微生物检测方法技术

提供对含有多种抗菌性物质的中药提取物制剂、生药，在同一试验条件下可适用于特定微生物试验和活菌数试验这两者而通用性高、能够有效地降低被测试样中的抗菌性物质的影响、可高精度地检测对象微生物的微生物检测方法。一种具有抗菌活性的被测试样中的微生物检测方法，其特征在于，包括：制备含有具有抗菌活性的被测试样的试样液的工序和用培养基培养对象微生物的工序，在所述微生物检测方法中，使(甲基)丙烯酸酯系合成吸附剂作用于试样液和/或培养基。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及，更详细而言，涉及可降低被测试样中所含的抗菌性 物质的影响、高精度地检测对象微生物的。
技术介绍
在食品、医药品等领域中，为了确保质量、安全性，进行产品、原料的微生物检查。 对于其试验方法，各领域中规定了官方方法，对于医药品，日本药典中收载了各种微生物试 验方法。其中，对于非无菌制剂及其原料，规定了微生物限度试验法，其中包括测量活菌数 的活菌数试验和与特定的病原性微生物等相关的特定微生物试验。进而，对于生药，一般试 验法5. 02中的生药试验法中规定了生药的微生物限度试验法。但是，在将微生物限度试验 法应用到中药提取物制剂及作为其原料的生药的情况下，因它们中所含的抗菌性物质（包 含抗真菌性物质，以下同样）的影响而对象微生物的生长繁殖受到抑制，因此存在无法准 确地检测对象微生物的问题。 为了除去被测试样的抗菌活性，通常想到的是将抗菌活性灭活（抑制物质的中 和）、提高试样液的稀释率或者增加培养基的量、膜过滤等。但是，由于中药提取物制剂及作 为其原料的生药等中含有多种抗菌性物质，因此利用特定的灭活剂将所述抗菌性物质有效 地灭活是极其困难的。例如，已知有为了灭活抗菌性物质而在培养基中添加卵磷脂和聚山 梨醇酯的方法，然而虽然相对于对羟基苯甲酸酯类、汞等防腐剂的灭活可获得高的效果，但 对于中药提取物制剂的灭活，大多无法获得充分的效果。实际上，在作为中药原料的生药中 含有从低分子到高分子的多种化合物，并且，这些化合物大多从分子结构方面看是特征性 的成分（萜类化合物、生物碱、黄酮类化合物、醌类、氨基酸、脂肪酸、糖类等），且含有许多 抗菌性物质（萜类化合物、生物碱、黄酮类化合物、鞣酸类等）。由于中药提取物制剂包含多 种生药，因此含有广范围的很多抗菌性物质。进而，中药提取物制剂由于其制法而含有许多 不溶性微粒，无法使用用于除去抗菌性物质的通用的膜过滤。另一方面，若提高稀释率或增 加培养基的量，则灵敏度降低，因此不能说是应当优先选择的方法。 针对这样的问题，本申请人已经提出了通过在培养基中添加活性炭和酸性白土或 活性白土来除去被测试样中的抗菌性物质的方法（专利文献1)。该方法虽然在特定微生物 试验中有用，但在利用使用琼脂培养基的琼脂平板混释法（plate-count method)的活菌数 试验中，培养基因活性炭而着色，并且培养基的透明度因酸性白土或活性白土而下降，因此 难以识别菌落。进而，由于不易将这些物质分离除去，因此存在难以准确地识别菌落而进行 测量的问题。 现有技术文献 专利文献 专利文献1 :国际公开第2008/038625小册子
技术实现思路
专利技术要解决的问题 因此，期望开发出一种对含有多种抗菌性物质的中药提取物制剂、生药，在同一试 验条件下可适用于特定微生物试验和活菌数试验这两者而通用性高、能够有效地降低被测 试样中的抗菌性物质的影响、可高精度地检测对象微生物的，本专利技术的课 题是提供这样的。 用于解决问题的方案 本专利技术人等为解决上述课题而认真研究，结果发现：（甲基）丙烯酸酯系合成吸附 剂能够将被测试样中所含的各种抗菌性物质吸附除去，由于对微生物发育所需的营养成分 的吸附作用弱，因此可在不抑制对象微生物的发育的情况下提高检测精度，进而即使添加 该吸附剂，培养基也不着色，吸附剂在作用之后也能够容易地被清除，因此利用琼脂平板混 释法等也能进行准确的测量，从而完成了本专利技术。 即，本专利技术为具有抗菌活性的被测试样中的，其特征在于，包括： 制备含有具有抗菌活性的被测试样的试样液的工序和用培养基培养对象微生物的工序，在 所述中，使（甲基）丙烯酸酯系合成吸附剂作用于试样液和/或培养基。 