隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒，包括隐孢子虫阳性质控和贾第鞭毛虫阳性质控、抗隐孢子虫多克隆抗体免疫磁颗粒和抗贾第鞭毛虫多克隆抗体免疫磁颗粒，所述隐孢子虫阳性质控和贾第鞭毛虫阳性质控是由粒径为4-6μm的量子点标记聚苯乙烯荧光微球包被有隐孢子虫特异性表面蛋白和粒径为6-10μm的量子点标记聚苯乙烯荧光微球包被有贾第鞭毛虫特异性表面蛋白组成。本发明专利技术的隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒检测样品中的隐孢子虫和贾第鞭毛虫阳性质控成本低，保质期长，能够有效控制检测成本，促进“两虫”检测的开展。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测试剂盒，特别是涉及一种基于免疫磁分离技术的隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒。
技术介绍
污水再生利用是解决水资源短缺的有效途径，而预防病原性污染和保障水质安全是其重要前提。隐孢子虫是介水传播的寄生性原虫，主要导致人畜共患的隐孢子虫病。隐孢子虫病呈世界性分布，迄今已经有6大洲80多个国家至少300多个地区发现了隐孢子虫病，美国、英国、新西兰等发达国家以及中国、非洲等发展中国家都相继报道了隐孢子虫病的病例。1993年美国威斯康辛州密尔沃基市40.3万人因感染隐孢子虫而患病，经调查确认为市政供水系统被隐孢子虫污染所致。我国于1987年在南京市首次发现了隐孢子虫病例，随后在徐州、安徽、内蒙古、福建、山东和湖南等省市均报道发现病例。流行病学调查发现，青海、云南等地的发病率最高。美国国家环保总局(USEPA)于1999年2月制定并发布的1623方法是国际上最为常用的两虫(隐孢子虫和贾第鞭毛虫)标准检测方法，它包括浓缩、分离和鉴定三个步骤，即通过滤筒过滤、免疫磁性分离(IMS)和免疫荧光(IFA)显微镜检测和计数，并借助DAPI染色和微分干涉(DIC)显微镜检观察其内部的特征结构来证实卵囊和孢囊的存在。IMS是指用标记有与卵囊和孢囊表面抗原特异结合的抗体的磁珠与卵囊和孢囊相结合，形成的复合体被磁珠收集器吸附在样品管壁上，杂质随上清液被去除，从而实现与杂质的分离，是保证检测过程特异性的关键步骤。目前，在检测过程中作为阳性对照的质控主要为灭活的隐孢子虫，保质期短(3个月)，且成本较高。平均每个样品的检测费用在1500左右。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种成本低，保质期长的基于免疫磁分离技术的隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒。本专利技术的技术方案概述如下：一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒，包括隐孢子虫阳性质控和贾第鞭毛虫阳性质控、抗隐孢子虫多克隆抗体免疫磁颗粒和抗贾第鞭毛虫多克隆抗体免疫磁颗粒，所述隐孢子虫阳性质控和贾第鞭毛虫阳性质控是由粒径为4-6μm的量子点标记聚苯乙烯荧光微球包被有隐孢子虫特异性表面蛋白和粒径为6-10μm的量子点标记聚苯乙烯荧光微球包被有贾第鞭毛虫特异性表面蛋白组成。隐孢子虫特异性表面蛋白优选为Cowp，Cp41或Cdg6，所述Cowp的氨基酸序列是SEQID.NO.1所示；所述Cp41的氨基酸序列是SEQID.NO.3所示，所述Cdg6的氨基酸序列是SEQID.NO.2所示。贾第鞭毛虫特异性表面蛋白优选为VSP或G3，所述VSP的氨基酸序列是SEQID.NO.4所示，G3的氨基酸序列是SEQID.NO.5所示。本专利技术的优点：实验证明，本专利技术的隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒检测样品中的隐孢子虫和贾第鞭毛虫阳性质控成本低，保质期长，能够有效控制检测成本，促进“两虫”检测的开展。现有技术的“基于原虫卵囊的阳性质控”成本高，每支1500元，而本申请的用隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒进行检测，成本低，每个水样需150元。附图说明图1为实施例9的试剂盒捕获回的阳性质控。图2为实施例9的试剂盒捕获回的基于原虫卵囊的阳性质控。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，本专利技术的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本专利技术，但并不对本专利技术作任何限制。