本发明专利技术公开了一种四肽的制备方法及应用。该四肽的制备方法包括以下步骤：1）硝基精氨酸的制备；2）硝基精氨酸甲酯的制备；3）BocPro的制备；4）BocPro-NO2ArgOMe的制备；5）Pro-NO2ArgOMe的制备；6）BocGly的制备；7）BocGly-Gln的制备；8）BocGly-Gln-Pro-NO2ArgOMe的制备；9）BocGly-Gln-Pro-NO2Arg的制备；10）Gly-Gln-Pro-NO2Arg的制备；11）四肽Gly-Gln-Pro-Arg的制备。本发明专利技术的四肽可用于制备祛皱、抗炎、美容护肤品。本发明专利技术的合成路线具有路线短、产率高、节省时间的特点，合成过程中涉及到的所有原料均已商品化，价格廉价，技术难度小，工业化操作简单，具有良好的产业化前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，该四肽具有Gly-Gln-Pro-Arg的氨基酸 序列。
技术介绍
白细胞介素是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子，它和血细胞生 长因子同属细胞因子，两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介 素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化等方面起到重要作用。 然而，若白细胞介素分泌过量，则会触发急性炎症反应。 皮肤是人体最大的器官，承担着保护身体、排汗、感觉冷热和压力等多重功能。人 出生后皮肤组织日益发达，功能逐渐活跃。然而，当到达一定年龄皮肤就会开始退化，皮肤 变得疏松，脸上出现皱纹、鱼尾纹、色斑等。随着人们生活水平的日益提高，人们越来越关注 皮肤问题，尤其是女性，都很重视自身皮肤的保养。 四肽Gly-Gln-Pro-Arg(GQPR)可以用作护肤品，具有以下作用：1)延缓和抑制过量 白细胞介素的生成，从而抑制由它触发的急性炎症反应;2)保湿、改善淋巴循环、阻止弹力 蛋白流失；3)提高皮肤的紧致和弹力，可用于眼霜，起到祛除眼袋的效果;4)紧致、调节皮 肤、平滑皱纹。 本专利技术开发了一种四肽GQPR合成的新工艺，该工艺具有合成路线短、产率高、节省 时间等优点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供。 本专利技术所采取的技术方案是： -种四肽的制备方法，包括以下步骤： 1)硝基精氨酸的制备:将发烟硝酸和浓硫酸混合均匀，置于冰盐浴中，边搅拌边缓 慢加入L-精氨酸(L-Arg)，搅拌反应2~3h，再加入浓氨水调节pH值至8~9,然后用冰醋酸调 节pH值到6,将反应液置于冰箱中0~4°C保存4~6h，收集沉淀物，沉淀分别经水洗1~2h、 95%的乙醇洗1~2h、抽滤、干燥，得到结构式如（1)所示的硝基精氨酸， 其中，所述L-精氨酸、发烟硝酸的质量体积比为lg: (1.25~2)mL;所述发烟硝酸、 浓硫酸的体积比为1: (0.4~1)。 2)硝基精氨酸甲酯的制备:将步骤1)的硝基精氨酸溶于甲醇，加入DMF，置于冰盐 浴中，滴加 SOCl2，滴加完后反应30~50min，然后慢慢升温至75~85°C，回流反应6~8h，反 应液经减压蒸馏除去溶剂、乙醇结晶，得到结构式如(2)所示的硝基精氨酸甲酯，其中，所述硝基精氨酸、甲醇的质量体积比为Ig: (3~15)mL;所述硝基精氨酸、DMF 的摩尔比为1: (0.01~0.05);所述硝基精氨酸、SOCl2的摩尔比为1:(1~1.6)。 