本发明专利技术涉及携载水溶性小肽的麦胚凝集素修饰的聚合物纳米粒及其制备方法，纳米粒的平均粒径为140 nm，包封率达到50%，载药量达到11%。制备方法是：（1）、将NR2B9c溶解于水中，获得内水相；（2）将聚合材料溶于二氯甲烷中，获得油相；（3）、将内水相加入到油相中，超声得到W/O初乳；（4）、将W/O初乳加入含有乳化剂的外水相中，超声得到W/O/W复乳；（5）将W/O/W复乳分散到扩散相溶液中，加入巯基化WGA，低速搅拌孵育，去除有机溶剂，冷冻离心，即得包载NR2B9c的WGA修饰的聚合物纳米粒，鼻腔给药具有很好的脑部靶向性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物制剂领域，具体涉及载水溶性小肽的用于鼻腔给药的麦胚凝集素 (wheat germ agglutinin,WGA)修饰的聚合物纳米粒及其制备方法和应用，所述的水溶性 小肽是NR2B9c，相对分子量为977Da。
技术介绍
脑卒中是危害人类健康的常见病和多发病，具有发病率高、致残率高、死亡率高和 复发率高的特点。脑卒中主要分为缺血性和出血性脑卒中两大类，其中缺血性脑卒中为最 常见的类型，占全部脑卒中的80%左右。然而，临床上除早期使用溶栓药对缺血性脑卒中有 效外，迄今仍缺乏疗效明确的治疗药物。因此，进行缺血性脑卒中治疗药物的研究具有十分 重要的意义。 N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate ,NMDA)受体是中枢神经系统非常重 要的一类兴奋性氨基酸受体，其所介导的神经兴奋性毒性在缺血性脑损伤中起到非常关键 的作用。脑卒中后，NMDA受体过度激活，引发大量的Ca 2+内流，从而触发了兴奋性毒性，通过 与NMDA受体偶联的突触后密集区蛋白-95(postsynaptic density-95,PSD-95)将信号传递 给神经元型一氧化氮合成酶（neuronal nitric oxide synthase，nN0S)，形成匪DA受体-PSD-95-nN0S三元复合物，进而引起nNOS的超常活化，催化产生过量的一氧化氮（nitric oxide，NO )，最终导致神经元死亡。因此，在缺血性脑卒中的治疗中，NMDA受体拮抗剂、突触 后钙离子阻断剂和nNOS拮抗剂都曾被寄予希望，但由于三者分别阻断了 NMDA受体和nNOS的 正常生理功能而未能在临床上取得成功，在抑制兴奋性通路中的上下游分子均无效的情况 下，如何能既阻断NMDA受体所介导的兴奋性毒性，又不干扰匪DA受体的正常生理功能呢？ NMDA受体与PSD-95的解偶联成为缺血性脑卒中治疗药物研究的新靶点。 2002年Aarts M等人在Science上发表的文章中提出了一个针对匪DA受体亚型 NR2B羧基端的9个氨基酸残基的多肽NR2B9c(KLSSIESDV)，NR2B9c可与PSD-95特异性地结 合，从而解除NMDA受体与PSD-95的偶联，阻断引起神经兴奋性毒性的下游信号传导，但不影 响NMDA受体的正常生理功能。啮齿类动物和类似于人类的灵长类动物实验结果均表明在脑 卒中发生后一个合理的时间窗内给予NR2B9C，可产生长期的神经保护作用，而且副作用小， 因此NR2B9C多肽极有可能成为一种经临床验证有效的脑卒中治疗药物。 由于在血液和脑组织之间存在一种被称为血脑屏障的机体天然生理防御结构，这 使得大多数外源性物质不能有效进入脑部发挥生物效应，基本上超过98%的小分子药物不 能通过血脑屏障，而100%的大分子药物，包括多肽、重组蛋白、基因治疗相关药物等都无法 有效穿过血脑屏障。NR2B9c作为一种水溶性多肽自然也无例外。目前有关NR2B9c的研究中， 采用的均为静脉注射融合蛋白Tat-NR2B9c，即将NR2B9c与来自于HIV的转导肽Tat进行偶 联。Tat能将与之相连的肽段或蛋白质跨膜转运进入各种组织和细胞，由Tat携带NR2B9C虽 然可以有效的透过血脑屏障，但仍存在如下缺点：① Tat携带NR2B9C可进入人体各种组织和 细胞，体内分布无选择性。②融合蛋白应用于人类疾病的治疗还有许多需要考虑的问题，尤 其是安全性方面尚不明确。源自HIV的细胞穿膜肽Tat虽然已不具感染性，但此蛋白转导域 为病毒相关蛋白的核定位序列。Tat用于携载药物对人进行治疗时，其对人类基因表达的潜 在影响以及可能带来的毒副作用目前还知之甚少，有待进一步研究。例如有文献报道称细 胞穿膜肽Tat(48-60)单独使用即可明显降低促分裂素原活化蛋白激酶mRNA表达水平。③卒 中治疗的时间窗非常关键，越早接受治疗效果越好，而Tat-NR2B9c设计为静脉注射给药，必 须由专业医护人员操作，使用不便。