选择隐孢子虫和贾第鞭毛虫特异性表面蛋白，将其包被于与其对应大小(隐孢子虫4-6μm，贾第鞭毛虫6-10μm)量子点标记的聚苯乙烯微球，所制备出的微球表面“两虫”对应的特异性表面蛋白，可以作为具有“两虫”特异性功能的质控，替代“两虫”原虫作为阳性质控。制备出相应蛋白的多克隆抗体，进而制备出对应的抗“两虫”多克隆抗体免疫磁颗粒，即可进行检测。实施例1从NCBI数据库中分别检索隐孢子虫和贾第鞭毛虫特异性表面蛋白，并对获得的隐孢子虫和贾第鞭毛虫特异性表面蛋白的氨基酸序列通过blastp软件进行同源性比对，同源性比对相似性较高的作为实验的考虑对象。我们从隐孢子虫的表面蛋白中选取了同源性较高的三个蛋白，名称分别为Cowp(其氨基酸序列是SEQID.NO.1所示)，Cp41(其氨基酸序列是SEQID.NO.3所示)和Cdg6(其氨基酸序列是SEQID.NO.2所示)，贾第鞭毛虫表面蛋白中选取了同源性较高的两个蛋白，名称分别为VSP(其氨基酸序列是SEQID.NO.4所示)，G3(其氨基酸序列是SEQID.NO.5所示)。SEQID.NO.1：FTFSGKQCVQSDTAPPNPECPPGTVLENGTCKLIQQVDTICPPGFVEEGNRCVQYLPANKICPPGFNLSGQQCMAPESAELESTCPPNTILENGKCKVIKNVDMVCPPGYTDSGDECVLYVAPAKECPPNFTLQGSEQID.NO.2:EMDYSRIPISSEVICGLLNGMEYCICKCDELDILLERWNPFLLYKFEQEYLKNGAVLMDNNIGILVNNTMVGIGKRMNNTQSMEVTDTNIGNMSGIITSSPDSITVTNNLNGNNNSNSNTASIIDIKGGIGSGNFIPVGTSSSTSIGNSNGVTFTSIHSNNNNSNNSNNNNSNTTVTTVATNASEQID.NO.3:NFFFYDDSKKYEGGLLKKEGYDGCTVVGSDCLCWRCYFNQRPFFEEMDYSRIPISSEVICGLLNGMEYCICKCDELDILLERWNPFLLYKFEQEYLKNGAILMDNNTGILVNNTMVGIGKRMNTTQSMEVTDTNIGNMSGIITSSGDSTAVTNNLNGNNNSNSNIGSGNFIPVGTCSSTSIGNSNGVAFTAIHPNNNNSNNINNNNNNNSNTTLTTVATNANITTNTTNTTTTTTNNNNNNNNNNNSEQID.NO.4:MTCKASGIVDCTTCEYNPATGGPKCTACNGAKIVKEEADGTTTCIDAGTCTQSGATGENFLSDGDAECILCSNDSSKTDNNKGSPGCGTCSKNGAKPECKTCLDGYYDSGNGNPAVCVACAGDCGKCGPGGAIDTCEKCKPGFFLKNDGTKKCVPCDDPTDGVPGCATCTLSGSFTCDSCKVNYQKKVGAGGAVTCVKTCEDPTACGGTAGACDAMIIDDQGNTKHYCSYCGETNKIPIDGKCVDSGS本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒，其特征是包括隐孢子虫阳性质控和贾第鞭毛虫阳性质控、抗隐孢子虫多克隆抗体免疫磁颗粒和抗贾第鞭毛虫多克隆抗体免疫磁颗粒，所述隐孢子虫阳性质控和贾第鞭毛虫阳性质控是由粒径为4‑6μm的量子点标记聚苯乙烯荧光微球包被有隐孢子虫特异性表面蛋白和粒径为6‑10μm的量子点标记聚苯乙烯荧光微球包被有贾第鞭毛虫特异性表面蛋白组成。

【技术特征摘要】
1.一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒，其特征是包括隐孢子虫阳性质控和贾第鞭
毛虫阳性质控、抗隐孢子虫多克隆抗体免疫磁颗粒和抗贾第鞭毛虫多克隆抗体免疫磁颗粒，
所述隐孢子虫阳性质控和贾第鞭毛虫阳性质控是由粒径为4-6μm的量子点标记聚苯乙烯荧
光微球包被有隐孢子虫特异性表面蛋白和粒径为6-10μm的量子点标记聚苯乙烯荧光微球包
被有贾第鞭毛虫特异性表面蛋白组成。
2.根据权利要求1所述的一种隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测及质控试剂盒，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹静，杨忠委，王华然，李梅，宁保安，范献军，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12