耐高温脂肪酶的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种耐高温脂肪酶的制备方法，包括以下步骤：将来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的耐高温脂肪酶基因克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)中；再对毕赤酵母进行活化处理，然后将活化处理后的毕赤酵母单菌落接种于摇瓶中进行摇瓶培养；将摇瓶培养的菌液移至种子罐中进行培养；将种子罐培养的菌液移至发酵罐中进行发酵培养；最后在发酵液中加入脂肪酶协同剂，经吸附、干燥后，即得到所述脂肪酶。本发明专利技术制备方法获得的脂肪酶，能耐受较高温度，较宽的pH作用范围和对有机溶剂良好的耐受性等特点，扩大了脂肪酶的应用领域，解决了饲料制粒中脂肪酶不耐温的问题。

【技术实现步骤摘要】
耐高温脂肪酶的制备方法
本专利技术涉及发酵领域，尤其涉及一种耐高温脂肪酶的制备方法。
技术介绍
脂肪酶(triacylglycerollipaseEC3.1.1.3)是一种广泛存在的水解酶，能够催化甘油三酯键的断裂。因其催化功能的多样性及作为一种生物催化剂的优越性，广泛应用于食品、制革、饲料、洗涤、油脂化工等领域。脂肪酶作为饲料添加剂应用于动物养殖中具有广阔的应用前景，首先脂肪酶可以消除植物性饲料原料中的脂质抗营养因子，同时可以弥补幼禽幼畜消化道内脂肪酶的不足。但是在已实现产业化生产的脂肪酶产品中，pH稳定性多在中性偏碱范围内，对酸的耐受性较差，适合于饲料用的品种很少。脂肪酶的制备法主要有提取法和微生物发酵法。脂肪酶的来源主要是植物、动物以及微生物。植物中如油料作物的种子，动物中如高等动物的胰脏和脂肪组织都是提取法提取脂肪酶的来源，提取法资源有限、工艺复杂、产量低；微生物发酵法它不受环境影响，资源丰富，产酶周期短，产物较单纯且成本低，生产上易于管理，易于实现工业化生产，但是目前采用微生物发酵法制备的脂肪酶的耐温性能都比较差。芽孢杆菌属是微生物中产脂肪酶的重要成员，其所产的脂肪酶具有能本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种耐高温脂肪酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的耐高温脂肪酶基因克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)中；（2）对经步骤（1）处理后的毕赤酵母进行活化处理，然后将活化处理后的毕赤酵母单菌落接种于摇瓶中进行摇瓶培养；（3）将摇瓶培养的菌液移至种子罐中进行培养；（4）将种子罐培养的菌液移至发酵罐中进行发酵培养；（5）在步骤（4）得到的发酵液中加入脂肪酶协同剂，经吸附、干燥后，即得到所述脂肪酶。

【技术特征摘要】
1.一种耐高温脂肪酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将来源于枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的耐高温脂肪酶基因克隆至毕赤酵母(Pichiapastoris)中；（2）对经步骤（1）处理后的毕赤酵母进行活化处理，然后将活化处理后的毕赤酵母单菌落接种于摇瓶中进行摇瓶培养；（3）将摇瓶培养的菌液移至种子罐中进行培养；（4）将种子罐培养的菌液移至发酵罐中进行发酵培养；（5）在步骤（4）得到的发酵液中加入脂肪酶协同剂，经吸附、干燥后，即得到所述脂肪酶；所述脂肪酶协同剂由聚乙烯胺、环糊精和玉米淀粉组成；其中所述聚乙烯胺的质量与发酵液体积比值为0.1%；环糊精的添加与发酵液体积的比值为1%；所述比值单位为Kg/L；干燥的过程采用喷雾干燥，干燥的温度不超过100℃；最终得到的脂肪酶产品水分不超过10%。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养包括菌体数量增殖阶段、菌体饥饿阶段和甲醇溶液诱导阶段。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述菌体数量增殖阶段的操作步骤包括：将种子罐培养的菌液接种至发酵罐后，控制培养温度为30℃±0.5℃，并调pH至5.0±0.1；控制发酵初期发酵罐中的转速为100-120rpm，通风量为1:(1.8-2.2)vvm；随着发酵菌体增多，调节转速和通风量控制发酵罐中的溶氧大于25%；培养14-16小时后，当发酵罐中的溶氧迅速回升到95%以上时，加入浓度为30-35%葡萄糖液，控制发酵罐培养基中糖的浓度始终在0.5%以下，当菌体湿重达到160±10g/L时停止补糖。4.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡爱红，朱晓媛，莫章桦，
申请(专利权)人：湖南南北旺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43