本发明专利技术涉及茶叶中抗氧化能力分析，旨在提供一种茶叶或茶叶制品中抗氧化能力的分析方法。该种茶叶或茶叶制品中抗氧化能力的分析方法包括步骤：配制次氯酸钠标准溶液、配制载流溶液、配制茶多酚标准品溶液、配制鲁米诺发光试剂溶液、配制待测试样溶液，然后利用顺序注射化学发光分析系统装置进行分析测定，可得试样折算成标准还原性物质抗氧化性能力的定量指标，实现对茶叶或茶叶制品总抗氧化能力的分析测定。本发明专利技术是基于茶叶试样提取物与氧化剂次氯酸钠的反应，来测定样品的总抗氧化能力，且将顺序注射分析与化学发光检测技术联用，兼具两者的优势。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于茶叶中抗氧化能力分析领域，特别涉及一种茶叶或茶叶制品中抗氧化能力的分析方法。
技术介绍
抗氧化作用被认为是茶叶保健作用中最重要的部分。目前国内外有关茶的抗氧化作用及机理研究报道较多，但大量用于茶叶中抗氧化能力的分析研究报道，是基于茶叶及其制品中有效成分，如茶多酚、黄酮类、没食子酸、儿茶素及茶黄素等成分的分子结构所具有的物理化学性质，分别进行紫外-可见分光光度法检测。如茶多酚采用Folin-Ciocalteu(福林酚)法(Mokbel,M.S.,and Hashinaga,F.Evaluation of the antioxidant activity of extracts from buntan(Citrus grandis Osbeck)fruit tissues[J].Food Chem.,2006,94:529-534)测定，其原理是试样在70℃水浴上用70％甲醇提取，用Folin-Ciocalteu试剂氧化茶多酚中—OH基团并显蓝色，在最大吸收波长λ为765nm下测定，没食子酸作参比校正，标定茶多酚含量。黄酮类采用三氯化铝比色法(钟萝，主编.茶叶品质理化分析[M].上海：上海科技出版社，1989.)测定，其原理为试样用AlCl3络合显色后，在最大吸收波长λ为510nm下测定，以芦丁为标准品，标定黄酮含量。没食子酸、儿茶素及茶黄素采用高效液相色谱法(Liang,Y.R.,Lu,J.L.,and Zhang,L.Y.Comparative study cream in infusions of black tea and green tea[Camellia sinemsis(L.)O.Kuntze][J].int.J.Food Sci.Technol.,2002,34:624-.)测定，其原理为试样用低于60℃温水溶解，在C18柱色谱柱上，采用梯度洗脱分离，并在波长278nm检测，分别用茶黄素、儿茶素等标准物外标法定量。上述对茶叶中不同抗氧化有效成分的分析，需分别采用相应显色剂或相应色谱分离技术，不仅操作繁琐，而且对茶叶的总抗氧化性能的测定也不直接；尤其是各种分析方法对某些有效成分可能重复测定，而对另一些有效成分则测定不全面，因此对总抗氧化性能的测定不直接且可能存在误差。流动注射分析(Flow Injection Analysis，FIA)，是由丹麦技术大学的J.Ruzicka和E.H.Hansen于1975年提出的迅速发展起来的溶液自动在线处理及测定的现代分析技术，即在非热力学平衡条件下，在液流中重现性地处理试样或试剂区带的定量流动分析技术。近年来，该分析方法与其它分析技术相结合，极大地推动了仪器分析的发展，成为带有微量、高速和自动化等优势的新型分析方法。流动注射分析发展迅速，被广泛应用于很多分析领域。顺序注射分析(Sequential Injection Analysis，SIA)是在此基础上，由Ruzicka和Marshall于1990年进一步发展的流动分析法。