尿液中修饰核苷的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种尿液中修饰核苷的检测方法，具体包括如下步骤：尿液预处理后保存于滤纸片上，后通过萃取得到待测样本；将所述待测样本通过液质联用检测，得到修饰核苷的种类和含量。本发明专利技术提供的检测方法中，通过将尿液保存于滤纸片上再通过萃取过程，运用液质联用方法，能够快速、有效地对尿液中的修饰核苷进行定性和定量检测。由于将尿液保存于滤纸片上，将尿液样品转换为固体形式进行保存，稳定性大大提高，从而避免微生物污染检测样品。而且，本发明专利技术提供的方法也比现有的冷冻法更为简易、方便。

【技术实现步骤摘要】
尿液中修饰核苷的检测方法
本专利技术涉及液谱质谱联用
，具体而言，涉及一种尿液中修饰核苷的检测方法。
技术介绍
修饰核苷主要存在于RNA中，是在转录后由特定的甲基转移酶与连接酶作用于多聚核苷分子而形式。RNA代谢都需要特定的酶来催化，正常核苷酶解后可降解或者磷脂化再利用，而修饰核苷是正常核苷的糖苷键、碱基、糖羟基被修饰或者两两结合生成的独特性结构，由于被高度修饰，降解修饰核苷需要的酶活性较高，特异性强，因此，修饰核苷从细胞中释放出来，最终通过尿液排出。故，尿液中修饰核苷的含量可用来评价人体的核苷代谢状况。目前，已有报道采用毛细管电泳法对尿液中修饰核苷进行检测，但该方法检测出的修饰核苷类别少。而且，由于尿液中含有多种微生物。如果长时间以液体形式保存，微生物就会污染尿液，影响检测结果的准确性，现有的检测方法中都是将待检测尿液取样后存储于冰箱中冷冻保存，检测时再解冻，不但需要冷冻装置，解冻步骤也使得检测时间变长。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种尿液中修饰核苷的检测方法。针对检测样品易受微生物污染的缺点，本专利技术提供的检测方法中将尿液保存于滤纸片上本文档来自技高网...

【技术保护点】
尿液中修饰核苷的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)尿液预处理后保存于滤纸片上，后通过萃取得到待测样本；(2)将所述待测样本通过液质联用检测，得到修饰核苷的种类和含量。

【技术特征摘要】
1.尿液中修饰核苷的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)尿液预处理后保存于滤纸片上，后通过萃取得到待测样本；(2)将所述待测样本通过液质联用检测，得到修饰核苷的种类和含量；步骤(1)中，所述萃取的步骤具体包括：将滤纸片放入甲醇水混合溶液中经超声、离心后取上清液作为待测样本；步骤(2)具体包括：(21)称取标准品，用甲醇溶解，得到不同浓度的标准液；(22)称取内标物，用甲醇水溶液溶解后分别加入所述标准液中，超纯水定容后离心，取上清液作为待测标准液；(23)将所述待测样本和所述待测标准液通过液质联用检测，得到修饰核苷的种类和含量；步骤(23)中，所述液质联用检测的液相条件为：流速为0.1-1.0mL/min；进样量1-20μL；键合相色谱柱；柱温20-40℃；A和B作为流动相，其中A为甲醇水溶液，B为甲酸甲醇溶液，梯度洗脱程序为0-0.5min，A：97％、B：3％；0.5-3min，A：97～5％、B：3～95％；3-3.01min，A：5-97％、B：95-3％；3.01-11min，A：97％、B：3％；11.01min，A：97％、B：3％；13min，A：97％、B：3％；质谱条件为：采用ESI离子源，正离子MRM扫描，雾化气流速8-20L/min，气帘...

【专利技术属性】
技术研发人员：童鸿斌，
申请(专利权)人：杭州汉库医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33