【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及dsrcorco在黑胸散白蚁抗病原菌侵染中的应用。
技术介绍
1、昆虫利用嗅觉系统识别环境中的各种气味从而寻找食物，找寻配偶，躲避天敌(nehring&steiger 2018)1，在气味传导的过程中，气味信号主要由嗅觉神经元(osns)检测经过处理传输给神经系统(zhang et al.2021)2。嗅觉受体(ors)在神经传导中起着重要的作用，其可分为两个亚类，分别是传统的气味特异性嗅觉受体(or)和嗅觉受体共受体orco(harini et al.2012)3，嗅觉受体(ors)将化学刺激转化为电信号(leal et al.2013)4，因此在气味识别过程中发挥重要作用，orco和传统的嗅觉受体or形成orco-or异四聚体，构成配体门控离子通道(butterwick et al.2018)5，orco在昆虫物种中高度保守并且发挥着不可或缺的作用，研究表明，在在缺少orco的情况，or无法单独发挥作用，orco的缺失会使嗅觉明显受损，表现出丧失嗅觉的行为，例如，orco的中断可能会引起嗅觉敏感度的降低，对昆虫的行为和电生理造成影响(gao et al.2020；yi et al 2014)6，蚊子，夜蛾的orco突变会导致其无法准确寻找寄主以及对性信息素和刺激性挥发物等气味反应受损(sun et al2020；koutroumpa et al 2016)7-8，沉默orco的德国小蠊对食物的气味反应缓慢(he etal.2020)9。相较于独居昆虫，社会性昆虫的生存更依赖嗅觉系统，orc
2、rnai技术是一种已被广泛用于研究基因功能的研究工具，同时它也在发展新的害虫管理策略方面展现出巨大的潜力(zhu et al.2019)12，rnai是由双链rna(dsrna)在转录后水平上诱导的序列特异性基因沉默现象，自发现rnai以来，rnai已被应用在研究各种不同种类的昆虫当中，其中包括鳞翅目，鞘翅目，双翅目等等，通过rnai技术合成dsrna喂食或注射白蚁来研究白蚁基因的功能是可行的(zhou et al.2006,korb et al.2009，zhou etal.2008)13-15。同时，dsrna也被认为会成为新一代的rna生物农药，利用sl 102dsrna饲喂spodoptera littoralis幼虫可以增强bt的毒性(caccia et al 2020)16。使用特定的dsrna喂食北美散白蚁，沉默白蚁的termicin和gnbp基因将会降低白蚁面对病原菌的存活率(hamilton 2011)17。研究发现沉默β-1,3-glucan binding protein可以有效提高plutellaxylostella对昆虫病原真菌的敏感性，提高病原菌的毒力(li et al.2022)。在这些rnai的研究中，使用的dsrna或sirna通过体外合成制备，或使用工程细菌法，构建表达dsrna的细菌，然后使用trizol或苯酚等化学试剂提取细菌中表达的dsrna(saksmerprome et al.,2009)18。这些方法成本昂贵或耗时过长，不利于大规模应用生产dsrna。
3、单独使用病原菌对白蚁进行生物防治，存在一定的局限性,很难达到理想结果(yanagawa et al.2008)19。rnai具有特异性抑制基因表达的能力,在害虫控制方面具有巨大的潜力(huvenne et al.2010)20。将rnai与昆虫病原菌联用是生物防治的重要方向。白蚁的免疫能力使得它们可以抵抗大多数病原菌的侵染,通过rnai技术降低白蚁的免疫能力并搭配昆虫病原菌的使用可以有效进行生物防治。研究表明，使用rnai沉默黑翅土白蚁的termicin基因可以显著提高sm1的杀虫效果。orco基因在过去的研究中已被发现其在寻找寄主、觅食、求偶、交配、识别信息素等行为中发挥功能yan et al.201710,yi et al.201421,franco et al.201622)，但是白蚁作为社会性昆虫，具有很强的社会免疫能力，嗅觉在社会免疫过程中发挥重要作用。