除具有FIA的优势外，SIA还有一些独特的优点。系统硬件简单可靠，操作完全由微机控制，样品和试剂的混合程度、反应时间可通过软件控制，分析过程易于自动化、智能化；可用同一装置完成不同组分的检测而无需改变流路设置，样品和试剂的消耗更少，更适于受样品来源有限、试剂昂贵等因素制约的试样的分析。随着顺序注射分析中试样试剂用量的减少，对检测方法的灵敏度的要求也相应提高。化学发光法具有灵敏度高、线性范围宽、检测装置简单、可持续在线检测等优点，鲁米诺具有良好的水溶性和突出的发光性能，是应用最广泛的化学发光试剂。次氯酸及次氯酸盐具有强氧化性，可快速氧化溶液中的还原性物质，氧化鲁米诺后会发生化学发光反应，且该发光反应速度快，量子效率高。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于克服现有技术中的不足，提供一种简单、方便、灵敏度高，基于流动分析的茶叶中还原性物质总抗氧化能力检测分析方法。为解决上述技术问题，本专利技术的解决方案是：提供一种茶叶或茶叶制品中抗氧化能力的分析方法，利用顺序注射化学发光分析系统装置进行分析测定，所述茶叶或茶叶制品中抗氧化能力的分析方法具体包括下述步骤：(1)配制次氯酸钠标准溶液：量取次氯酸钠溶液(有效氯含量5％)，加重蒸馏水稀释并滴加0.5mol/L的硫酸，调节至pH为6.2后，定容；再采用紫外分光光度法标定浓度(检测λ＝235nm的吸光度，以ε＝100mol/L·cm为消光系数进行标定)，得到次氯酸钠储备液；进一步稀释采用重蒸馏水，临用时稀释至1.0×10-4mol/L～1.0×10-5mol/L的次氯酸钠标准溶液；(2)配制载流溶液：称取碳酸钠，溶于水制成0.10mol/L的Na2CO3溶液；再向该Na2CO3缓冲溶液中滴加0.10mol/L的HCl溶液，调节pH至10.50，得到Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液；(3)配制茶多酚标准品溶液：称取茶多酚标准品，溶于100mL水中定容，得到浓度范围为1.0×10-7～1.0×10-6mol/L的茶多酚标准品溶液；再用pH为3.0的甲酸-甲酸钠缓冲液(取1.36mL的浓硫酸和4.23mL甲酸加重蒸馏水至250mL，用0.5mol/L稀硫酸调至pH为3.0，即制得甲酸-甲酸钠缓冲液)稀释茶多酚标准品溶液，分别稀释成所需的不同浓度的茶多酚标准品溶液；(4)配制鲁米诺发光试剂溶液：称取鲁米诺溶解于0.1mol/L的NaOH溶液中，再用步骤(2)配制的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液(根据试样需要，pH控制在8.0～12.0范围)定容后，制得浓度范围在1.0×10-1mol/L～1.0×10-3mol/L的鲁米诺发光试剂溶液；(5)配制待测试样溶液：称取0.0001g待测茶叶或茶叶制品捣碎，加重蒸馏水混合、过滤后，制得待测试样溶液，并将待测试样溶液定容至100mL；(6)先用重蒸馏水清洗顺序注射化学发光分析系统装置，包括顺序注射泵、储液管、六位选择阀，并使整个顺序注射化学发光分析系统装置的管路内部充满重蒸馏水且无空气；(7)开启恒流注射泵，用步骤(4)配制中的鲁米诺发光试剂溶液以20mL/h～40mL/h的固定流速推入反应盘管；(8)待光电倍增管的记录基线平稳后，六位选择阀依次先转至P3号阀位，顺序注射泵将步骤(2)配制的载流溶液抽入储液管；六位选择阀再转至P4号阀位，顺序注射泵将步骤(1)配制的次氯酸标准溶液抽入储液管；六位选择阀再转至P5号阀位，顺序注射泵将步骤(5)配