一种基于离子液体‑超声辅助‑HPLC的昆明山海棠活性成分检测方法技术

本发明专利技术提供了一种基于离子液体‑超声辅助‑HPLC的昆明山海棠活性成分检测方法，其中技术关键为，在所述制备样品为采用1‑丁基‑3‑甲基咪唑六氟磷酸盐的溶液作为提取液提取昆明山海棠药材。采用本发明专利技术提供的方法检测效率明显高于传统单成分简称方法，更重要的是本发明专利技术提供过程中活性成分的转移率明显高于传统的甲醇提取方法，有效的并避免了检测误差。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种中药材的色谱检测方法，更加具体的说涉及一种基于离子液 体-超声辅助-HPLC的昆明山海棠活性成分检测方法。 技术背景 昆明山海棠是卫矛科雷公藤属植物昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum(Levl. )Hutch.的干燥根，性辛味苦，微温，有大毒，具有祛风除湿，祛瘀通络， 续筋接骨的功效。又名火把花、断肠草、紫金皮等，火把花一名始载于《本草纲目》草部毒草 类钩吻条，"生滇南者花红，呼为火把花"，是药典品种"昆明山海棠片"的原料药材，也是雷 公藤类对人和动物效高毒小的药用植物，应用范围广，具有抗炎、免疫抑制，抗肿瘤，改善肾 脏功能等作用，自古中医用于杀虫、舒筋活络、祛风除湿等，使之成为世界瞩目的药用植物 资源。化学成分主要为生物碱及萜类化合物等，其中雷公藤甲素、雷酚内酯、雷公藤醌A等 二萜类成分和雷公藤红素、雷公藤内酯甲等三萜类成分被认为是特征性活性成分。昆明山 海棠素（如昆明山海棠素A、D、K等，山海棠素又名雷酚内酯）是昆明山海棠中的特有化学 成分。 离子液体一般是指由结构不对称的阴阳离子所构成，具有挥发性极低、无毒、无污 染、溶解能力强、热稳定性高、绿色环保等优势，近年来，离子液体萃取技术在中药研究领域 的引入越来越受到关注。另外在《昆明山海棠一湖南省中药材标准》（2009)未见有含量测 定对其进行质量控制，本文首次采用离子液体对昆明山海棠进行微萃取，同时测定昆明山 海棠中雷公藤晋碱、雷公藤碱庚、雷酚内酯、雷公藤次碱和雷公藤醌A，优化了含量测定色谱 条件，微萃取中离子液体类型，浓度等，为昆明山海棠进行多成分的质量控制提供一定的参 考依据。
技术实现思路
为解决昆明山海棠中活成成分多样化检测困难的问题，本专利技术提供了一种基于离 子液体-超声辅助-HPLC的昆明山海棠活性成分检测方法，其中技术关键为，在所述制备样 品为采用1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐的溶液作为提取液提取昆明山海棠药材。 其中所述提取液的为0. 2-1.Omol·L1 1- 丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐甲醇溶 液。 所述制备样品为采用提取液与昆明山海棠药材10:1的固液质量比超声提取 30min〇 其中，所述制备HPLC样品的前处理方法包括以下步骤： 1)精密称定过三号筛昆明山海棠粉末，置于具塞离心试管中； 2)按照固液质量比1:10的比例加入0. 6mol·L1 PF6甲醇溶液； 3)超声萃取30min，然后用12000r·min1离心5min，上清液微孔滤膜滤过，即得 供试样品。 所述HPLC检测的条件为： 色谱柱：Inertsil0DS-4 (3μm, 4. 6*250mm); 流动相：乙腈㈧-0. 1%磷酸溶液⑶； 梯度洗脱条件：0 ~55min，37%A- 37%A; 55 ~75min，37%A- 45%A; 75 ~lOOmin，45 %A- 45 %A; 100 ~105min，45 %A- 49 %A; 105 ~125min，49%A- 49%A; 检测波长：220nm; 柱温：3(TC;流速：0· 75mL/min; 进样量：5μ1。 本专利技术的有益技术效果是：采用本专利技术提供基于离子液体-超声辅助-HPLC的昆 明山海棠活性成分检测方法检测效率明显高于传统单成分简称方法，更重要的是本专利技术提 供过程中活性成分的转移率明显高于传统的甲醇提取方法，有效的并避免了检测误差。【附图说明】 图1昆明山海棠药材及对照品色谱图； 图2离子液体对雷公藤晋碱提取率的影响； 图3离子液体对雷公藤碱庚提取率的影响； 图4离子液体对雷酚内酯提取率的影响； 图5离子液体对雷公藤次碱提取率的影响； 图6离子液体对.