本发明专利技术公开了一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量DC‑CIK、NK细胞的试剂盒及其使用方法，包括DC套盒：10ug干粉DC‑A、5ug干粉DC‑B；CIK套盒：6支干粉CIK‑A(30ug/支)、10ug干粉CIK‑B、20ug干粉CIK‑C；NK套盒：5支干粉NK‑A(50ug/支)、10ug干粉NK‑B、5ug干粉NK‑C。本发明专利技术利用DC‑CIK、NK细胞诱导试剂盒能够配合淋巴细胞培养基在最短的时间内诱导扩增出5*109以上的淋巴细胞，其中CIK细胞(CD3+CD56+)比例达到25％以上，NK细胞(CD3‑CD56+)比例达到50％以上。为体外大规模扩增DC‑CIK、NK细胞提供便利的方法，为相关研究及临床实验提供便利。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量DC?CIK、NK细胞的试剂盒及其使用方法，包括DC套盒：10ug干粉DC?A、5ug干粉DC?B；CIK套盒：6支干粉CIK?A(30ug/支)、10ug干粉CIK?B、20ug干粉CIK?C；NK套盒：5支干粉NK?A(50ug/支)、10ug干粉NK?B、5ug干粉NK?C。本专利技术利用DC?CIK、NK细胞诱导试剂盒能够配合淋巴细胞培养基在最短的时间内诱导扩增出5*109以上的淋巴细胞，其中CIK细胞(CD3+CD56+)比例达到25％以上，NK细胞(CD3?CD56+)比例达到50％以上。为体外大规模扩增DC?CIK、NK细胞提供便利的方法，为相关研究及临床实验提供便利。【专利说明】配合淋巴细胞培养基快速诱导大量DC-CIK、NK细胞的试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及一种诱导DC-CIK、NK细胞的试剂盒及其使用方法，尤其是一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量DC-CIK、NK细胞的试剂盒及其使用方法。
技术介绍
当前免疫细胞因其高效的肿瘤细胞杀伤活性，其无任何副作用的优势已经逐渐被医学界认可。DC-CIK、NK(Cytokine induced killer)细胞作为免疫细胞中最具代表性的两种细胞，其诱导和扩增的方法各不相同，且诱导出的细胞数量和质量也参差不齐。没有一套简单、高效、稳定的诱导试剂盒。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一套简单、高效、稳定的配合淋巴细胞培养基快速诱导大量DC-CIK、NK细胞的试剂盒及其使用方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是:一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量DC-CIK、NK细胞的试剂盒，包括DC套盒:1ug干粉DC-A、5ug干粉DC-B; CIK套盒:6支干粉CIK-A(30ug/支)、1ug干粉CIK-B、20ug干粉CIK-C; NK套盒:5支干粉NK-A(50ug/支)、1ug干粉NK-B、5ug干粉NK-C，按质量百分比，各种组分的成分如下:DC 套盒:干粉DC-A: 30 %-50 %白细胞介素_4(4000IU/ug)、50 % -70 %粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(25000IU/ug);干粉DC-B:100 % 肿瘤坏死因子-α (16000IU/ug)；CIK 套盒:干粉CIK-A:60%-75% 白细胞介素_2(15000IU/ug)、25%-40%氨基酸；干粉CIK-B:60%-80%CD3单抗、20%-40%干扰素-伽马(28000IU/ug)；干粉 CIK-C: 20 % -30 % CD3 单抗、70 % -80 % CD28 单抗；NK 套盒:干粉爾4:30%-40%白细胞介素-2(1500011]/叫)、20%-30%白细胞介素-12(7000IU/ug)、30%-50% 白细胞介素-15(7000IU/ug)；干粉NK-B:70%-80%CD16单抗、20%-30%干扰素-伽马(40000IU/ug)；干粉NK-C:100%CD16 单抗。优选，按质量百分比，DC套盒:干粉DC-A:40%白细胞介素_4(IL-4)、60%粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF);干粉DC-B:100%肿瘤坏死因子-a(TNF_a);CIK套盒:干粉CIK-A: 70 %白细胞介素-2、30 %氨基酸;干粉CIK-B: 70 % CD3单抗、30 %干扰素-伽马(IFN-γ );干粉CIK-C: 25 %CD3单抗、75 %CD28单抗;NK套盒:干粉NK-A: 40 %白细胞介素-2、30 %白细胞介素-12(IL-12)、30%白细胞介素-15(IL-15);干粉NK-B:70%CD16单抗、30%干扰素-伽马(IFN- γ );干粉 NK-C:100% CD 16 单抗。