制的待测试样溶液抽入储液管；六位选择阀最后转至P1号阀位，顺序注射泵将上述在储液管内逐渐混合的溶液注入反应盘管；(9)步骤(8)注入反应盘管的溶液，与步骤(7)由恒流注射泵推入鲁米诺发光试剂溶液混合发光，发光信号用光电倍增管记录，经数据处理后输出；(10)重复步骤(8)至步骤(9)，分别测定步骤(3)配制的不同浓度的茶多酚标准品溶液的发光信号；根据所得检测信号的相应峰高，绘制工作曲线；(11)将六位选择阀P4号阀位对应的次氯酸标准溶液，换成待测试样溶液(步骤(5)配制)，重复上述步骤(8)至步骤(9)，检测待测试样溶液(步骤(5)配制)，得到检测信号的相应峰高，对照工作曲线，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种茶叶或茶叶制品中抗氧化能力的分析方法，利用顺序注射化学发光分析系统装置进行分析测定，其特征在于，所述茶叶或茶叶制品中抗氧化能力的分析方法具体包括下述步骤：(1)配制次氯酸钠标准溶液：量取次氯酸钠溶液，加重蒸馏水稀释并滴加0.5mol/L的硫酸，调节至pH为6.2后，定容；再采用紫外分光光度法标定浓度，得到次氯酸钠储备液；进一步稀释采用重蒸馏水，临用时稀释至1.0×10‑4mol/L～1.0×10‑5mol/L的次氯酸钠标准溶液；(2)配制载流溶液：称取碳酸钠，溶于水制成0.10mol/L的Na2CO3溶液；再向该Na2CO3缓冲溶液中滴加0.10mol/L的HCl溶液，调节pH至10.50，得到Na2CO3‑NaHCO3缓冲溶液；(3)配制茶多酚标准品溶液：称取茶多酚标准品，溶于100mL水中定容，得到浓度范围为1.0×10‑7～1.0×10‑6mol/L的茶多酚标准品溶液；再用pH为3.0的甲酸‑甲酸钠缓冲液稀释茶多酚标准品溶液，分别稀释成所需的不同浓度的茶多酚标准品溶液；(4)配制鲁米诺发光试剂溶液：称取鲁米诺溶解于0.1mol/L的NaOH溶液中，再用步骤(2)配制的Na2CO3‑NaHCO3缓冲溶液定容后，制得浓度范围在1.0×10‑1mol/L～1.0×10‑3mol/L的鲁米诺发光试剂溶液；(5)配制待测试样溶液：称取0.0001g待测茶叶或茶叶制品捣碎，加重蒸馏水混合、过滤后，制得待测试样溶液，并将待测试样溶液定容至100mL；(6)先用重蒸馏水清洗顺序注射化学发光分析系统装置，包括顺序注射泵、储液管、六位选择阀，并使整个顺序注射化学发光分析系统装置的管路内部充满重蒸馏水且无空气；(7)开启恒流注射泵，用步骤(4)配制中的鲁米诺发光试剂溶液以20mL/h～40mL/h的固定流速推入反应盘管；(8)待光电倍增管的记录基线平稳后，六位选择阀依次先转至P3号阀位，顺序注射泵将步骤(2)配制的载流溶液抽入储液管；六位选择阀再转至P4号阀位，顺序注射泵将步骤(1)配制的次氯酸标准溶液抽入储液管；六位选择阀再转至P5号阀位，顺序注射泵将步骤(5)配制的待测试样溶液抽入储液管；六位选择阀最后转至P1号阀位，顺序注射泵将上述在储液管内逐渐混合的溶液注入反应盘管；(9)步骤(8)注入反应盘管的溶液，与步骤(7)由恒流注射泵推入鲁米诺发光试剂溶液混合发光，发光信号用光电倍增管记录，经数据处理后输出；(10)重复步骤(8)至步骤(9)，分别测定步骤(3)配制的不同浓度的茶多酚标准品溶液的发光信号；根据所得检测信号的相应峰高，绘制工作曲线；(11)将六位选择阀P4号阀位对应的次氯酸标准溶液，换成待测试样溶液，重复上述步骤(8)至步骤(9)，检测待测试样溶液，得到检测信号的相应峰高，对照工作曲线，可得试样折算成标准还原性物质抗氧化性能力的定量指标，实现对茶叶或茶叶制品总抗氧化能力的分析测定。...
