本发明专利技术公开了一种杂交鹅掌楸LhRGL1基因及其应用，LhRGL1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术通过对杂交鹅掌楸LhRGL1基因的克隆与鉴定，基因的表达分析，验证其功能，发现转LhPIN1基因植株生长发育迟缓，植株矮化，分枝数目增多，可见该基因在植物育种中将有广泛的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物基因工程
，具体涉及一种杂交鹅掌楸LhRGLl基因及其应用。
技术介绍
杂交鹅掌楸是我国著名林木遗传育种家叶培忠教授利用分布在我国的中国鹳掌楸{Lir1dendron chinensis (Hems1.) Sarg.)和和分布在北美的北美鹳掌楸{Lir1dendron tulipifera Linn.)通过人工杂交获得的种间杂交种，其生长速度快，树姿优美，叶形奇特，抗性强，材质纹理细腻，是重要的园林绿化和工业用材树种。杂交鹅掌楸虽然有许多优越性，但杂交制种受到季节和效率的限制，影响了杂交鹅掌楸的推广应用，由于植物体细胞胚具有数量多，一旦形成体细胞胚就能够快速发育成再生植株的特点，以体细胞胚胎发生技术快速繁殖种子来源困难的杂交鹅掌楸，具有重要的理论意义和应用价值。体胚发生技术由于其两极性、繁殖速度快、效率高等特点，已经成为优良林木资源快速无性繁殖的重要手段，并且它能和生物反应器结合实现大规模商业化生产。到目前为止，已经成功利用杂交种体细胞建立了杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生技术和快速成苗体系，开辟了杂交鹅掌楸产业化开发的新途径。体细胞胚发生的本质是细胞分化的问题，而细胞分化的分子基础则是基因差异表达与调控的结果。所以研究这些相关基因可以使我们更好的了解体细胞发生技术的原理。利用基因工程技术，可以将杂交鹅掌楸生长过程中的相关基因分离出来，挖掘在生长发育过程中发挥重要基因的功能，从而可以更加直接的进行品种改良。研究表明，激素类物质在杂交鹅掌楸的生长中发挥重要作用，包括生长素(Auxin)、细胞分裂素(cytokinin, CTK)、赤霉素(GA)、乙稀(Ethylene, ΕΤΗ)和脱落酸(Abscisic acid, ΑΒΑ)等。其中赤霉素GA类对伸长生长有重要作用，可以明显促进细胞的伸长。DELLA蛋白是一类N端含有17个氨基酸序列，其中前5个氨基酸的缩写为DELLA(Asp-Glu-Leu-Leu-Ala)的蛋白质，在GA信号转导中起到负调控的作用。DELLA作为GA信号转导途径中的关键基因，反馈调节其上游GA生物合成的相关基因，同时控制GA通路中的下游基因。在拟南芥中有5个编码DELLA蛋白的基因，苹果里中有6个，豌豆中有2个，大麦、水稻、玉米和小麦中各有I个，它们的功能既具有保守性，也具有物种内的功能特异性。然而，由于木本植物的研究起步晚，进展慢，杂交鹅掌楸基因组中所编码的DELLA蛋白的基因数目还不清楚，其结构和功能都未知。杂交鹅掌楸的生长发育必然受到受GA的调节，因此研究杂交鹅掌楸的DELLA蛋白基因具有重要意义。
技术实现思路
专利技术目的:针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供一种杂交鹅掌楸LhRGLl基因。本专利技术的另一目的是提供杂交鹅掌楸基因在杂种鹅掌楸育种中的应用。技术方案:为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下: 一种杂交鹅掌楸基因，其核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。所述的杂交鹅掌楸基因的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。所述的杂交鹅掌楸基因在杂交鹅掌楸育种中的应用。含有所述的杂交鹅掌楸基因的载体。含有所述的杂交鹅掌楸ZAWfi^基因的宿主细胞。有益效应:与现有技术相比，本专利技术通过对杂交鹅掌楸^基因的克隆与鉴定，基因的表达分析，验证其功能，发现转基因植株生长发育迟缓，植株矮化，分枝数目增多，可见该基因在植物育种中将有广泛的用途。