本发明专利技术涉及来自烟草的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白NtPGIP基因，属分子生物学应用技术领域，其特征在于烟草品种为小黄金，采用CTAB法提取其基因组DNA；按照Trizol试剂说明书提取其总RNA，利用M-MLV反转录酶合成cDNA；根据GenBank已报道植物的PGIPs基因设计简并引物，PCR扩增获得NtPGIP基因片段；然后采用3’RACE和5’RACE技术获得NtPGIP全长基因。本发明专利技术采用分子生物学方法，分离鉴定了烟草的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白NtPGIP基因；构建了烟草NtPGIP基因原核表达载体，并纯化了其表达蛋白；烟草NtPGIP基因表达蛋白能有效抑制病原菌分泌的PGs活性，抑制病菌的侵染，提高植物的抗病性，可应用于植物抗病品种的培育。
【技术实现步骤摘要】
:本专利技术涉及来自烟草的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白NtPGIP基因，属分子生物学应用
技术介绍
:烟草是我国重要的经济作物，在生长过程中易受到病虫害的侵染，病害的发生严重影响了烟草的产量和质量。近年来，烟草黑胫病的发生愈加严重，危害程度仅次于烟草病毒病，是烟草生产上最具毁灭性的病害之一。烟草疫霉(Phytophthoraparasitica var.nicotianae)是引起烟草黑胚病的病原菌，其在侵染烟草时，首先分泌多聚半乳糖酸酸酶(Polygalacturonases, PGs),降解烟草的细胞壁，引起病害；烟草在受到病原物的侵染后，启动自身的防御系统，抵抗侵染；其中，多聚半乳糖酸酸酶抑制蛋白(Polygalacturonase-1nhibiting Proteins, PGIPs)能够特异性与PGs结合，降低其水解活性，提高植物的抗病性。PGIPs最初在1971年由Albersheim等在菜豆下胚轴、番爺莖和桐叶槭悬浮培养细胞中发现，随后在苹果、豌豆、黄瓜、小麦、马哈利樱桃、棉花、桃等植物上分离到了能够抑制PGs活性的PGIPs。研究发现，PGIPs可以特异性抑制病原真菌和昆虫分泌的PGs，可引起高浓度长链寡聚半乳糖酸酸(oligogalacturonides, OGs)的积累，激活寄主的防御系统,调控基因的表达，有效地阻断病菌侵染和抑制相应病程的发生与发展，增强寄主的抗病性。研究表明，PGIPs蛋白的一级结构具有LRRs结构域，存在不同程度的糖基化，并在N端和C端存在4个高度保守的半胱氨酸残基。PGIPs的含量和分布，在时间、空间、品种和组织细胞中存在较大差异，并受到病原物、昆虫、机械损伤及水杨酸等因子的影响。数据表明，PGIPs由复杂的多基因家族组成，且PGIPs家族的不同成员具有几乎相同的生化性质，但与不同真菌的PGs相互作用的能力不同。随后研究发现将外源PGIPs基因整合到植物基因组中，可提高植物的抗病性。目前，PGIPs基因作为抵抗真菌病害的有效抗病基因，受到了国内外学者的青睐。将PGIPs基因转入目的植物，增强植物的抗病性，抑制病害的发生，减少农药的使用，已成为世界各国亟待解决的问题。
技术实现思路
:为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种来自烟草的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白NtPGIP基因，并诱导其表达提高植物的抗病性。 本专利技术是通过如下技术方案来实现上述目的的。1、烟草多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白NtPGIP基因的克隆烟草NtPGIP基因的克隆过程为:烟草品种为小黄金，采用CTAB法提取其基因组DNA ;按照Trizol试剂说明书提取其总RNA，利用M-MLV反转录酶合成cDNA ;根据GenBank已报道植物的PGIPs基因设计简并引物，PCR扩增获得NtPGIP基因片段；然后采用3’ RACE和5’ RACE技术获得NtPGIP全长基因。对所克隆的NtPGIP基因进彳丁 DNA测序，其DNA序列如下:序列表SEQ ID NO:1〈110〉长江大学〈120〉来自烟草的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白NtPGIP基因〈130〉2014〈160〉14〈170〉PatentIn vers1n 3.3〈210〉I〈211〉1412〈212〉DNA〈213〉 Nicotiana tabacum〈400〉Iccattaatag aagtattgaa tttgcttcta agttccctga tattatcacc aataagaccc60agcttcaaca attcctagga agcttaaatt atatttctccctttataaag gatttagcca 120aagatacttc tcttctttat gatggattga agaagaatccgaaagcttgg actgatagtc 180atacaaatgc ttcataaaat gaaaacctct gtagtttcccttctttattt ttcgttcttc 240ttcctttctc aattctccac atctctctct gaaagatgca atccaaatga caaaaaagcc 300ctcctagaaa tcaagaaagg cctaggcaat ccctatgacttgatcacatg ggatccaaaa 360accgattgtt gtactgattg ggttgaagcc actctctcatgtgatgacaa aaacaatcgt 420gttacttcct taaacctctt taaaattgaa gacgttggctacctctcgcc cgcgttcgga 480gacttgccgt atctccaaag tttggacatc aataatgtgcgcaatctctc aggtccaatt 540ccgcccacaa ttgccaaact ctcaaagctc acattcttga gaattagtca aacaaacatt 600tcaggaccag tccctggatt tcttagtaag ttgaaaaaactaacatacat caacttgtca 660tacaataaac tcgttggtac tatccctcct ccactttctcagctgtcaaa tctcgagttc 720cttggtttag acaggaacaa acttactgga ccaatcccag aatccttcgg taactttgct 780ggaaaactca cgtatcttta ccttggccac aaccaattaa ccgggtctgt gcctaaatct 840tttggtggtt ggagtcttga gacaattgac ttgtctggaa acatgcttga aggagatatt 900tctttcttgt ttggcaaaga taagacaaca tttcaaatgcttttagatca taataagttt 960gcattcgact tctcgaaggc aaagtttggg aaaagattatggaggttgga cttgaaccat 1020aataaaattt atgggaatct tccagcagct ataacgaaacaaccatggca gcttttcaac 1080gtgagttata acaggctttg tgggaagatt ccacaaggtg gggaaataaa gaattatgat 1140atttatgttt atctccacaa caaatgcttg tgtgactctccgttgccacc ttgtaaatcg 1200tgatgatttg ctgtcatttc tttgagaaat aagagtggatagtctactcc gtgtttttgt 1260ggtcctaaat ctatttatgt atttgaacct ttctctttgtatgtcaatag gccagcaaac 1320ttaagatgag gctgcctaat aagtcaagat gtgatttaag aatgacaaag ctcattgtgt 1380烟草NtPGIP基因cDNA全长1412 bp，包含一个长186本文档来自技高网...
【技术保护点】
来自烟草的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白NtPGIP基因，其特征在于NtPGIP基因的DNA序列，如序列表SEQ ID NO:1所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙文秀，李伟，张成省，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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