【技术特征摘要】
1.一种茶叶或茶叶制品中抗氧化能力的分析方法，利用顺序注射化学发光分析系统装置进行分析测定，其特征在于，所述茶叶或茶叶制品中抗氧化能力的分析方法具体包括下述步骤：(1)配制次氯酸钠标准溶液：量取次氯酸钠溶液，加重蒸馏水稀释并滴加0.5mol/L的硫酸，调节至pH为6.2后，定容；再采用紫外分光光度法标定浓度，得到次氯酸钠储备液；进一步稀释采用重蒸馏水，临用时稀释至1.0×10-4mol/L～1.0×10-5mol/L的次氯酸钠标准溶液；(2)配制载流溶液：称取碳酸钠，溶于水制成0.10mol/L的Na2CO3溶液；再向该Na2CO3缓冲溶液中滴加0.10mol/L的HCl溶液，调节pH至10.50，得到Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液；(3)配制茶多酚标准品溶液：称取茶多酚标准品，溶于100mL水中定容，得到浓度范围为1.0×10-7～1.0×10-6mol/L的茶多酚标准品溶液；再用pH为3.0的甲酸-甲酸钠缓冲液稀释茶多酚标准品溶液，分别稀释成所需的不同浓度的茶多酚标准品溶液；(4)配制鲁米诺发光试剂溶液：称取鲁米诺溶解于0.1mol/L的NaOH溶液中，再用步骤(2)配制的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液定容后，制得浓度范围在1.0×10-1mol/L～1.0×10-3mol/L的鲁米诺发光试剂溶液；(5)配制待测试样溶液：称取0.0001g待测茶叶或茶叶制品捣碎，加重蒸馏水混合、过滤后，制得待测试样溶液，并将待测试样溶液定容至100mL；(6)先用重蒸馏水清洗顺序注射化学发光分析系统装置，包括顺序注射泵、储液管、六位选择阀，并使整个顺序注射化学发光分析系统装置的管路内部充满重蒸馏水且无空气；(7)开启恒流注射泵，用步骤(4)配制中的鲁米诺发光试剂溶液以20mL/h～40mL/h的固定流速推入反应盘管；(8)待光电倍增管的记录基线平稳后，六位选择阀依次先转至P3号阀位，顺序注射泵将步骤(2)配制的载流溶液抽入储液管；六位选择阀再转至P4号阀位，顺序注射泵将步骤(1)配制的次氯酸标准溶液抽入储液管；六位选择阀再转至P5号阀位，顺序注射泵将步骤(5)配制的待测试样溶液抽入储液管；六位选择阀最后转至P1号阀位，顺序注射泵将上述在储液管内逐渐混合的溶液注入反应盘管；(9)步骤(8)注入反应盘管的溶液，与步骤(7)由恒流注射泵推入鲁米诺发光试剂溶液混合发光，发光信号用光电倍增管记录，经数据处理后输出；(10)重复步骤(8)至步骤(9)，分别测定步骤(3)配制的不同浓度的茶多酚标准品溶液的发光信号；根据所得检测信号的相应峰高，绘制工作曲线；(11)将六位选择阀P4号阀位对应的次氯酸标准溶液，换成待测试样溶液，重复上述步骤(8)至步骤(9)，检测待测试样溶液，得到检测信号的相应峰高，对照工作曲线，可得试样折算成标准还原性物质抗氧化性能力的定...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈宏，麻威威，
申请(专利权)人：杭州大茗堂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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