一种用大孔树脂分离纯化核桃青皮中多酚类物质的方法，第一步、将核桃青皮干粉用50％乙醇在温度35℃～40℃条件下超声提取多次，提取液真空抽滤，滤液蒸发得核桃青皮多酚粗提液，稀释至所需浓度，冷藏备用；第二步、采用Folin-Ciocaileu法测定核桃青皮中多酚总含量；第三步、大孔树脂的预处理；第四步、大孔树脂静态吸附与解吸；第五步、大孔树脂动态吸附与解吸；第六步、采用HPLC法测定大孔树脂分离纯化后的核桃青皮多酚提取物单体酚的组成及含量，完成所有分离纯化过程。本发明专利技术提供了核桃青皮中多酚类物质分离纯化的新途径，操作简便，分离纯化的品质和效率高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品科学领域，具体涉及。
技术介绍
近年来，随着生活水平的提高，人们对保健食品的需求与日倶增。植物中含有大量的多酚类物质，这些物质具有抗肿瘤、抗氧化、抗辐射、抗高血糖、降血脂等多种生理功能，是保健食品的重要原料，通过分离纯化能够从植物中获取多酚类物质。然而传统的分离纯化方法如沉淀分离法、溶剂萃取法等，存在纯度低或成本高等缺点，大孔树脂法能够弥补这些缺点，它工艺简单、操作方便、成本低廉，在食品、药品、化妆品行业的应用带来了可观的经济效益，但是目前尚未出现大孔树脂法在分离纯化核桃青皮多酚类物质中的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述现有技术中的问题，提供，提高分离纯化的品质和效率。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为:第一步、将核桃青皮干粉用50%乙醇在温度35°C?40°C条件下超声提取多次，提取液真空抽滤，滤液蒸发得核桃青皮多酚粗提液，稀释至所需浓度，冷藏备用；第二步、采用Folin-C1caileu法测定核桃青皮中多酸总含量；第三步、将大孔树脂用4% NaOH溶液浸泡处理2?4h，再使用蒸馏水冲洗至中性；然后用4% HC1溶液浸泡2?4h，使用蒸馏水冲洗至中性；最后再用95%乙醇浸泡处理2?4h，蒸馏水洗至无醇味为止；备用；第四步、大孔树脂对核桃青皮多酚稀释液的静态吸附与解吸；第五步、大孔树脂对核桃青皮多酚稀释液的动态吸附与解吸；第六步、采用HPLC法测定大孔树脂分离纯化后的核桃青皮多酚提取物单体酚的组成及含量，完成所有分离纯化过程。所述的大孔树脂采用NKA-9。所述的第一步中核桃青皮干粉与乙醇的料液比为lg: 17mL，超声提取两次，滤液通过旋转蒸发，得核桃青皮多酸粗提液。所述的Folin-C1caileu法测定核桃青皮中多酸总含量的具体过程为:取0.2mL核桃青皮多酚粗提液，加入到10mL容量瓶中，加入0.5mL FC试剂，混合均匀，在lmin内加入1.5mL 20%碳酸钠溶液，混合，用去离子水定容；将上述溶液在35?40°C下暗放置1.5?2h后，以不加粗提液的溶液作为空白对照，在760nm波长下测定吸光度值。所述的大孔树脂静态吸附的具体过程为:称取1.0g树脂于50mL三角瓶中，加入第三步所得备用树脂样品液30mL，密封置于160?175r/min摇床上，室温下振荡4?5h，从上清液中取样，测定多酚含量；据以下公式计算吸附量和吸附率，考察样品液的浓度和pH对树脂吸附性能的影响；qe = (CO - Cl) XVl/ff (1)E(% ) = X 100 (2)式中:qe—吸附量，mg/g ;E—吸附率，% ;C0—起始浓度，mg/mL ;Cl—平衡浓度，mg/mL ;V1—吸附溶液体积，mL ;W—树脂的重量，g。所述的大孔树脂静态解吸的具体过程为:将已充分吸附后的树脂用蒸馏水清洗，直至表面无样品液残留，再用滤纸吸干水分，置于三角瓶中，加入30mL不同浓度乙醇溶液，密封放置于160?175r/min振荡器中，室温下解吸2?3h，从上清液中取样，测多酚含量；据以下公式计算解吸率和解吸量，考察洗脱液的浓度和pH对树脂洗脱性能的影响；D(%) = C2XV2X100/(C0 - Cl) XVI (3)qd = C2XV2/W (4)式中:D—解吸率，% ;qd—解吸量，mg/g ;C0—起始浓度，mg/mL ;Cl—平衡浓度，mg/mL ;C2—解吸液中多酚浓度，mg/mL ;V1—吸附溶液体积，mL ;V2—解吸溶液体积，mL ;W—树脂取量，go所述的大孔树脂动态吸附的具体过程为:将第三步预处理好的树脂湿法装入16mmX500mm的层析柱中，用蒸馈水平衡后，将样品液按1.3mL/min勾速上样并收集流出液，每10mL为一管，检测并计算流出液浓度，确定流速、体积条件，得到最佳吸附条件，绘制动态吸附曲线。