【附图说明】图1是杂交鹅掌楸的基因的过表达载体图； 图2是LhRGLI基因酶切结果图，其中，M:DL2000 Marker ；1为LhRGLl与pMD19_TSimple连接后用用BamHI和SacI双酶切； 图3是阳性重组子的筛选图，al为目的引物PCR结果，条带大小为1610 bp, a2为35S引物PCR结果，条带大小为612 bp; 图4是转基因阳性植株筛选结果图； 图5是转基因拟南芥植株PCR结果图，图a，目的引物PCR结果；图b，35S引物PCR结果；M:DL2000 Marker ；CK+:以载体质粒DNA为阳性对照；CK:野生型DNA为阴性对照；水:空白对照； 图6是转LhRGLl T2代植株与野生型拟南芥植株开花时间比较图，图中WT，野生型拟南芥；1-4，转LhRGLl基因T2代的不同株系；测量12次，误差线表示12个重复的标准误差；**表示差异极显著，*表示差异显著； 图7是转LhRGLl基因的T2代与野生型COL拟南芥图；图中I，2为转LhRGLl驗I 40天的T2代拟南芥植株，col为野生型拟南芥； 图8是转基因与野生型拟南芥，图中，LhRGLl为转基因T2代植株，col为野生型拟南芥； 图9是转^基因植株与野生型植株分枝数目比较图，**表示差异极显著。【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明。实施例1 本实施例所采用的材料是南京林业大学校园内杂交鹅掌楸叶片，采后速冻于液氮中，超低温冰箱(-80°C)保存。I)杂交鹅掌楸叶片总RNA的提取 按照NORGEN植物总RNA提取试剂盒的说明书进行，具体操作为:在处理过的研钵中加入适量的材料及液氮，充分研磨后，加入600 yL LysisSolut1n ;将研钵中裂解后的液体转移至新的离心管中；盖紧管盖后，颠倒混匀数次，在室温下静置2 min，使其裂解充分，12000 rpm离心2 min将上清转移至新的离心管中；加入等体积的70%的乙醇，涡旋混匀；将混合液移至试剂盒内提供的柱子中(下接2mL的收集管)，12000 rpm离心lmin，弃滤液，将柱子放回收集管上；加入400 μ L的Wash Solut1n，12000 rpm离心lmin，弃滤液，将柱子放回收集管上；向柱子上加入100 μ I的DNase I工作液，14000 rpm离心lmin，将滤液吸回柱子，在23-30°C的水浴锅或加热器上静置15min ;再一次加入400 μ L Wash Solut1n，14000 rpm离心I min，弃滤液；重复步骤(8);将离心柱放回收集管，14000 rpm离心2 min,弃收集管；将离心柱放入1.5mL的离心管中，加入50 μ L的Elut1n Solut1n。200-2000rpm离心2 min, 14000 rpm离心I min ;所得的RNA样品，检测其完整性和纯度后，置于_80°C超低温冰箱保存备用。吸取2PL RNA在1%琼脂糖凝胶电泳上进行检测，结果显示28S和18S条带较为清晰。28S条带亮度约为18S的两倍，RNA质量较好。用Nonodrop 2000检测RNA纯度，OD26q/OD28。为2.03，OD 26Q/0D23。为2.01，完整性较好，可用于反转录。2)第一链cDNA的合成 以所得到的杂交鹅掌楸叶片的总RNA为模板，使用TaKaRa反转录试剂盒进行反转录，使用Oligo(dT)作为销定引物，反转录合成第一链cDNA。具体操作如下: 在离心管中配制按照下列模板RNA/引物的顺序配制混合物，总量为6 μ L:模板2 μ L，Oligo(dT) 12-18 Primer (50 μ Μ) 3 μ L, RNase-free ddH20 lyL。在 PCR本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种杂交鹅掌楸LhRGL1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈金慧，王鹏凯，闫姗，施季森，董艺妮，盛宇，郑晨，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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