本发明专利技术公开了一种与儿童肥胖相关的血清或血浆miRNA标志物及其应用。所述标志物为miR‑26b、miR‑222、miR‑146a、miR‑146b中一种或多种的组合。本发明专利技术还提供了一种儿童肥胖早期诊断试剂盒。本发明专利技术的标志物从微观角度诊断儿童肥胖及预警儿童发生肥胖的风险，并且操作简单，结果精确客观可靠，能够很好地将肥胖组和正常组区分开，可以准确、敏感的评价儿童肥胖、预警肥胖发生风险，仅需提供血样即可进行，无需其他组织样本，大大提高了临床应用的可能性与可行性，为临床医生制定早期预防和干预方案提供指导依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是基因工程和医学领域，具体涉及一种与儿童肥胖相关的血清或血浆miRNA标志物及其应用。
技术介绍
随着国家的繁荣富强，我国居民的生活水平日益提高，特别是改革开放以来，人们生活方式也发生了巨大的变化。经济水平的提高以及机械化进程加快，导致居民劳动强度和体力活动水平下降，生活水平的提高导致以高脂肪、低碳水化合物为主流饮食；使肥胖发生率在城乡各类人群中迅速提高，成为严重危害居民健康的流行病。肥胖流行的危害也日益被广大群众认知，肥胖不仅是可以导致心血管疾病和糖尿病，而且是癌症等慢性疾病的诱因。儿童期肥胖会使成年期肥胖、早逝和残疾出现的几率更大。除了未来风险升高之外，肥胖儿童还会经历呼吸困难、骨折风险升高、高血压、心血管疾病的早期征兆、胰岛素抵抗及心理影响。肥胖目前已被世界卫生组织列为威胁人类健康的十大疾病之一。然而，作为一个迅速变胖的国家，目前人缺乏有效的治疗方法；因此寻找有效的防治手段成为研究者关注的焦点。关于肥胖人群的组成分析发现，一个显著的特征吸引了研究者的注意，全球儿童肥胖呈不断增加的趋势。据世界卫生组织(WHO)统计，全球5岁以下的超重和肥胖儿童约有2200万，发展中国家有1700万，而且近年来呈现快速的增长趋势。这种快速的增长方式并非局限在发达国家，中东地区和北非，加勒比海和拉丁美洲的儿童肥胖发生率已逼近发达国家水平。我国肥胖人群同样呈现低龄化趋势，肥胖儿童成为重要的组成部分。据一项在关于儿童及小学生肥胖情况调查显示，北京、上海等城市的儿童肥胖率、超重率分别为13.1％和12.9％，小学男、女生肥胖率分别为15.8％和10.3％，超重率分别为14.2％和11％。调查显示，男生发生肥胖的危险性约为女生的1.5倍，男生肥胖率在12岁时达到峰值，为19.3％；女生肥胖率在13岁时达到峰值，为13.1％[9]。调查还显示，小学生肥胖率为13.6％，明显高于学龄前儿童10.7％和初中生10.2％的肥胖率。另据介绍，我国少年儿童肥胖率东北地区最高，为13.2％；华东地区次之，为12.2％；中南地区最低，为10.2％。以上统计可见，我国的儿童肥胖防治工作已迫在眉睫。目前，用于诊断肥胖的方法主要分为两大类：简易测量法和仪器测量法。简易测量法中常用的肥胖指标分别是：体质指数(Body Mass Index，BMI)、腰臀比、腰围、腰围身高比、皮褶厚度；仪器测量法中的主要测量方法为：断层摄像法、超声波法、双能X线吸收法、生物电阻抗分析法等。简易测量法简便且易操作，因此也多采用此法。在流行病学研究和医疗机构大多采用体质指数来判定超重与肥胖及分析体重与疾病的关系。2006年4月，世界卫生组织发布了0～5岁儿童生长发育参照标准，包括年龄别体重、身长别体重、年龄别体重、年龄别身长和年龄别BMI曲线。由于受不同种族和不同地域的影响，同一BMI水平对人体的影响并不完全一致。长期以来不同国家和研究者使用的儿童青少年超重肥胖的判定指标和标准不统一，从而导致出现不同的患病率。在根据肥胖流行趋势采取公共卫生措施时，要充分认识到由于诊断方法学不同导致检出率的迥异。因此发现一种明确而有效的生物标志，对诊断儿童肥胖的发生具有重要意义，有助于肥胖及心血管疾病、肌肉骨骼疾患、胰岛素抵抗等非传染疾病的预防、早期干预和控制。microRNA(miRNAs)是一类重要的基因表达调控因子，长度大小在18-22个碱基的非编码单链小分子RNA，它由一段具有发夹结构的单链RNA前体经Drosha酶和Dicer酶剪切产生。通过与靶mRNA3’端非编码区互补配对，使靶mRNA分子的翻译受到抑制或引起特异性切割，从而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制，且成熟的miRNA在不同物种间进化上高度保守。miRNA不仅存在于各种组织和细胞中，还可以稳定存在于循环血液中。作为21世纪生命科学研究重大发现之一，近年来已经鉴定出了大量的miRNA，研究表明miRNA在许多生物学过程中发挥着至关重要的作用，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等，并与多种人类疾病存在重要的关联。肥胖作为一种严重的代谢性疾病，主要由于白色脂肪组织在体内的过度积聚造成的；而脂肪组织的积累在细胞水平上主要取决于脂肪细胞数目的多少和脂肪细胞体积的大小。间充质干细胞经定向分化为脂肪前体细胞，脂肪前体细胞经诱导分化为成熟的脂肪细胞；脂肪细胞的数量主要取决于间充质干细胞的分化，脂肪细胞的体积主要取决于前体脂肪细胞分化。因此，脂肪细胞的成脂分化(Adpogennesis)一直都是肥胖研究的热点。已有的研究证实，无论人还是动物脂肪细胞分化前后，
