基因突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了分离的核酸、分离的多肽、筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的方法、筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的系统以及用于筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的试剂盒。其中，分离的编码DNAH5的核酸，与SEQ ID NO：1相比具有c.G8030A突变，或者分离的编码DNAH11的核酸与SEQ ID NO：3相比具有c.C6265T突变。通过检测这些突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感原发性纤毛运动障碍征。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因突变体及其应用。具体地，本专利技术涉及分离的核酸、分离的多肽、筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的方法、筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的系统、用于筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的试剂盒、构建体以及重组细胞。
技术介绍
原发性纤毛运动障碍(primaryciliarydyskinesia，PCD)，又称纤毛不动综合征(immobileciliasyndrome)，是因纤毛结构缺陷导致活动障碍引起纤毛清除功能降低及其他功能障碍的基因遗传病。该病临床表现多样，可累及多个器官组织，其诊断和鉴别诊断存在困难。PCD现阶段，寻找致病基因对疾病诊断或治疗意义重大。虽然目前已发现一些PCD的致病基因，但热点率相对较低，且目前已报道的PCD亚型多达18个，涉及数十几个基因，因此，仍存在着相当一部分未知致病基因位点。因而，目前对原发性纤毛运动障碍征的研究仍有待深入。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种能够有效筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的方法。本专利技术是基于专利技术人的下列工作而完成的：专利技术人通过高通量外显子组测序联合候选基因突变验证的方法确定了原发性纤毛运动障碍征的致病基因上的新突变。根据本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种分离的核酸。根据本专利技术的实施例，与SEQIDNO：1相比，该核酸具有c.G8030A突变；或者与SEQIDNO：3相比，该核酸具有c.C6265T突变。根据本专利技术的实施例，专利技术人确定了DNAH5和DNAH11基因突变体，这些新突变体与原发性纤毛运动障碍征的发病密切相关，从而通过检测这些新突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感原发性纤毛运动障碍征。根据本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种分离的多肽。根据本专利技术的实施例，与SEQIDNO：2相比，该分离的多肽具有p.R2677Q突变；或者与SEQIDNO：4相比，该分离的多肽具有p.R2089*突变。通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品是否易感原发性纤毛运动障碍征。根据本专利技术的第三方面，本专利技术提出了一种筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括以下步骤：从生物样品提取核酸样本；确定所述核酸样本的核酸序列；所述核酸样本的核酸序列或其互补序列，与SEQIDNO：1相比具有c.G8030A突变，或者与SEQIDNO：3相比具有c.C6265T突变，是所述生物样品易感原发性纤毛运动障碍征的指示。通过根据本专利技术实施例的筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的方法，可以有效地筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品。根据本专利技术的第四方面，本专利技术提出了一种筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的系统。根据本专利技术的实施例，该系统包括：核酸提取装置，所述核酸提取装置用于从所述生物样品提取核酸样本；核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装置与所述核酸提取装置相连，用于对所述核酸样本进行分析，以便确定所述核酸样本的核酸序列；判断装置，所述判断装置与所述核酸序列确定装置相连，以便基于所述核酸样本的核酸序列或其互补序列，与SEQIDNO：1相比具有c.G8030A突变，或者与SEQIDNO：3相比具有c.C6265T突变，判断所述生物样品是否易感原发性纤毛运动障碍征。利用该系统，能够有效地实施前述筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的方法，从而可以有效地筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品。根据本专利技术的第五方面，本专利技术提出了一种用于筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的试剂盒。根据本专利技术的实施例，该试剂盒含有：适于检测DNAH5和DNAH11基因突变体的至少一种的试剂，其中与SEQIDNO：1相比，所述DNAH5基因突变体具有c.G8030A突变；与SEQIDNO：3相比，所述DNAH11基因突变体具有c.C6265T突变。利用根据本专利技术的实施例的试剂盒，能够有效地筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品。