一种热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体，由甘露糖赤藓糖醇脂和卵磷脂在水溶液中自组装制成。本发明专利技术还提供了该载体的制备方法和应用。本发明专利技术提供的载体具有热力学稳定性，对疏水性物质有较好的包埋作用，且所用材料安全无毒，无需其他助剂，制备方法简单可行，成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体及其制备方法和应用，属于生物材料与食品添加剂领域。
技术介绍
近年来，两亲性分子依靠自组装性质形成的特殊结构，如胶束、囊泡、凝聚层等，在生命科学、材料等领域的研究受到极大关注。其中，脂质载体是由两亲分子的疏水尾部聚集在一起，而亲水头部暴露于水相，形成的具有双分子层结构的封闭囊泡。脂质载体可作为水溶性药物或基因的载体，也可以利用双分子层结构载运油溶性的物质(Imura，Yanagishita，Ohira，等，2005)。然而，其应用却受到限制，主要是因为大多数靠外能量，如超声等形成的载体在溶液中具有热不稳定性。因此，制备稳定的脂质载体极为重要。甘露糖赤藓糖醇脂MEL-A是一种天然生物表面活性剂，它具有自组装性质，无需其他助剂便能够在水中自发形成囊泡结构。而且MEL-A是反向弯曲脂质，与其他脂质复配能够引起两脂质成分的不对称分布，进而促使体系趋于稳定。Kim等(Kim，Jeong，Kim，等，2014)利用MELs与神经酰胺PC104之间的分子相互作用以及其不对称的分子结构，制备了PC104稳定的纳米乳液。Yoshikazu等(Inoh，Kitamoto，Hirashima，等，2004)利用MEL-A制备了稳定的阳离子脂质体，提高了膜融合和基因转染速率。Ueno等(Ueno，Hirashima，Inoh，等，2007)制备了含有MEL的稳定脂质体，作为载体用于基因转染。综上可以看出，将MEL-A应用于脂质体的制备，不仅能够得到稳定性的脂质载体结构，解决现有方法制备的载体不稳定的问题，而且能够扩大MEL-A的应用范围。尤其MEL-A作为一种天然生物材料，安全无毒，其可作为食品中营养因子、抗氧化剂、抑菌剂等许多疏水性及不稳定性活性成分的载体，解决活性疏水分子的水溶性与载运难题。
技术实现思路
本专利技术提供了一种热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体，具有热力学稳定性，能解决现有方法制备的载体不稳定和疏水性食品分子难溶的问题。一种热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体，由甘露糖赤藓糖醇脂和卵磷脂在水溶液中自组装制成。甘露糖赤藓糖醇脂(MEL-A)是一种天然生物表面活性剂，既有优良的表面性能，又易于在环境中被生物降解，与卵磷脂自组装得到的脂载体，能作为许多疏水性及不稳定性活性成分的载体，解决活性疏水分子的水溶性与载运难题。作为优选，所述甘露糖赤藓糖醇脂的主要分子量分布在550-690。作为优选，所述甘露糖赤藓糖醇脂的纯度在95％以上。所述甘露糖赤藓糖醇脂可以为Ustligo maydis属和Pseudazyma属菌种发酵得到的发酵液中分离纯化得到的。作为优选，所述卵磷脂的纯度在98％以上。作为优选，所述甘露糖赤藓糖醇脂和卵磷脂的质量比为1∶10-10∶1；更优选为5∶5、6∶4或7∶3，自组装效果更好。所述甘露糖赤藓糖醇脂载体的性质评价方法为：采用纳米粒度分析仪测定体系的粒度，测量角度为90°，动态散射光的波长为633nm。采用差示扫描量热法(DSC)测定溶液体系的热力学特性，温度扫描范围为-40℃～100℃，加热速率为5℃/min。本专利技术还提供了上述热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体的制备方法，包括：将甘露糖赤藓糖醇脂和卵磷脂分别溶于氯仿得到溶液，将两种溶液混合均匀，静置2-3周至氯仿挥发完全；然后加入去离子水，混匀，超声，静置，得到热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体。作为优选，所述两种溶液的浓度为0.5-1.5mg/L。作为优选，所述两种溶液的体积比为5∶5、6∶4或7∶3。本专利技术还提供了上述热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体在包埋疏水性物质中的应用。该载体对疏水性物质的包埋率高，包埋体系粒径合理。所述应用方法可以包括如下步骤：将疏水性物质加入热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体中，混匀，加蒸馏水至终浓度为0.5-1mM，稳定3-4周；其中，以质量百分比计，所述疏水性物质的加入量为0.1-0.5％。作为优选，以质量百分比计，所述疏水性物质的加入量为0.3％，包埋效果最好。