液，步骤四，将步骤三所得到的发酵液加蜂蜜进行调味，即得水蛭素。本发明专利技术中采用水蛭为原料，按一定工艺制成的水蛭素,该水蛭素可提高五脏功能，增强身体健康水平，心脑血管疾病患者使用这种水蛭素，可有效用于治疗心脑血管疾病，减轻心脑血管疾病患者的痛苦。

【技术实现步骤摘要】
利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法
本专利技术涉及微生物发酵领域，尤其是涉及一种利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法。
技术介绍
水蛭，俗名蚂蟥，在《神农本草经》中已有记载，具有很高的药用价值；在内陆淡水水域内生长繁殖，是中国传统的特种药用水生动物，其干制品泡制后中医入药，具有治疗中风、高血压、清瘀、闭经、跌打损伤等功效。近年新发现水蛭制剂在防治心脑血管疾病方面具有特效，随着水蛭药用价值的深度开发，其市场需求潜力巨大。现有技术中，水蛭素，主要是从吸血水蛭的唾液中分离提纯出来，发现现有技术中提取水蛭素的方法存在以下缺陷：首先，现有的活体提取方法对水蛭素的提取量低。水蛭的耐饥饿能力较强，一次吸饱血后能够多天甚至数月不进食，水蛭只有在进食的过程会分泌大量分泌液，分泌液中含有高含量的水蛭素，而现有的活体提取技术水蛭分泌的分泌液量较少。所以亟需一种利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，用于制备水蛭素，用于治疗心脑血管疾病，减轻心脑血管疾病患者的痛苦。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，通过该利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法所制得的水蛭素，水蛭素是采用水蛭为原料，按一定工艺制成的水蛭素,该水蛭素可提高五脏功能，增强身体健康水平，心脑血管疾病患者使用这种水蛭素，可有效用于治疗心脑血管疾病，减轻心脑血管疾病患者的痛苦。根据本专利技术的一个方面，提供了利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，包括以下步骤：步骤一，选取30-40只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到4-5cm，再向水中滴加5-10ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理7-8天，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:(4-6)进行混合后放入超声振荡仪，以150-200W功率超声振荡40-60min，过滤分离去除滤渣，得到备用液A，步骤二，将步骤一所得到的备用液A置于容器内，往容器内添加维生素8-10g，调整pH5.0-7.0，灭菌后，得到备用液B，步骤三，将备用液B装进装有TB培养基的发酵罐中，发酵罐中装有TB培养基，然后加入乳糖，使乳糖浓度达到4-6mg/ml，然后无氧发酵50-80h，获得发酵液，过滤备用，步骤四，将步骤三所得到的发酵液加蜂蜜3-8g进行调味，即得水蛭素。进一步，所述TB培养基由蛋白胨10-12g、酵母提取物10-15g、甘油4-6ml组成，各组分溶解后高压灭菌，冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mol/L的磷酸二氢钾和0.72mol/L磷酸氢二钾的溶液。进一步，所述步骤二中维生素为维生素A、维生素C、维生素H、维生素PP和维生素T的混合物。进一步，所述步骤二中维生素为维生素A、维生素C、维生素H、维生素PP和维生素T的质量比为(1-2)：(2-3)：(1-2)：(1-3)：(3-4)。进一步，所述步骤一中饥饿处理的温度控制在80-90℃。进一步，所述步骤三无氧发酵的温度为32-40℃。进一步，所述步骤一，选取40只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到5cm，再向水中滴加10ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理8天，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:6进行混合后放入超声振荡仪，以200W功率超声振荡60min，过滤分离去除滤渣，得到备用液A。进一步，所述步骤一，选取30只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到4cm，再向水中滴加5ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理7天，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:4进行混合后放入超声振荡仪，以150W功率超声振荡40min，过滤分离去除滤渣，得到备用液A。本专利技术的利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法为口服药物，服用方法：每日一次，每次取10-13ml冲水50-60ml进行稀释，饭后30分钟温服。有益效果：本专利技术中采用水蛭为原料，按一定工艺制成的水蛭素,该水蛭素可提高五脏功能，增强身体健康水平，心脑血管疾病患者使用这种水蛭素，可有效用于治疗心脑血管疾病，减轻心脑血管疾病患者的痛苦。具体实施方式实施例1本实施例中利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法,包括以下步骤：步骤一，选取40只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到5cm，再向水中滴加10ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理8天，饥饿处理的温度控制在90℃，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:6进行混合后放入超声振荡仪，以200W功率超声振荡60min，过滤分离去除滤渣，得到备用液A，步骤二，将步骤一所得到的备用液A置于容器内，往容器内添加维生素9g，调整pH7.0，灭菌后，得到备用液B，其中，维生素为维生素A、维生素C、维生素H、维生素PP和维生素T的混合物，维生素A、维生素C、维生素H、维生素PP和维生素T的质量比为1：2：2：1：3。步骤三，将备用液B装进装有TB培养基的发酵罐中，发酵罐中装有TB培养基，然后加入乳糖，使乳糖浓度达到6mg/ml，然后无氧发酵80h，无氧发酵的温度为40℃，获得发酵液，过滤备用。所述TB培养基由蛋白胨12g、酵母提取物15g、甘油6ml组成，各组分溶解后高压灭菌，冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mol/L的磷酸二氢钾和0.72mol/L磷酸氢二钾的溶液步骤四，将步骤三所得到的发酵液加蜂蜜8g进行调味，即得水蛭素。本专利技术的利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法为口服药物，服用方法：每日一次，每次取13ml冲水60ml进行稀释，饭后30分钟温服。实施例2本实施例中利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法,包括以下步骤：步骤一，选取30只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到4cm，再向水中滴加5ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理7天，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:4进行混合后放入超声振荡仪，以150W功率超声振荡40min，过滤分离去除滤渣，得到备用液A，步骤二，将步骤一所得到的备用液A置于容器内，往容器内添加维生素8g，调整pH5.0，灭菌后，得到备用液B，其中，维生素为维生素A、维生素C、维生素H、维生素PP和维生素T的混合物，维生素A、维生素C、维生素H、维生素PP和维生素T的质量比为1：2：1：1：3。步骤三，将备用液B装进装有TB培养基的发酵罐中，发酵罐中装有TB培养基，然后加入乳糖，使乳糖浓度达到4mg/ml，然后无氧发酵50h，无氧发酵的温度为32℃，获得发酵液，过滤备用。所述TB培养基由蛋白胨10g、酵母提取物10g、甘油4ml组成，各组分溶解后高压灭菌，冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mol/L的磷酸二氢钾和0.72mol/L磷酸氢二钾的溶液步骤四，将步骤三所得到的发酵液加蜂蜜3g进行调味，即得水蛭素。本专利技术的利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法为口服药物，服用方法：每日一次，每次取10ml冲水50ml进行稀释，饭后30分钟温服。实施例3本实施例中利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法,包括以下步骤：步骤一，选取32只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到4.2cm，再向水中滴加6ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理7.2天，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:5进行混合后放入超声振荡仪，以160W功率超声振荡46min，过滤分离去除滤渣，得本文档来自技高网...