3)BocPro的制备：将脯氨酸（Pro)溶于水，置于冰盐浴中，滴加 NaOH溶液，再加入 THF，再滴加含(Boc )20的THF溶液，滴加完后室温搅拌至反应完全，减压蒸馏除去THF，用石 油醚萃取除去未反应的（Boc)2O,再置于冰盐浴中用柠檬酸溶液调节pH值至2~3,析出沉 淀，抽滤，得白色固体，滤液用乙酸乙酯萃取3~5次，萃取液经饱和氯化钠洗涤、无水Na 2SO4 干燥、减压蒸馏除去乙酸乙酯，得到结构式如(3)所示的BocPro，其中，所述脯氨酸、水的质量体积比为Ig: (50~80)mL;所述水、NaOH溶液、THF、含 (Boc)2O的THF溶液的体积比为6: (3~4): (3~4): (3~4);所述NaOH溶液的物质的量浓度为 1~3mol/L;所述脯氨酸、（Boc)2O的摩尔比为I: (1.1~1.5)。 4)BocPr〇-N02Arg0Me的制备：将含BocPro、缩合剂的THF溶液置于冰盐浴中，加入 脱水剂，恒温反应3~5h，将生成的沉淀过滤得滤液，再将含硝基精氨酸甲酯、三乙胺的DMF 溶液慢慢加入到上述反应体系中，于室温搅拌反应过夜，减压蒸馏除去DMF和THF，加入碳酸 氢钠溶液和乙酸乙酯萃取5~6次，萃取液经饱和氯化钠溶液洗涤、硫酸钠干燥、减压蒸馏， 得到结构式如(4)所示的BocPro_N〇2ArgOMe，' * 7 其中，所述BocPro、缩合剂、脱水剂、硝基精氨酸甲酯、三乙胺的摩尔比为1: (1.1~ 1.4): (1.1~1.3): (1~1.2): (1~1.2);所述THF溶液、DMF溶液的体积比为(2~3): 1;所述 缩合剂为N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑中的一种;所述脱水剂为碳化二亚胺类。5) Pro_N〇2ArgOMe的制备：将BocPro_N〇2ArgOMe溶于盐酸乙酸乙酯溶液，40~50°C反 应过夜，过滤，干燥，得到结构式如(5)所示的Pro-NO2ArgOMe， 其中，所述BoCPro-NO2ArgOMe、盐酸乙酸乙酯溶液的质量体积比为Ig: (10~40) mL;所述盐酸乙酸乙酯溶液的物质的量浓度为2~4mol/L。 6)BocGly的制备：将甘氨酸(Gly)水溶液置于冰盐浴中，滴加 NaOH溶液，加入THF， 滴加(Boc)2O的THF溶液，维持pH值为8~10,滴完后室温搅拌反应2~4h，减压蒸馏除去THF， 再置于冰盐浴中用柠檬酸溶液调节pH至1~3,再用乙酸乙酯萃取3~4次，萃取液经饱和氯 化钠洗涤、无水Na2SO 4干燥、减压蒸馏，得到结构式如(6)所示的BocGly， ? · ·> 7其中，所述甘氨酸水溶液中甘氨酸、水的质量体积比为lg: (15~30)mL;所述甘氨 酸水溶液、NaOH溶液、THF、（Boc)2O的THF溶液的体积比为20: (5~8): (5~8): (3~5);所述 NaOH溶液的物质的量浓度为1~3mo I /L。 7)BocGly-Gln的制备：将含BocGly和缩合剂的THF溶液置于冰盐浴中，加入脱水 剂，恒温反应5~7h，将生成的沉淀过滤得滤液，将滤液滴加到含谷氨酰胺(Gln)和NaHCO3的 水溶液中，室温搅拌反应过夜，调节PH值到6,减压蒸馏除去THF，用乙酸乙酯萃取除去小极 性杂质，再调节PH值到3~4,将反应液置于冰箱中0~4°C过夜，结晶析出白色沉淀，沉淀经 过滤、干燥，得到结构式如(7)所示的Bo cG I y-G I η， 其中，所述含BocGly和缩合剂的THF溶液、含Gln和NaHCO3的水溶液的体积比为3: (2~4);所述BocGly、缩合剂、脱水剂、谷氨酰胺、NaHCO3的摩尔比为1: (1~1.3): (1~1.3): (1~1.2):(1.3~1.6);所述缩合剂为N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑中的一种;所述 脱水剂为碳化二亚胺类。 