一种卡那霉素抗体及其制备工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种卡那霉素抗体及其制备工艺，按照重量份数由如下原料组成：硫酸卡那霉素58‑80份、牛血清白蛋白5‑25份、卵清白蛋白3‑5份、弗氏完全佐剂3‑5份、弗氏不完全佐剂3‑5份、碳二亚胺3‑5份、戊二醛1‑2份、羊抗鼠酶标二抗1‑3份、磷酸氢二钠2‑3份、醋酸钠8‑10份、十二烷基磺酸钠15‑20份、考马斯亮蓝R‑250 10‑15份、过氧化脲8‑12份、乙醇6‑11份、甲醛5‑7份、磷酸盐缓冲液1‑3份、洗涤液PBST 1‑3份、封闭液5%猪血清1‑3份，以硫酸卡那霉素和牛血清白蛋为主要原料，采用偶联方法制备出可以与酶标抗原竞争结合包被的抗体，整个反应过程具有简单、高效、经济、可操作性强等特点。

Kanamycin antibody and preparation process thereof

\u672c\u53d1\u660e\u516c\u5f00\u4e86\u4e00\u79cd\u5361\u90a3\u9709\u7d20\u6297\u4f53\u53ca\u5176\u5236\u5907\u5de5\u827a\uff0c\u6309\u7167\u91cd\u91cf\u4efd\u6570\u7531\u5982\u4e0b\u539f\u6599\u7ec4\u6210\uff1a\u786b\u9178\u5361\u90a3\u9709\u7d2058\u201180\u4efd\u3001\u725b\u8840\u6e05\u767d\u86cb\u767d5\u201125\u4efd\u3001\u5375\u6e05\u767d\u86cb\u767d3\u20115\u4efd\u3001\u5f17\u6c0f\u5b8c\u5168\u4f50\u52423\u20115\u4efd\u3001\u5f17\u6c0f\u4e0d\u5b8c\u5168\u4f50\u52423\u20115\u4efd\u3001\u78b3\u4e8c\u4e9a\u80fa3\u20115\u4efd\u3001\u620a\u4e8c\u919b1\u20112\u4efd\u3001\u7f8a\u6297\u9f20\u9176\u6807\u4e8c\u62971\u20113\u4efd\u3001\u78f7\u9178\u6c22\u4e8c\u94a02\u20113\u4efd\u3001\u918b\u9178\u94a08\u201110\u4efd\u3001\u5341\u4e8c\u70f7\u57fa\u78fa\u9178\u94a015\u201120\u4efd\u3001\u8003\u9a6c\u65af\u4eae\u84ddR\u2011250\u00a010\u201115\u4efd\u3001\u8fc7\u6c27\u5316\u81328\u201112\u4efd\u3001\u4e59\u91876\u201111\u4efd\u3001\u7532\u919b5\u20117\u4efd\u3001\u78f7\u9178\u76d0\u7f13\u51b2\u6db21\u20113\u4efd\u3001\u6d17\u6da4\u6db2PBST\u00a01\u20113\u4efd\u3001\u5c01\u95ed\u6db25%\u732a\u8840\u6e051\u20113\u4efd\uff0c\u4ee5\u786b\u9178\u5361\u90a3\u9709\u7d20\u548c\u725b\u8840\u6e05\u767d\u86cb\u4e3a\u4e3b\u8981\u539f\u6599\uff0c\u91c7\u7528\u5076\u8054\u65b9\u6cd5\u5236\u5907\u51fa\u53ef\u4ee5\u4e0e\u9176\u6807\u6297\u539f\u7ade\u4e89\u7ed3\u5408\u5305\u88ab\u7684\u6297\u4f53\uff0c\u6574\u4e2a\u53cd\u5e94\u8fc7\u7a0b\u5177 It is simple, efficient, economical and easy to operate.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及卡那霉素抗体制备领域，具体涉及一种卡那霉素抗体及制备工艺。
技术介绍