4、黑胸散白蚁是一种严重危害森林，建筑的害虫，在中国广泛分布，每年造成巨大的经济损失(huang 2013)23。沉默黑胸散白蚁的orco会削弱其感知信息素的能力，并影响其运动能力(gao 2020)6，然而沉默黑胸散白蚁的orco是否影响其抗病原菌侵染，还未有报道。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本研究预利用超声波建立灭菌dsrna-ht115，产生大量可以直接应用的dsrcorco，此外，利用该体系产生的dsrcorco，研究其在黑胸散白蚁抗病原菌侵染中是否发挥重要功能。
2、具体地，本专利技术公开了一种黑胸散白蚁dsrcorco，所述黑胸散白蚁dsrcorco由seqid no：1的核苷酸序列转录而成。
3、进一步地，编码所述黑胸散白蚁dsrcorco的dna也在本专利技术的保护范围之内，所述模板dna的核苷酸序列如seq id no：1所示。
4、本专利技术进一步提出了一种重组表达载体，所述表达载体所述的dna。
5、更进一步地，本专利技术提出了一种宿主菌，其转化上述重组表达载体。
6、作为一种优选的实施方式，本申请提出了一种基因工程菌dsrna-ht115，其通过将所述的黑胸散白蚁dsrcorco与l4440连接，进一步转化至ht115(de3)菌株中得到。
7、本专利技术进一步提出了上述黑胸散白蚁dsrcorco、重组表达载体、权利要求4所述的宿主菌、基因工程菌dsrna-ht115在黑胸散白蚁抗病原菌侵染中的应用。
8、本专利技术还提出了一种防治黑胸散白蚁的方法，用上述超声灭活的宿主菌或基因工程菌dsrna-ht115生产的dsrcorco对白蚁进行饲喂。
9、其中，在饲喂dsrcorco后，进一步联合使用sm1、bt和bb中的至少一种对黑胸散白蚁进行处理。在一种实施方式中，处理方法为将sm1、bt和bb中的至少一种浸泡所述黑胸散白蚁的前胸背板上。
10、有益效果：该申请根据黑胸散白蚁第三代转录组中rcorco序列，构建dsrna-ht115工程菌株，成功表达了dsrcorco。在此基础上，利用超声波灭活dsrna-ht115菌株获得黑胸散白蚁dsrc本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种黑胸散白蚁dsRcOrco，其特征在于，所述黑胸散白蚁dsRcOrco由SEQ ID NO：1的核苷酸序列转录而成。
2.一种编码所述黑胸散白蚁dsRcOrco的DNA，其特征在于，所述模板DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求2所述的DNA。
4.一种宿主菌，其特征在于，其转化权利要求3所述的重组表达载体。
5.一种基因工程菌dsRNA-HT115，其特征在于，其通过将权利要求1所述的黑胸散白蚁dsRcOrco与L4440连接，进一步转化至HT115（DE3）菌株中得到。
6.权利要求1所述的黑胸散白蚁dsRcOrco、权利要求3所述的重组表达载体、权利要求4所述的宿主菌、权利要求5所述的基因工程菌dsRNA-HT115在黑胸散白蚁抗病原菌侵染中的应用。
7.一种防治黑胸散白蚁的方法，其特征在于，用超声灭活的权利要求4所述的宿主菌或权利要求5所述的基因工程菌dsRNA-HT115生产的dsRcOrco对白蚁进行饲喂。
8.根据权利
...【技术特征摘要】
1.一种黑胸散白蚁dsrcorco，其特征在于，所述黑胸散白蚁dsrcorco由seq id no：1的核苷酸序列转录而成。
2.一种编码所述黑胸散白蚁dsrcorco的dna，其特征在于，所述模板dna的核苷酸序列如seq id no：1所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求2所述的dna。
4.一种宿主菌，其特征在于，其转化权利要求3所述的重组表达载体。
5.一种基因工程菌dsrna-ht115，其特征在于，其通过将权利要求1所述的黑胸散白蚁dsrcorco与l4440连接，进一步转化...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。