miRNA表达水平存在显著差异，miRNA可以通过调控靶基因表达促进或抑制脂肪细胞的分化，参与肥胖的发生。哪些miRNA在脂肪细胞分化前后存在差异，成为大家首先关注的方向。新的筛选技术如测序、芯片技术等不断出现，为研究者提供了丰富的手段。借助基因芯片技术研究，2004年，Esau等发现人前体脂肪细胞和成熟脂肪细胞的miRNA表达254种miRNA，其中有22种表达的miRNA差异显著。随后Kajimoto等检测了3T3-L1前体脂肪细胞、诱导分化第1天细胞和诱导分化成熟第9天细胞中miRNA的表达，筛选出80种差异表达的miRNA。结合文献报道对其中22种miRNA进行了验证，发现miR-422b、miR-183、miR-224在成熟脂肪细胞中表达显著上调，而miR-182和miR-181a表达显著下调。研究者还矛盾的发现，在成脂分化过程中表达水平升高的miRNA(如miR-107、miR-103、miR-30c、miR-30a-5p、miR-422b、miR-148a和miR-143)，在肥胖患者脂肪组织中表达水平降低，而在成脂分化过程中表达水平降低的miRNA(如miR-222和miR-221)则表达水平上调。分析原因认为可能与脂肪组织局部的慢性炎症环境有关。这些差异表达的miRNA是否具有真正的生物学功能，成为大家进一步研究的目标。研究发现，miRNA-143随人脂肪前体细胞(网膜脂肪来源)分化成熟而表达逐渐增加，成为首个报道的与脂肪细胞分化相关的miRNA。RNA干扰miRNA-143表达抑制后可上调PPARγ、LPL、GLUT4和AP2等脂肪细胞分化关键基因的表达，双荧光素酶报告系统结果显示ERK5是miR-143的作用靶基因。miR-27家族成员miR-27a、miR-27b在ob/ob肥胖模型小鼠脂肪组织中显著高表达，在成脂分化过程中表达水平逐渐降低，提示其可能与肥胖发生密切相关。miR-27a过表达可以下调其靶基因PPARγ的表达抑制脂肪细胞分化，由于PPARγ作用发生在早期，因而miR-27a也主要影响早期分化。miRNA调控脂代谢的途径是复杂多样的，首先miRNA可以从脂质的合成、运输和氧化3个方面调控，其次miRNA调控靶基因的形式可以为“一对多”或“多对一”，也就是说一种miRNA可以调控多种靶基因表达，同时多种miRNA也可以调控一种mRNA。生物标记物是随着分子生物学技术和免疫学技术的发展而提出的一类细胞生物特异性标记。例如：来自凯斯西储大学的研本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种儿童肥胖相关的血清或血浆miRNA标志物，其特征在于，所述标志物为miR‑26b、miR‑222、miR‑146a、miR‑146b中一种或多种的组合。
【技术特征摘要】
1.一种儿童肥胖相关的血清或血浆miRNA标志物，其特征在于，所述标志物为miR-26b、miR-222、miR-146a、miR-146b中一种或多种的组合。2.根据权利要求1所述的儿童肥胖相关的血清或血浆miRNA标志物，其特征在于，所述标志物为miR-26b、miR-222、miR-146a和miR-146b。3.权利要求1或2所述的儿童肥胖相关的血清或血浆miRNA标志物的引物或探针。4.根据权利要求3所述的血清或血浆miRNA标志物的探针，其特征在于，所述miR-26b的探针为Assay ID：000407；miR-222的探针为Assay ID002276；miR-146a的探针为Assay ID：000468；miR-146b的探针为Assay ID：001097。5.权利要求1或...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭锡熔，尤梁惠，季晨博，崔县伟，祝丽君，李沄，
申请(专利权)人：南京市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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