雷公藤醌A提取率的影响； 图7离子液体浓度对5种成分提取率的影响； 图8固液比对昆明山海棠中5中成分提取率的影响； 图9雷公藤晋碱对5种化合物提取率的影响； 图10雷公藤碱庚对5种化合物提取率的影响； 图11雷酚内酯对5种化合物提取率的影响； 图12雷公藤次碱对5种化合物提取率的影响； 图13雷公藤醌A对5种化合物提取率的影响； 图14提取方式对雷公藤晋碱提取率的影响； 图15提取方式对雷公藤碱庚提取率的影响； 图16提取方式对雷酚内酯提取率的影响； 图17提取方式对雷公藤次碱提取率的影响； 图18提取方式对雷公藤醌A提取率的影响； 图19超声时间对雷公藤晋碱提取率的影响； 图20超声时间对雷公藤碱庚提取率的影响； 图21超声时间对雷酚内酯提取率的影响； 图22超声时间对雷公藤次碱提取率的影响； 图23超声时间对雷公藤醌A提取率的影响； 图24粉碎度对雷公藤晋碱提取率的影响； 图25粉碎度对雷公藤碱庚提取率的影响； 图26粉碎度对雷酚内酯提取率的影响； 图27粉碎度对雷公藤次碱提取率的影响； 图28粉碎度对雷公藤醌A提取率的影响； 其中，附图1中，A.昆明山海棠药材；B.雷公藤晋碱、雷公藤碱庚、雷酚内酯、雷公 藤次碱和雷公藤醌A的混合对照品；C.雷公藤晋碱对照品；D.雷公藤碱庚对照品；E.雷酚 内酯对照品；F.雷公藤次碱对照品；G.雷公藤醌A对照品；色谱峰分别是：1.雷公藤晋碱； 2.雷公藤碱庚；3.雷酚内酯；4.雷公藤次碱；5.雷公藤醌A。【具体实施方式】 实施例1HPLC的条件考察 1.仪器与试药 岛津HPLCLC-30A高效液相色谱仪，AEG-45SM电子天平（十万分之一，日本岛津 公司），BP121S(万分之一）（北京赛多利斯科学仪器有限公司）。KQ250DB型数控超声波清 洗器（功率250W，频率40kHz，巩义市予华仪器有限责任公司），BJ-100多功能粉碎机（德 清拜杰电器有限公司）， 1-丁基-3-甲基咪唑溴盐（Br，纯度彡99% )，1_ 丁基-3-甲基咪唑四 氟硼酸盐（BF4，纯度彡99% )，1_ 丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐（PF6，纯度 彡99% )，1_己基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐（BF4，纯度彡99% )，1_己基-3-甲基咪 唑六氟磷酸盐（PF4，纯度彡99% )，1_辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐（BF4， 纯度多99% )，均由中科院兰州化学物理研究所提供。雷公藤晋碱（批号：140925,纯度 彡98.0%，成都普菲德生物技术有限公司），雷酚内酯（批号：14102609,纯度彡98.0%，南 京景竹生物科技有限公司），雷公藤次碱（批号：150623,纯度多98. 0 %，成都普菲德生物技 术有限公司），雷公藤碱庚和雷公藤醌A(自制，纯度多98. 0%，中国医学科学研究院药物研 究所提供），乙腈为色谱纯；水为超纯水；其它试剂均为分析纯（重庆川东化工集团有限公 司化学试剂厂）。 2.方法学考察 分别比较了甲醇-7K，乙腈-7K，乙腈-Ο. 1%甲酸，乙腈-Ο. 1%磷酸-0.2%三乙 胺溶液，乙腈-〇·lmol·L1磷酸二氢钾溶液，乙腈-0·lmol·L1乙酸铵溶液等梯度洗脱对目 标成分的分离效果，结果雷酚内酯和雷公藤次碱不能有效地分离，分离度和对称因子达不 到要求。用乙腈-0. 1 %磷酸溶液进行梯度洗脱分离，能有效地分离昆明山海棠中的5种有 效成分。另对检测波长，柱温和流速等进行了考察，最后选择检测波长220nm，柱温30°C，流 速为0. 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于离子液体‑超声辅助‑HPLC的昆明山海棠活性成分检测方法，包括制备样品和HPLC检测，其特征在于：所述制备样品为采用1‑丁基‑3‑甲基咪唑六氟磷酸盐的溶液作为提取液提取昆明山海棠药材。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈一龙，张小梅，励娜，姚媛媛，梁旭明，杨大坚，张毅，祝卢艺，
申请(专利权)人：重庆市中药研究院，
类型：发明
国别省市：重庆;85