作为优选，加蒸馏水至终浓度为1mM。所述热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体对疏水性物质的包埋评价方法包括：粒径测定和疏水物质包埋率的测定。其中，粒径测定方法是采用纳米粒度分析仪测定体系的粒度，测量角度为90°，动态散射光的波长为633nm。包埋率测定方法是将脂质体溶液体系在8000～12000rmp条件下离心15～20min，然后向沉淀中加入甲醇和氯仿以破坏载体结构。根据所包埋物质的性质特征，采用如高效液相色谱法、分光光度法等测定疏水物质的包埋率。计算公式：Y(％)＝N1/N0×100％，其中，N1为脂质体中包含的疏水物质的量，N0为脂质体悬液中疏水物质的总量。本专利技术提供的热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体具有热稳定性，对疏水性物质有较好的包埋作用，能够解决现有方法制备的载体不稳定和疏水物质的难溶问题。由于所用的材料安全无毒，尤其可作为食品中疏水活性物质的载体。而且载体的制备过程利用了甘露糖赤藓糖醇脂MEL-A具有的自组装性质与卵磷脂复配而成，无需借助其他助剂，其方法简单可行，成本低。附图说明图1为MEL-A/DLPC的粒径分布图，A为溶液体积比7∶3时的粒径分布图、B为5∶5时的粒径分布图。图2为MEL-A/DLPC体系的DSC分析图谱。图3为MEL-A/DLPC/白桦脂酸体系的粒径分布图。图4为MEL-A/DLPC/α-亚麻酸体系的粒径分布图。图5为MEL-A/DLPC/Ve体系的粒径分布图。具体实施方式以下实施例中：甘露糖赤藓糖醇脂载体(MEL-A)为Ustligo maydis属和Pseudazyma属菌种发酵得到的发酵液中分离纯化得到，主要分子量分布在550-690，纯度在95％以上；卵磷脂(DLPC)的纯度在98％以上。实施例1本实施例中所包埋的疏水物质为白桦脂酸。(1)甘露糖赤藓糖醇脂载体的制备分别将MEL-A和DLPC溶于氯仿配制成浓度均为1.0mg/L的溶液，将两种溶液按5∶5的体积比混合于试管中，静置2～3周，至氯仿挥发完全。分别于试管中加入2.0mL去离子水，涡旋混匀，超声5min，静置后制得甘露糖赤藓糖醇脂载体溶液。(2)甘露糖赤藓糖醇脂载体的性质评价采用纳米粒度分析仪测定体系的粒径376.4nm。采用差示扫描量热法测定溶液体系具有热力学稳定性。(3)甘露糖赤藓糖醇脂载体包埋白桦脂酸取MEL/DLPC载体溶液，加入质量百分比浓度0.3％的白桦脂酸，混合均匀，加入去离子水至终浓度为1mM，静置稳定3～4周。采用纳米粒度分析仪测定体系的粒径为78.5nm和950.5nm。白桦脂酸包埋率的测定：将溶液体系在8000rmp下离心15min，在沉淀中加入甲醇和氯仿以破坏载体结构。采用高效液相色谱法(HPLC)分别测定甘露糖赤藓糖醇脂载体悬液和包埋载体中的白桦脂酸含量。计算公式：Y(％)＝N1/N0×100％，其中，N1为包埋载体中包含的白桦脂酸的量，N0为悬液中白桦脂酸的总量。其中，HPLC法测定白桦脂酸的条件为：反相C18柱，流动相为乙腈∶水＝91∶9，流速1mL/min，柱温40℃，检测波长为210nm。通过观察和测定发现，白桦脂酸能够均匀分散在MEL-A/DLPC体系中，计算MEL-A/DLP本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体，其特征在于，由甘露糖赤藓糖醇脂和卵磷脂在水溶液中自组装制成。

【技术特征摘要】
1.一种热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体，其特征在于，由甘露糖赤藓糖醇脂和卵磷脂在水溶液中自组装制成。2.如权利要求1所述的热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体，其特征在于，所述甘露糖赤藓糖醇脂的主要分子量分布在550-690。3.如权利要求1所述的热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体，其特征在于，所述卵磷脂的纯度在98％以上。4.如权利要求1所述的热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体，其特征在于，所述甘露糖赤藓糖醇脂和卵磷脂的质量比为1∶10-10∶1。5.如权利要求1所述的热稳定性甘露糖赤藓糖醇脂载体，其特征在于，所述甘露糖赤藓糖醇脂和卵磷脂的质量比为5∶5、6∶4或7∶3。6.如权利要求1-5任一项所述的热稳定性甘...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈启和，范琳琳，牛永武，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33