近年来，随着抗生素等兽药添加剂在农牧业领域里的应用不断扩张，抗生素污染问题、兽药残留问题已日益严重。抗生素等兽药半衰期长、自然条件下很难被分解，对环境危害巨大。如果不加控制的作为动物食品添加剂，抗生素在动物源性食品中会形成一定的残留，如果人类长期服用此类含有抗生素残留的食品，将对健康造成严重威胁。细菌的耐药性指的是细菌与某种药物多次接触后，对该药物的敏感性下降甚至对其敏感性消失的现象。如果细菌长期接触这些残留的低浓度药物，就会使其产生一定的耐药性，而且细菌的耐药性可以通过动物群中的细菌、人群中的细菌与生态系统中的细菌互相传递，可能会达到无法操控的规模。细菌耐药性这一现象的危害不容忽视，它不仅能使得抗生素的疗效在一定程度上减弱或失效；更严峻的是，由于其疗效减弱，导致生产者增加投药剂量，势必造成药物残留量的增加，由此形成一个恶性循环，加重耐药菌的普遍化。由此将导致严峻的人类环境问题及公共卫生问题。氨基糖苷类抗生素能有效抑制细菌生长，它主要作用于细菌体内的核糖体30s亚基发生集聚反应，从而抑制细菌体内蛋白质的合成、阻碍已合成蛋白的释放。具体过程为：氨基糖苷类抗生素通过细胞外膜的孔蛋白，然后经Ⅰ期转运系统摄入细胞内，此过程为能量依赖过程，受钙离子、镁离子等离子及高渗、低氧和酸碱性等因素的影响，可被此类因素阻断。当氨基糖苷类抗生素与细胞核糖体的30S亚基发生积聚时，可引起Ⅱ期转运系统参与，此过程可导致大量氨基糖苷类抗生素在细胞内迅速积聚，阻断正常的肽链延长过程，造成遗传密码mRNA的错误解读，从而阻碍正常蛋白质的合成。这些非正常蛋白质进入细菌细胞膜，可引起细胞膜断裂，致使胞内的核苷酸、钾离子、腺嘌呤等参与生命活动的重要物质外漏，从而直接导致细菌死亡。氨基糖苷类抗生素对革兰氏阴性细菌的抑制效果良好，但对革兰氏阳性细菌的抑制效果较差。
技术实现思路
针对以上问题，本专利技术提供了一种卡那霉素抗体及制备工艺，利用分子的官能团等功能基团，并添加一些偶联试剂，产生一定的化学反应从而实现半抗原与载体分子偶联，可以有效解决
技术介绍
中的问题。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种卡那霉素抗体及制备工艺，按照重量份数由如下原料组成：硫酸卡那霉素58-80份、牛血清白蛋白5-25份、卵清白蛋白3-5份、弗氏完全佐剂3-5份、弗氏不完全佐剂3-5份、碳二亚胺3-5份、戊二醛1-2份、羊抗鼠酶标二抗1-3份、磷酸氢二钠2-3份、醋酸钠8-10份、十二烷基磺酸钠15-20份、考马斯亮蓝R-250 10-15份、过氧化脲8-12份、乙醇6-11份、甲醛5-7份、硼氢化钠8-13份、甲醇1-3份、浓硫酸1-3份、磷酸盐缓冲液1-3份、包被用碳酸盐缓冲液CBS1-3份、洗涤液PBST 1-3份、封闭液5%猪血清1-3份，ELISA试验显色液1-3份、ELISA试验终止液1-3份。根据上述技术方案，所述ELISA试验显色液必须现用现配，由两种试剂（试剂一、试剂二）等体积混合而成，试剂一：取150mL0.1mol的柠檬酸与850mL等摩尔浓度的醋酸钠混合，在此混合液中加入0.5g的过氧化脲，充分溶解后再在混合液中加入0.08g非那西汀，混匀，于4℃保存；准确称取1.27g四甲基联苯胺，加热搅拌使其充分溶于甲醇溶液中，再将混合液加入500mL甘油中，充分混合4℃保存备用。根据上述技术方案，所述ELISA试验终止液配置：取约43mL浓硫酸，缓慢加入356.5mL去离子水中边加边搅拌，制成2mol/L的硫酸溶液，室温保存备用。根据上述技术方案，所述封闭液5%猪血清在4℃条件下保存备用。根据上述技术方案，所述乙醇的纯度为30%。另外本专利技术还设计了一种卡那霉素抗体的制备工艺，包括如下步骤：（1）准确称取牛血清白蛋白20mg，碳二亚胺55mg，使之充分溶解于2mL0.01M的PBS中，得到反应液为A液；（2）按配方进行配料，准确称取卡那霉素标准品50mg，加入1.5mL0.01M的PBS中，边加边搅拌，使之充分溶解后所得溶液称为B液；（3）将上述B液逐滴加入A液中（边加入边搅拌），密封，避光，在4℃下搅拌过夜；（4）待上述反应完后，将反应液转移到处理好的透析袋中，在4℃环境下用0.01M的PBS透析3天。根据上述技术方案，所述步骤（1）中，反应液在0.01M的PBS中在4℃环境下避光搅拌反应6h。根据上述技术方案，所述步骤（4）中，反应液的透析分为恒温透析、换液透析和降温透析。根据上述技术方案，所述恒温透析是将温度调至4℃，并保持恒定；所述换液透析是指透析液需要每间隔一定的时间进行换液，在透析第一天每3h换液一次，以后每8-10h换液一次；所述降温透析是指在透析完成后，将偶联产物分装于1.5ml离心管中，将温度降至-20℃保存备用。