根据本专利技术的第六方面，本专利技术还提出了一种构建体。根据本专利技术的实施例，该构建体包含前面所述的分离的核酸。需要说明的是，“构建体包含前面所述的分离的核酸”表示，本专利技术的构建体包含与SEQIDNO：1相比具有c.G8030A突变的DNAH5基因突变体的核酸序列，或者包含与SEQIDNO：3相比具有c.C6265T突变的DNAH11基因突变体的核酸序列，或者同时包含上述DNAH5基因突变体和DNAH11基因突变体的核酸序列。由此，利用本专利技术的构建体转化受体细胞获得的重组细胞，能够有效地用于筛选治疗原发性纤毛运动障碍征的药物。根据本专利技术的第七方面，本专利技术还提出了一种重组细胞。根据本专利技术的实施例，该重组细胞是通过前面所述的构建体转化受体细胞而获得的。根据本专利技术的一些实施例，，利用本专利技术的重组细胞，能够有效地筛选治疗原发性纤毛运动障碍征的药物。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1：显示了根据本专利技术一个实施例的筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的系统及其组成部分的示意图，其中，A为根据本专利技术实施例的筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的系统的示意图，B为根据本专利技术实施例的核酸提取装置的示意图，C为根据本专利技术实施例的核酸序列确定装置的示意图；图2：显示了根据本专利技术一个实施例的两个PCD患者家系的家系图谱，其中，A为根据本专利技术实施例的PCD患者家系1的家系图谱，B为根据本专利技术实施例的PCD患者家系2的家系图谱；图3：显示了根据本专利技术一个实施例，PCD患者家系1内的先证者及其父母的DNAH5基因突变位点的Sanger测序验证峰图；图4：显示了根据本专利技术一个实施例，PCD患者家系2内的先证者及其父母DNAH11基因突变位点的Sanger测序验证峰图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。DNAH5及DNAH11基因突变体根据本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种分离的核酸。根据本专利技术的实施例，与SEQIDNO：1相比，该核酸具有c.G8030A突变；或者与SEQIDNO：3相比，该核酸具有c.C6265T突变。需要说明的是，本专利技术的分离的核酸编码DNAH5或者DNAH11突变体，也可以称为“编码DNAH5或者DNAH11突变体的核酸”，即该核酸可以理解为与编码DNAH5或者DNAH11突变体的基因相对应的核酸物质，即核酸的类型不受特别限制，可以是任何包含与DNAH5和DNAH11的编码基因相对应的脱氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根据本专利技术的一个具体示例，前面所述的编码DNAH5和DNAH11突变体的核酸为DNA。根据本专利技术的实施例，专利技术人确定了DNAH5和DNAH11基因的新突变体，该突变体与原发性纤毛运动障碍征的发病密切相关，从而通过检测该突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感原发性纤毛运动障碍征，也可以通过检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的核酸，其特征在于，与SEQ ID NO：3相比，所述核酸具有c.C6265T突变，任选地，所述核酸为DNA。

【技术特征摘要】
1.一种分离的核酸，其特征在于，与SEQIDNO：3相比，所述核酸具有c.C6265T突变，任选地，所述核酸为DNA。2.一种分离的多肽，其特征在于，与SEQIDNO：4相比，所述分离的多肽具有p.R2089*突变，任选地，所述多肽是由权利要求1所述的核酸编码的。3.一种筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的方法，其特征在于，包括以下步骤：从所述生物样品提取核酸样本；确定所述核酸样本的核酸序列；所述核酸样本的核酸序列或其互补序列，与SEQIDNO：3相比具有c.C6265T突变，是所述生物样品易感原发性纤毛运动障碍征的指示，任选地，所述生物样品为选自人体血液、皮肤、毛发和肌肉的至少一种，任选地，所述核酸样本为全基因组DNA。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，从所述生物样品提取核酸样本进一步包括：从所述生物样品提取RNA样本，优选所述RNA样本为mRNA；以及基于所述RNA样本，通过反转录反应，获得cDNA样本，所述cDNA样本构成所述核酸样本。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，确定所述核酸样本的核酸序列进一步包括：针对所述核酸样本，构建核酸测序文库；以及对所述核酸测序文库进行测序，以便获得由多个测序数据构成的测序结果，任选地，采用选自Hiseq2000、SOLiD、454和单分子测序装置的至少一种对所述核酸测序文库进行测序，任选地，针对所述核酸样本，构建核酸测序文库进一步包括：利用选自DNAH11基因外显子特异性引物的至少一种，对所述核酸样本进行PCR扩增；以及针对所得到的扩增产物，构建所述核酸测序文库，任选地，所述DNAH11基因外显子特异性引物具有如SEQIDNO：7-8所示的核苷酸序列。6.一种筛选易感原发性纤毛运动障碍征的生物样品的系统，其特征在于，包括：核酸提取装置，所述核酸提取装置用于从所述生物样品提取核酸样本；核酸序列确定装置，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪田，张静，管李萍，朱庆燕，张建国，王俊，汪建，杨焕明，李华斌，文卫平，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，深圳华大基因科技有限公司，中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：北京;11