【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学及临床分子诊断
,特别是涉及一种用于叉头转录因子O1(FOXO1)基因突变检测的试剂、PCR检测方法及应用。
技术介绍
Wnt信号通路广泛存在于无脊椎动物和脊椎动物中,是一类在物种进化过程中高度保守的信号通路。Wnt信号在动物胚胎的早期发育、器官形成、组织再生和其它生理过程中,具有至关重要的作用。如果这条信号通路中的关键蛋白发生突变或者异常表达,导致信号异常活化,就可能诱导癌症的发生。Wnt信号通路包括经典的Wnt信号通路与非经典的Wnt信号通路,在经典通路即Wnt-β-catenin信号通路中,Wnt因子通过激活细胞膜上的Frizzle/LRP5/6协同受体后抑制细胞内游离β-catenin蛋白的磷酸化和降解,细胞质中的β-catenin蛋白水平升高后将发生β-catenin蛋白的核移位,导致细胞核中β-catenin蛋白升高,胞核中β-catenin蛋白能够联合Pygo2、Bcl-9以及FoxM1蛋白共同与TCF/LEF-1转录因子家族形成复合体并激活Wnt信号通路下游靶基因的转录激活。FOXO1蛋白是Wnt信号通路中β-catenin下游重要成员之一。研究发现,在氧化应激状态下,FOXOs能够竞争性地与β-catenin结合,减少后者与TCF的结合,从而影响Wnt信号通路的传导。目前越来越多的研究已经发现,在很多肿瘤中FOXO1蛋白均呈现不同程度的突变。目前研究核心信号通路的核 ...
【技术保护点】
一种用于叉头转录因子O1FOXO1基因突变检测的试剂,其特征在于,包括用于阻断野生型FOXO1基因扩增的野生型PNA序列、用于特异性扩增R609C、D624N突变型FOXO1基因序列的一组引物对及突变型PNA荧光探针:所述检测FOXO1基因R609C突变正向引物如序列表中SEQ ID NO.1;所述检测FOXO1基因R609C突变反向引物如序列表中SEQ ID NO.2;所述检测FOXO1基因D624N突变正向引物如序列表中SEQ ID NO.3;所述检测FOXO1基因D624N突变反向引物如序列表中SEQ ID NO.4;所述检测FOXO1基因R609C突变PNA荧光探针如序列表中SEQ ID NO.5;所述检测FOXO1基因D624N突变PNA荧光探针如序列表中SEQ ID NO.6;所述特异性结合包含FOXO1基因609密码子野生型PNA序列如序列表中SEQ ID NO.7;所述特异性结合包含FOXO1基因624密码子野生型PNA序列如序列表中SEQ ID NO.8;所述PNA荧光探针的5'端的荧光报告基团为:FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3或Cy5,3'端 ...
【技术特征摘要】
1.一种用于叉头转录因子O1FOXO1基因突变检测的试剂,其特征在于,包括
用于阻断野生型FOXO1基因扩增的野生型PNA序列、用于特异性扩增R609C、
D624N突变型FOXO1基因序列的一组引物对及突变型PNA荧光探针:
所述检测FOXO1基因R609C突变正向引物如序列表中SEQIDNO.1;
所述检测FOXO1基因R609C突变反向引物如序列表中SEQIDNO.2;
所述检测FOXO1基因D624N突变正向引物如序列表中SEQIDNO.3;
所述检测FOXO1基因D624N突变反向引物如序列表中SEQIDNO.4;
所述检测FOXO1基因R609C突变PNA荧光探针如序列表中SEQIDNO.5;
所述检测FOXO1基因D624N突变PNA荧光探针如序列表中SEQIDNO.6;
所述特异性结合包含FOXO1基因609密码子野生型PNA序列如序列表中
SEQIDNO.7;
所述特异性结合包含FOXO1基因624密码子野生型PNA序列如序列表中
SEQIDNO.8;
所述PNA荧光探针的5'端的荧光报告基团为:FAM、HEX、TET、JOE、
VIC、ROX、Cy3或Cy5,3'端的淬灭基团为:TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2、
BHQ3或DABCYL。
2.根据权利要求1所述的用于叉头转录因子O1FOXO1基因突变检测的试剂,
其特征在于,所述的检测试剂还包括PCR反应液、609密码子和624密码子突
变型参考品、609密码子和624密码子野生型参考品;其中PCR反应液包括:
DEPC水、具有5'→3'外切活性的DNA聚合酶、dNTPs、10×PCRBuffer、RNASIN、
M-MLV逆转录酶、oligo...
【专利技术属性】
技术研发人员:周策凡,唐景峰,陈兴珍,张毅,秦文英,
申请(专利权)人:湖北工业大学,
类型:发明
国别省市:湖北;42
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