专利技术的效果 本专利技术的由于有效地将被测试样中所含的抗菌性物质吸附除去， 因此可在培养时不抑制对象微生物的发育的情况下准确而精度良好地检测对象微生物。另 外，由于能够降低各种抗菌性物质的影响，因此作为检测对象的微生物的范围广，而且可适 用于很多中药提取物制剂或生药等，适用对象广泛、通用性高。进而，即使在培养基中添加 本专利技术所使用的（甲基）丙烯酸酯系合成吸附剂，培养基也不着色或不透明化，吸附剂在作 用之后也能够容易地被分离除去，因此利用琼脂平板混释法等也能够准确地识别菌落，可 迅速、准确地测量。【附图说明】 图1是在实施例6中，以大黄甘草汤为被测试样，将枯草杆菌(Bacillus subtilis)的添加回收率对稀释倍数作图而成的图表。 图2是在实施例6中，以大承气汤为被测试样，将枯草杆菌的添加回收率对稀释倍 数作图而成的图表。【具体实施方式】 本专利技术方法是用于检测具有抗菌活性的被测试样中的微生物的方法，其特征在 于，该方法包括制备含有被测试样的试样液的工序和用培养基培养对象微生物的工序，在 所述方法中，使（甲基）丙烯酸酯系合成吸附剂作用于试样液制备工序中的试样液和培养 工序中的培养基中的任意一者或两者。 作为具有抗菌活性的被测试样（以下，有时简称为"被测试样"），可以举出中药 提取物制剂、生药等。中药提取物制剂是对用水、乙醇等水溶性溶剂提取中药处方而成的 提取物成分进行制剂化而成的制剂，对其剂型没有特别限定，为粉末、颗粒剂、片剂、液体制 剂、丸剂、胶囊剂等均可。另外，中药是古代中国所著的医学书中所记载的生药的配混比、 使用的标准（症状）传到日本并独自地发展而成的，中药处方是根据处方来决定生药的种 类和配混比例。作为中药处方的具体例，可以例示葛根汤、葛根汤加川芎辛夷、乙字汤、安 中散、十味败毒汤、八味地黄丸、大柴胡汤、小柴胡汤、柴胡桂枝汤、柴胡桂枝干姜汤、柴胡加 龙骨牡蛎汤、半夏泻心汤、黄连解毒汤、半夏厚朴汤、五苓散、桂枝加术附汤、小青龙汤、防已 黄芪汤、小半夏加茯苓汤、消风散、当归芍药散、加味逍遥散、桂枝茯苓丸、桂枝加龙骨牡蛎 汤、麻黄汤、越婢加术汤、麦门冬汤、真武汤、吴茱萸汤、人参汤、大黄牡丹皮汤、白虎加人参 汤、四逆散、木防已汤、半夏白术天麻汤、当归四逆加吴茱萸生姜汤、苓桂术甘汤、猪苓汤、补 中益气汤、六君子汤、桂枝汤、七物降下汤、钓藤散、十全大补汤、荆芥连翘汤、润肠汤、薏苡 仁汤、疏经活血汤、抑肝散、麻杏甘石汤、五淋散、温清饮、清上防风汤、治头疮一方、桂枝加 苟药汤、桃核承气汤、防风通圣散、五积散、炙甘草汤、归脾汤、参苏饮、女神散、苟药甘草汤、 茯苓饮、香苏散、四物汤、甘麦大枣汤、柴陷汤、调胃承气汤、四君子汤、龙胆泻肝汤、芎归胶 艾汤、麻杏薏甘汤、平胃散、柴胡清肝汤、二陈汤、桂枝人参汤、抑肝散加陈皮半夏、大黄甘草 汤、神秘汤、当归饮子、六味丸、二术汤、治打扑一方、清肺汤、竹茹温胆汤、滋阴至宝汤、滋阴 降火汤、五虎汤、柴朴汤、大防风汤、黄芪建中汤、小建中汤、大建中汤、升麻葛根汤、当归汤、 酸枣仁汤、辛夷清肺汤、通导散、温经汤、牛车肾气丸、人参养荣汤、小柴胡汤加桔梗石膏、立 效散、清心莲子饮、猪苓汤合四物汤、三黄泻心汤、柴苓汤、胃苓汤、茯苓饮合半夏厚朴汤、茵 陈五苳散、苳姜术甘汤、苳甘姜味辛夏仁汤、黄连汤、三物黄苳汤、排脓散及汤、当归建中汤、 川考茶调散、桂枝茯苳丸加薏该仁、麻子仁丸、麻黄附子细辛汤、启脾汤、大承气汤、桂枝加 芍药大黄汤、茵陈蒿汤、清暑益气汤、加味归脾汤、桔梗汤等，这些中药处方的生药的组合、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有抗菌活性的被测试样中的微生物检测方法，其特征在于，包括：制备含有具有抗菌活性的被测试样的试样液的工序和用培养基培养对象微生物的工序，在所述微生物检测方法中，使(甲基)丙烯酸酯系合成吸附剂作用于试样液和/或培养基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：山本博章，福田勲，
申请(专利权)人：株式会社津村，
类型：发明
国别省市：日本;JP