8)BocGly-Gln-Pr〇-N〇2ArgOMe 的制备：将含 BocGly-Gln 和缩合剂的 THF 溶液置于 冰盐浴中，加入脱水剂，恒温反应5~7h，将生成的沉淀过滤得滤液，将滤液滴加到含Pro-NO2ArgOMe和三乙胺的DMF溶液中，滴加完后室温搅拌反应过夜，减压蒸馏除去THF，用碳酸 氢钠溶液和乙酸乙酯萃取3~5次，萃取液经碳酸氢钠洗涤、5 %的乙酸溶液洗涤、饱和氯化 钠溶液洗涤、硫酸钠干燥、减压蒸馏、二氯甲烷重结晶，得到结构式如（8)所示的Boc-Gly-Gln-Pr〇-N〇2ArgOMe ? 其中，所述BocGly-GlnOH、缩合剂、脱水剂、Pro_N02Arg0Me、三乙胺的摩尔比为I: (1 · 1~1 · 3): (1~1 · 3): (1 ·0~1 · 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种四肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1)硝基精氨酸的制备：L‑精氨酸中胍基上的伯胺与发烟硝酸发生硝化反应，得到结构式如(1)所示的硝基精氨酸，2)硝基精氨酸甲酯的制备：步骤1)的硝基精氨酸与甲醇发生酯化反应，得到结构式如(2)所示的硝基精氨酸甲酯，3)BocPro的制备：脯氨酸与二碳酸二叔丁酯反应，通过叔丁氧羰基(Boc)将脯氨酸的氨基保护起来，得到结构式如(3)所示的BocPro，4)BocPro‑NO2ArgOMe的制备：步骤2)的硝基精氨酸甲酯与步骤3)的BocPro进行氨基酸缩合反应，得到结构式如(4)所示的BocPro‑NO2ArgOMe，5)Pro‑NO2ArgOMe的制备：步骤4)的BocPro‑NO2ArgOMe发生Boc保护基的脱除反应，得到结构式如(5)所示的Pro‑NO2ArgOMe，6)BocGly的制备：甘氨酸与二碳酸二叔丁酯反应，通过叔丁氧羰基(Boc)将甘氨酸的氨基保护起来，得到结构式如(6)所示的BocGly，7)BocGly‑Gln的制备：步骤6)的BocGly与谷氨酰胺发生氨基酸缩合反应，得到结构式如(7)所示的BocGly‑Gln，8)BocGly‑Gln‑Pro‑NO2ArgOMe的制备：步骤7)的BocGly‑Gln与步骤5)的Pro‑NO2ArgOMe发生氨基酸缩合反应应，得到结构式如(8)所示的BocGly‑Gln‑Pro‑NO2ArgOMe，9)BocGly‑Gln‑Pro‑NO2Arg的制备：步骤8)的BocGly‑Gln‑Pro‑NO2ArgOMe水解，得到结构式如(9)所示的BocGly‑Gln‑Pro‑NO2Arg，10)Gly‑Gln‑Pro‑NO2Arg的制备：步骤9)的BocGly‑Gln‑Pro‑NO2Arg发生Boc基团的脱除反应，得到结构式如(10)所示的Gly‑Gln‑Pro‑NO2Arg，11)终产物四肽Gly‑Gln‑Pro‑Arg的制备：步骤10)的BocGly‑Gln‑Pro‑NO2Arg发生催化加氢还原反应，得到结构式如(11)所示的四肽Gly‑Gln‑Pro‑Arg，...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林志隆，
申请(专利权)人：安婕妤化妆品科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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