检测NOP10基因第2号外显子突变位点R34W（C100T)序列突变的方法和引物技术

本发明专利技术公开了检测NOP10基因第2号外显子突变位点R34W(C100T)序列的方法和引物，包括扩增NOP10第2号外显子突变位点R34W(C100T)序列的正、反向引物和一对测序引物。将Touch‑down PCR扩增和Sanger测序相结合，可快速检测先天性角化不良症患者体内NOP10基因第2号外显子突变位点R34W(C100T)序列的突变情况。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生命科学和生物
，特别涉及检测NOP10基因第2号外显子突变位点R34W(C100T)序列的引物、方法和试剂盒。
技术介绍
先天性角化不良症(dskeratosiseongenita，DC)是一种具有遗传异质性的骨髓衰竭综合征，发病率约为1/100万。典型的DC患者约80％～90％具有皮肤黏膜异常三联征，表现为皮肤网状色素沉着、指(趾)甲萎缩、口腔黏膜白斑。目前文献报道可引起DC的突变基因主要有CTC1，DKC1，TERC，TERT，TINF2，NHP2，NOP10及WRAP53。文献报道，这些基因有3种遗传方式，分别为X-连锁隐性遗传、常染色体隐性遗传、常染色体显性遗传。但目前仍约50％患者遗传特征不明确。X-连锁隐性遗传包括DKC1，常染色体显性遗传包括TERC及TINF2，常染色体隐性遗传包括CTC1，WRAP53，NHP2，NOP10，既可以作为常染色体显性遗传又可以作为隐性遗传的有TERT。NOP10位于15q14-q15位点负责编码端粒酶相关蛋白复合体组分蛋白的基因。NOP10蛋白是端粒酶相关蛋白复合体的核心蛋白之一，与dyskerin、NHP2、GA本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测NOP10基因第2号外显子突变位点R34W(C100T)序列的引物，其特征在于，包括：扩增NOP10基因第2号外显子突变位点R34W(C100T)序列的正、反向引物；其碱基序列为：NOP10‑F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTGACCATTGCATCTTCTATTTTCNOP10‑R：AACAGCTATGACCATGTCCCTTTATGGGTGATGCCAC。

【技术特征摘要】
1.检测NOP10基因第2号外显子突变位点R34W(C100T)序列的引物，其特征在于，包括：扩增NOP10基因第2号外显子突变位点R34W(C100T)序列的正、反向引物；其碱基序列为：NOP10-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTGACCATTGCATCTTCTATTTTCNOP10-R：AACAGCTATGACCATGTCCCTTTATGGGTGATGCCAC。2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物还包括一对测序引物，测序通用引物为M13，其碱基序列为：M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTM13-R：AACAGCTATGACCATG。3.如权利要求1至2之一所述的引物，其特征在于，所述正、反向引物的使用浓度比为：NOP10-F:NOP10-R＝1:1。4.如权利要求1至2之一所述的引物，其特征在于，所述一对测序引物的使用浓度比为：M13-F:M13-R＝1:1。5.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述正、反向扩增引物的扩增反应条件为：第一阶段，95℃预变性10min；第二阶段，变性温度94℃30sec，退火温度64℃90sec，延伸温度72℃30sec，循环16次，每循环一次，所述退火温度降低0.5℃；第三阶段，变性温度94℃30sec，退火温度58℃30sec，延伸温度72℃30sec，循环24次；第四阶段，72℃10m...

【专利技术属性】
技术研发人员：单战，林有升，王淑一，
申请(专利权)人：北京艾迪康医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11