上述的配合淋巴细胞培养基快速诱导出大量DC_CIK、NK细胞的试剂盒的使用方法，包括以下步骤:(I)配置细胞诱导培养基备用DC细胞诱导培养基:150ml淋巴细胞培养基中添加干粉DC-A;CIK细胞诱导培养基:每500ml淋巴细胞培养基中添加I支干粉CIK-A;NK细胞诱导培养基:每500ml淋巴细胞培养基中添加I支干粉NK-A;(2)使用6毫升淋巴细胞培养基充分溶解试剂盒中的干粉CIK-B，并利用0.22微米孔径的滤膜过滤溶液，在I个T-17 5培养瓶中分别加入5毫升过滤后的溶液，在CO2培养箱中孵育2小时;再使用6毫升淋巴细胞培养基充分溶解试剂盒中的干粉NK-B，并利用0.22微米孔径的滤膜过滤溶液，在I个T-17 5培养瓶中分别加入5毫升过滤后的溶液，在CO2培养箱中孵育2小时；(3)分离获得的PBMC取(5-10)*107个细胞接种至一个T-175细胞培养瓶中，加入50ml淋巴细胞培养基孵育l-2h后将未贴壁的细胞吸出，贴壁的细胞中加入50ml DC细胞诱导培养基，诱导DC细胞；(4)将步骤(3)中的未贴壁的细胞加入到未使用的I3BMC中，按照细胞数量比1:1的比例将所有细胞平均加入到分别提前2小时CIK-B预包被T-175细胞培养瓶，以及NK-B预包被的T-175细胞培养瓶中；在预包被CIK-B的培养瓶中加入70ml CIK细胞诱导培养基诱导CIK细胞;在预包被NK-B的培养瓶中加入70ml NK细胞诱导培养基以及终浓度诱导NK细胞；将细胞培养液混合均匀后放置在二氧化碳培养箱中培养；(5)培养的第3天，用5ml淋巴细胞培养基溶解I支CIK-A，并取出Iml补加到CIK细胞诱导体系中继续培养，其余4ml废弃；(6)培养的第4天，在DC细胞诱导体系中加入50ml DC细胞诱导培养基，混合均匀后培养;同时NK细胞诱导体系中加入100ml NK细胞诱导培养基，混合均匀后继续培养；(7)培养第5天，在CIK细胞诱导体系中加入10mlCIK细胞诱导培养基，混合均匀后继续培养；(8)培养第6天，在DC细胞诱导体系中加入用500ul淋巴细胞培养基溶解的干粉DC-B，混合均匀后继续培养；(9)第7天，将CIK细胞诱导体系中的全部细胞悬液转移到一个1.8升容量的细胞培养袋中并在培养体系中，补加200ml CIK细胞诱导培养基;与此同时将诱导DC细胞诱导体系中的细胞全部收获后加入到上述细胞培养袋中与CIK细胞共培养，并且补加用500ul淋巴细胞培养基溶解的干粉CIK-C;同时，将NK细胞诱导体系中的细胞悬液加入到另一个1.8升容量细胞培养袋中，在培养体系中加入400ml的NK细胞诱导培养，并补加用500ul淋巴细胞培养基溶解的干粉NK-C，混合均匀后继续培养；(10)培养的第9天，在DC-CIK细胞的培养袋中加入400mlCIK细胞诱导培养基，混合均匀后继续培养；(I I)培养的第11天，在DC-CIK细胞共培养的培养袋中加入800ml CIK细胞诱导培养基，混合均匀后继续培养;与此同时在NK细胞的培养袋中加入100ml的NK细胞诱导培养基，混合均勾后继续培养；(12)培养的第14天，在DC-CIK细胞培养体系中取出800-1000ml的DC-CIK细胞悬液收获细胞，并加入600ml的CIK细胞诱导培养基，混合均匀后继续培养;与此同时在NK细胞培养体系中取出800-1000m本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种配合淋巴细胞培养基快速诱导大量DC‑CIK、NK细胞的试剂盒，其特征在于，包括DC套盒：10ug干粉DC‑A,5ug干粉DC‑B；CIK套盒：6支干粉CIK‑A、30ug/支,10ug干粉CIK‑B，20ug干粉CIK‑C；NK套盒：5支干粉NK‑A、50ug/支，10ug干粉NK‑B，5ug干粉NK‑C；按质量百分比，各种组分的成分如下：DC套盒：干粉DC‑A：4000IU/ug白细胞介素‑4 30％‑50％25000IU/ug粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子 50％‑70％干粉DC‑B：16000IU/ug肿瘤坏死因子‑αCIK套盒：干粉CIK‑A：15000IU/ug白细胞介素‑2 60％‑75％氨基酸 25％‑40％干粉CIK‑B：CD3单抗 60％‑80％28000IU/ug干扰素‑伽马 20％‑40％干粉CIK‑C：CD3单抗 20％‑30％CD28单抗 70％‑80％NK套盒：干粉NK‑A：15000IU/ug白细胞介素‑2 30％‑40％7000IU/ug白细胞介素‑12 20％‑30％7000IU/ug白细胞介素‑15 30％‑50％干粉NK‑B：CD16单抗 70％‑80％40000IU/ug干扰素‑伽马 20％‑30％干粉NK‑C：CD16单抗。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：秦臻，鲁振宇，韩洪起，张冰晶，刘俊江，徐悦，
申请(专利权)人：天津普瑞赛尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12
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