所述的大孔树脂动态解吸的具体过程为:将已吸附饱和的树脂进行解吸实验，用蒸馏水洗至无样品液残留，按0.43mL/min匀速用乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，计算流出液浓度，确定洗脱流速、体积条件，得到最佳洗脱条件，绘制动态洗脱曲线。采用HPLC法测定大孔树脂分离纯化后核桃青皮多酚提取物中单体酚组成及含量的具体方法为:采用5 ym,250mmX4.6mm的Diamonsil C18柱；检测波长280nm ;流速1.0ml/min ;柱温30°C ;进样量20uL ;流动相A为0.1 %甲酸高纯水；流动相B为0.1 %甲酸乙腈；梯度洗脱程序依次为 93% A，7% B，0min ；82 % A, 18 % B, 30min ；78% A,22% B，40min ；50% A, 50% B，45min ；50% A, 50% B，50min ;将样品峰保留时间与标准品保留时间进行对比，判断单体酚种类，按照峰面积计算单体酚含量。与现有技术相比，本专利技术用大孔树脂分离纯化核桃青皮中多酚类物质的方法具有如下的有益效果:大孔树脂提供了核桃青皮中多酚类物质分离纯化的新途径，通过实验检测，当吸附条件为上样多酚液浓度为0.574mg/mL，pH为1.0，上样速率为1.3mL/min，吸附率能够达到90.1 % ;当洗脱条件为50 %的乙醇洗脱剂，pH为3.0，洗脱速率0.43mL/min，解吸率达87.9%。经HPLC鉴定和分析，核桃青皮酚类物质主要由原儿茶素、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、阿魏酸、芦丁等单体组成。核桃青皮多酚纯化前保留时间2-5min和48_50min之间的杂峰经过纯化后被降低，且纯化前后剩余峰基本被保留，由此说明此种树脂适用于分离纯化核桃青皮多酚。本专利技术方法的操作简便，分离纯化的品质和效率高。进一步的，本专利技术NKA-9大孔树脂动态吸附过程中，如果流速过快，树脂和粗提液不能够充分接触，降低其吸附量；如果流速过慢，虽有利于酚类物质的吸附，但却会降低生产效率，影响生产周期，1.3mL/min为最佳上样流速。进一步的，本专利技术洗脱速度对解吸效果有显著地影响，虽然洗脱流速要求慢，但如果流速过慢，则会引起解吸时间延长，且在流动过程中被洗脱的多酚可能会被重新吸附，两相间会重新建立动态平衡，降低解吸量；而如果流速过快，则会导致洗脱剂不能和吸附饱和的树脂充分接触而快速流出，使得解吸量降低，生产效率下降，实验验证0.43mL/min为最佳洗脱流速。【附图说明】图1是pH对多酚吸附率的影响图；图2是不同浓度多酚静态吸附曲线图；图3是乙醇浓度对多酚解吸效果的影响图；图4是pH对多酚解吸率的影响图；图5是流速对树脂吸附效果的影响图；图6是洗脱剂流速对树脂解吸效果的影响图；图7是核桃青皮多酚纯化前保留时间与峰值变化图；图8是核桃青皮多酚纯化后保留时间与峰值变化图；【具体实施方式】下面结合附图对本专利技术做进一步的详细说明。一、材料与试剂；青皮核桃:于8月中旬采摘于陕西省蓝田县将青皮核桃取青皮，切碎，经冷冻干燥后研磨粉碎，过60目筛，密封盛装于棕色玻璃瓶内，冷藏备用；大孔树脂:NKA-9;钨酸钠、硫酸锂、钼酸钠、浓磷酸、浓盐酸、氢氧化钠、无水乙醇、无水碳酸钠固体、溴水、甲醇、乙腈；二、主要仪器设备；数控超声波清洗器:KQ3200DE型，昆山市超声仪器有限公司；旋转蒸发仪:RE_52型，上海安亭本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用大孔树脂分离纯化核桃青皮中多酚类物质的方法，其特征在于：第一步、将核桃青皮干粉用50％乙醇在温度35℃～40℃条件下超声提取多次，提取液真空抽滤，滤液蒸发得核桃青皮多酚粗提液，稀释至所需浓度，冷藏备用；第二步、采用Folin‑Ciocaileu法测定核桃青皮中多酚总含量；第三步、将大孔树脂用4％NaOH溶液浸泡处理2～4h，再使用蒸馏水冲洗至中性；然后用4％HCl溶液浸泡2～4h，使用蒸馏水冲洗至中性；最后再用95％乙醇浸泡处理2～4h，蒸馏水洗至无醇味为止；备用；第四步、大孔树脂对核桃青皮多酚稀释液的静态吸附与解吸；第五步、大孔树脂对核桃青皮多酚稀释液的动态吸附与解吸；第六步、采用HPLC法测定大孔树脂分离纯化后的核桃青皮多酚提取物单体酚的组成及含量，完成所有分离纯化过程。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张有林，韩军岐，张润光，马乐，
申请(专利权)人：横山县红梦园科技实业有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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