因此，在NR2B9c治疗缺血性脑卒中的研究中，如何安全 高效递送NR2B9c入脑是亟需解决的一个关键问题。 鼻腔给药是一种实用的无创性脑部递药方式，其安全、有效、便捷，经鼻给药后，药 物和载体可绕过血脑屏障通过嗅区粘膜上的嗅神经途径和三叉神经途径直达中枢神经系 统，入脑迅速，全身吸收相对减少，副作用较小。鼻脑通路的存在虽然为NR2B9C等多肽蛋白 类药物避开血脑屏障经鼻腔直接入脑提供了可能，但像NR2B9C这类水溶性多肽，由于受到 鼻腔内的代谢酶降解和鼻纤毛清除等因素限制，致使进入脑部的药量很低，无法达到临床 上的有效剂量。具有良好生物降解性和生物安全性的聚合物聚乙二醇（polyethylene glycol ,PEG)-聚乳酸羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co_glycolic acid)，PLGA)所制备的 聚合物纳米粒稳定性好，能有效防止药物在体内的降解，提高药物稳定性。但在鼻腔停留时 间短、且缺乏对主要吸收部位嗅区粘膜的选择性，进入脑部能力依然有限。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供携载水溶性小肽的麦胚凝集素修饰的聚 合物纳米粒及其制备方法，为水溶性小肽NR2B9C治疗缺血性脑卒中提供一种安全有效的脑 部递药方法。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用了以下技术方案： 携载水溶性小肽的麦胚凝集素修饰的聚合物纳米粒，所述的水溶性小肽是 NR2B9c，所述的聚合物是马来酰亚胺聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物(Mal-PEG-PLGA)和 单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物(mPEG-PLGA)的混合物，所述的聚合物纳米粒采 用复乳法制备；该纳米粒的平均粒径为140nm，分布均匀，呈淡蓝色乳光，Zeta电位约为-23mV，包封率在50 %左右，载药量在11 %左右。携载水溶性小肽的麦胚凝集素修饰的聚合物纳米粒的制备方法，步骤如下： (1)、内水相的制备：将NR2B9c溶解于水中，获得浓度为0-35mg/ml且大于0的 NR2B9c水溶液，备用；内水相体积为50-200yL; (2)、油相的制备：将马来酰亚胺聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物（Mal-PEG- PLGA)(便于在纳米粒上接枝WGA和控制接枝比例，马来酰亚胺聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共 聚物与相应的单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物中PLGA端PLA: PGA的比例相等， PLGA端的分子量也相等，聚合物合成过程中单甲氧基聚乙二醇分子量为2000,马来酰亚胺 聚乙二醇分子量为3500)和单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物(mPEG-PLGA)(质量 比1:9)溶于油相二氯甲烷中，所得聚合物浓度为15-20mg/ml，备用;Mal-PEG-PLGA和mPEG-PLGA的PLGA端中 PLA: PGA的比例以及PLGA端的分子量(Mff)为：50: 50，28000、50:50，38000、 75:25,38000;较佳型号是PLA:PGA 50:50MW 38000,较佳浓度是20mg/ml; (3)、W/0初乳的制备：按照1: 5的体积比将内水相加入到油相中，超声得到W/0初 乳； (4)、W/0/W复乳的制备：按照3: 5的体积本文档来自技高网...
【技术保护点】
携载水溶性小肽的麦胚凝集素修饰的聚合物纳米粒，其特征在于，所述的水溶性小肽是NR2B9c，所述的聚合物是马来酰亚胺聚乙二醇‑聚乳酸羟基乙酸共聚物和单甲氧基聚乙二醇‑聚乳酸羟基乙酸共聚物的混合物，所述的聚合物纳米粒采用复乳法制备；该聚合物纳米粒的平均粒径为140nm，包封率达到50％，载药量达到11％。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李瑞，陈立，黄元，张明晚，周美玲，苏平，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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