血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术提供血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒及检测方法，包括样本与试剂包A中的试剂A混合，静置，混合后转移至试剂包C中的超滤离心管内超滤，滤液转移至离心管，加入试剂包B中的内标，涡旋混匀，静置，加入试剂包A中的试剂B，涡旋混匀，静置，高速离心。取上清液，冻干，加入试剂包A中的试剂D，涡旋，衍生，并恢复至室温，冻干，加入试剂包A中的试剂C，涡旋，所制备样本上机分析。应用超高效液相色谱质谱联用系统，在C18反相色谱柱上，实现7种游离甾体激素在色谱柱上的分离，经分离的7种游离甾体激素进入质谱系统检测。本发明专利技术提供了一种准确高效的血清中7种游离甾体激素同时检测的质谱检测试剂盒及检测方法。检测试剂盒及检测方法。检测试剂盒及检测方法。

【技术实现步骤摘要】
血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及质谱检测
，具体为一种血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]甾体激素是人体内最重要的内源性代谢物种类之一，在维持第二性征、调控基因转录、调节内分泌与免疫功能等方面发挥着至关重要的作用。激素在人体内有存在方式有两种，一种是与蛋白结合形式，一种是游离状态。众多研究表明循环血液中小部分的游离甾体激素是实现激素生物效应的主要部分，生物体内与蛋白结合的激素与游离甾体激素间的关系非常复杂，但某些生理因素和(或)药物治疗能够影响与蛋白结合激素和游离甾体激素的浓度，这种情况下，测定游离甾体激素比测定总激素能够更好的判断生物活性的状态。
[0003]目前研究报导血清中甾体激素检测方法大部分为总激素的含量检测，总激素含量检测方法相对比较成熟，但游离甾体激素检测的报导较少，多种游离甾体激素的同时检测能够更加全面有效的评估人体与其相关的代谢状态，对于研究疾病的发生发展机制和个体对疾病的应答具有重要的作用。目前游离甾体激素检测报导仅限于单一游离甾体激本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒，其特征在于，包括血清样本前处理过程应用试剂的试剂包A，作为校准品、内标及质控使用的试剂包B，作为前处理样本超滤和进样使用的试剂包C，试剂包A中包括试剂A、试剂B试剂C、试剂D，试剂包B包括定量使用的校准品、内标和进行质量控制的质控品，试剂包C包括0.5mL超滤离心管、2mL进样瓶、300μL内衬管。2.根据权利要求1所述的血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒，其特征在于：试剂A为HEPPS缓冲溶液，试剂B为甲基叔丁基醚，试剂C为30％甲醇水，试剂D为盐酸羟胺甲醇溶液。3.根据权利要求2所述的血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒，其特征在于：HEPPS缓冲溶液pH在7.2～7.4之间，浓度为238.3g/L，所述的盐酸羟胺甲醇溶液为盐酸羟胺浓度为0.1mol/L。4.根据权利要求1所述的血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒，其特征在于：试剂包B包括定量使用的校准品、内标和进行质量控制的质控品，校准品由一定浓度的7种激素的混合标准溶液制备而成，浓度控制在S1
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S6之间；内标由各激素内标标准物质混合溶液制备而成，浓度为0.5ng/mL；质控品包括低质控和高质控，所述低质控和高质控均为牛血清白蛋白缓冲液中加入7种激素的混合标准溶液制备而成，所述低质控浓度控制在线性S3浓度，所述高质控浓度控制在线性S5浓度。5.根据权利要求4所述的血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒，其特征在于：牛血清白蛋白缓冲液中的缓冲液为PBS缓冲液，其pH在7.2～7.4之间,牛血清白蛋白浓度为5％。6.一种血清中7种游离甾体激素质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)血清样本前处理：包括血清样本稀释，超滤，萃取，衍生，所制备的样本作为高效液相色谱质谱分析备用；(2)校准品前处理：将所述(1)血清样本前处理中的血清样本更换为相同体积的游离皮质醇、游离皮质酮、游离11
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脱氧皮质醇、游离雄烯二酮、游离脱氢表雄酮、游离脱氢表雄酮硫酸酯、游离睾酮的校准品，前处理方法相同于所述(1)血清样本前处理方法，所制备样本作为高效液相色谱质谱分析备用；(3)质控品前处理：将所述(1)血清样本前处理中的血清样本更换为相同体积的质控品，其中质控品包括低质控和高质控，前处理方法同所述(1)血清样本前处理方法，所制备样本作为高效液相色谱质谱分析备用；(4)超高效液相色谱分离：应用超高效液相色谱系统，在C18反相色谱柱上，在特定的流动相组成、...

【专利技术属性】
技术研发人员：马良，许佳彬，李承达，章燕露，陈佳，拓文娟，
申请(专利权)人：杭州汉库医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：