本专利技术的有益效果：本专利技术以硫酸卡那霉素和牛血清白蛋为主要原料，加入一定量的碳二亚胺、醋酸钠、包被用碳酸盐缓冲液CBS，采用偶联方法制备出可以与酶标抗原竞争结合包被的抗体，整个反应过程具有简单、高效、经济、可操作性强等特点。附图说明图1为本专利技术抗卡那霉素多抗血清稀释倍数与ELISA测定多抗血清敏感性的关系图。图2为本专利技术KAN标准品浓度与ELISA测定多抗血清敏感性关系图。图3为本专利技术ELISA测定多抗血清敏感性的关系曲线图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1：一种卡那霉素抗体，按照重量份数由如下原料制备而成：硫酸卡那霉素58份、牛血清白蛋白5份、卵清白蛋白3份、弗氏完全佐剂3份、弗氏不完全佐剂3份、碳二亚胺3份、戊二醛1份、羊抗鼠酶标二抗1份、磷酸氢二钠2份、醋酸钠8份、十二烷基磺酸钠15份、考马斯亮蓝R-250 10份、过氧化脲8份、乙醇6份、甲醛5份、硼氢化钠8份、甲醇1份、浓硫酸1份、磷酸盐缓冲液2份、包被用碳酸盐缓冲液CBS 1份、洗涤液PBST 1份、封闭液5%猪血清1份，ELISA试验显色液1份、ELISA试验终止液2份。所述ELISA试验显色液选用0.25毫升；所述ELISA试验终止液选用0.5毫升；所述封闭液5%猪血清在4℃条件下保存备用；所述乙醇的纯度为30%。其制备工艺，包括如下步骤：（1）准确称取牛血清白蛋白20mg，碳二亚胺55mg，使之充分溶解于2mL0.01M的PBS中，得到反应液为A液；（2）按配方进行配料，准确称取卡那霉素标准品50mg，加入1.5mL0.01M的PBS中，边加边搅拌，使之充分溶解后所得溶液称为B液；（3）将上述B液逐滴加入A液中（边加入边搅拌），密封，避光，在4℃下搅拌过夜，反应液在0.01M的PBS中在4℃环境下避光搅拌反应6h；（4）待上述反应完后，将反应液转移到处理好的透析袋中，在4℃环境下用0.01M的PBS透析3天；反应液的透析分为恒温透析、换液透析、和降温透析；所述恒温透析是将温度调至4℃，并保持恒定；所述换液透析是指透析液需要每间隔一定的时间进行换液，在透析第一天每3h换液一次，以后每8-10h换液一次；所述降温透析是指在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种卡那霉素抗体，其特征在于，按照重量份数计由如下原料制备而成：硫酸卡那霉素58‑80份、牛血清白蛋白5‑25份、卵清白蛋白3‑5份、弗氏完全佐剂3‑5份、弗氏不完全佐剂3‑5份、碳二亚胺3‑5份、戊二醛1‑2份、羊抗鼠酶标二抗1‑3份、磷酸氢二钠2‑3份、醋酸钠8‑10份、十二烷基磺酸钠15‑20份、考马斯亮蓝R‑250 10‑15份、过氧化脲8‑12份、乙醇6‑11份、甲醛5‑7份、硼氢化钠8‑13份、甲醇1‑3份、浓硫酸1‑3份、磷酸盐缓冲液1‑3份、包被用碳酸盐缓冲液CBS 1‑3份、洗涤液PBST 1‑3份、封闭液5%猪血清1‑3份，ELISA试验显色液1‑3份、ELISA试验终止液1‑3份。

【技术特征摘要】
1.一种卡那霉素抗体，其特征在于，按照重量份数计由如下原料制备而成：硫酸卡那霉素58-80份、牛血清白蛋白5-25份、卵清白蛋白3-5份、弗氏完全佐剂3-5份、弗氏不完全佐剂3-5份、碳二亚胺3-5份、戊二醛1-2份、羊抗鼠酶标二抗1-3份、磷酸氢二钠2-3份、醋酸钠8-10份、十二烷基磺酸钠15-20份、考马斯亮蓝R-250 10-15份、过氧化脲8-12份、乙醇6-11份、甲醛5-7份、硼氢化钠8-13份、甲醇1-3份、浓硫酸1-3份、磷酸盐缓冲液1-3份、包被用碳酸盐缓冲液CBS 1-3份、洗涤液PBST 1-3份、封闭液5%猪血清1-3份，ELISA试验显色液1-3份、ELISA试验终止液1-3份。2.根据权利要求1所述的一种卡那霉素抗体，其特征在于，所述ELISA试验显色液必须现用现配，由试剂一、试剂二等体积混合而成；试剂一：取150mL0.1mol的柠檬酸与850mL等摩尔浓度的醋酸钠混合，在此混合液中加入0.5g的过氧化脲，充分溶解后再在混合液中加入0.08g非那西汀，混匀，于4℃保存；试剂二：准确称取1.27g四甲基联苯胺，加热搅拌使其充分溶于甲醇溶液中，再将混合液加入500mL甘油中，充分混合4℃保存备用。3.根据权利要求1所述的一种卡那霉素抗体，其特征在于，所述ELISA试验终止液的配置：取约43mL浓硫酸，缓慢加入356.5mL去离子水中边加边搅拌，制成2mol/L的硫酸溶液，室温保存备...

【专利技术属性】
技术研发人员：王作弟，
申请(专利权)人：陕西思尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61