【技术保护点】
利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，选取30‑40只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到4‑5cm，再向水中滴加5‑10ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理7‑8天，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:(4‑6)进行混合后放入超声振荡仪，以150‑200W功率超声振荡40‑60min，过滤分离去除滤渣，得到备用液A，步骤二，将步骤一所得到的备用液A置于容器内，往容器内添加维生素8‑10g，调整pH 5.0‑7.0，灭菌后，得到备用液B，步骤三，将备用液B装进装有TB培养基的发酵罐中，发酵罐中装有TB培养基，然后加入乳糖，使乳糖浓度达到4‑6mg/ml，然后无氧发酵50‑80h，获得发酵液，过滤备用，步骤四，将步骤三所得到的发酵液加蜂蜜3‑8g进行调味，即得水蛭素。

【技术特征摘要】
1.利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，选取30-40只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到4-5cm，再向水中滴加5-10ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理7-8天，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:(4-6)进行混合后放入超声振荡仪，以150-200W功率超声振荡40-60min，过滤分离去除滤渣，得到备用液A，步骤二，将步骤一所得到的备用液A置于容器内，往容器内添加维生素8-10g，调整pH5.0-7.0，灭菌后，得到备用液B，步骤三，将备用液B装进装有TB培养基的发酵罐中，发酵罐中装有TB培养基，然后加入乳糖，使乳糖浓度达到4-6mg/ml，然后无氧发酵50-80h，获得发酵液，过滤备用，步骤四，将步骤三所得到的发酵液加蜂蜜3-8g进行调味，即得水蛭素。2.根据权利要求1所述的利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，其特征在于，所述TB培养基由蛋白胨10-12g、酵母提取物10-15g、甘油4-6ml组成，各组分溶解后高压灭菌，冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mol/L的磷酸二氢钾和0.72mol/L磷酸氢二钾的溶液。3.根据权利要求1所述的利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，其特征在于，所述步骤二中维生素为维生素A、维生素C、维生素H、维生素PP和维生素T的混合物。4.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：何颖，
申请(专利权)人：广州凯耀资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44