一种1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物及其在药学中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物，属正交晶系，其空间群为Pbcn，分子式为C20H12Ag2N4，Ag2与两个苯并咪唑上的两个N原子线型协调配位。本发明专利技术还公开了所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物在制药中的应用。本发明专利技术所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物具有抑制人肝癌细胞Hep-G2生长的作用，能够通过增加Bax的表达和抑制Bcl-2的表达共同作用而诱导Hep-G2细胞凋亡，阻滞人肝癌细胞Hep-G2在G2期，并以非经典插入方式作用于与DNA发生作用。

【技术实现步骤摘要】
一种1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物及其在药学中的应用
本专利技术涉及一种1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物及其在药学中的应用。
技术介绍
由于铂类药物严重的副作用，使得其在临床上的运用受到了一定的限制，为寻找副作用小，抗癌效果显著的金属配合物成为目前需要解决的难题。银(I)很早就被医学界所应用，表现出很好的杀菌消毒作用。由于高效和低毒性，银(I)配合物的抗癌应用已成为人们关注的新兴研究领域。含配体膦类，羧酸类，香豆素类和邻菲罗啉衍生物的银配合物对多重耐药的人卵巢癌细胞(SKVO3)、人肺癌细胞(A549)抑制效果明显，而且它们的IC50值大多都比顺铂低。通过合成含双苯并咪唑的Ag(I)配合物，希望可以寻找出低毒、抗癌活性高、抗癌谱广的金属配合物，用以代替铂类药物的抗癌治疗。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物及其应用，获得1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物的体外抗人肝癌细胞Hep-G2的结果。本专利技术解决上述技术问题所采取的技术方案是：一种1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物，其晶体结构为，所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物在制药中的应用。所述的制药中的应用，包括制备抑制人肿瘤细胞Hep-G2生长的药物中的应用。所述的抑制人肿瘤细胞Hep-G2生长的药物，其抑制有效浓度为20～500μmol/L。本专利技术所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物具有抑制人肝癌细胞Hep-G2生长的作用，能够通过增加Bax的表达和抑制Bcl-2的表达共同作用而诱导Hep-G2细胞凋亡，阻滞人肝癌细胞Hep-G2在G2期，并以非经典插入方式作用于与DNA发生作用。附图说明图1为本专利技术所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物对Hep-G2细胞的抑制作用，顺铂作为参照(n＝4)。图2为本专利技术所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物作用于Hep-G2细胞48h后的流式凋亡图。图3为本专利技术所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物作用于Hep-G2细胞48h后的流式凋亡率。图4为本专利技术所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物作用于Hep-G2细胞的周期分布。图5为本专利技术所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物作用于Hep-G2细胞的周期分布率。图6为本专利技术所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物作用于Hep-G2细胞48h后Bax、Bcl-2的蛋白表达。图7为本专利技术所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物与DNA相互作用的的紫外-可见谱图。图8为本专利技术所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物的红外光谱图。具体实施方式下面结合附图具体实施例对本专利技术的技术方案做进一步说明。1.1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物[C20H12Ag2N4]的制备1,3-双苯并咪唑苯0.0312g(0.1mmol)和AgNO30.0250g(0.15mmol)加入氨水15mL搅拌30s后，放入容积为23mL的高压反应釜中，140℃下反应80h，反应结束时，以3℃/h的速率梯度降至室温，过滤，去离子水洗涤，得到白色条状晶体。2.红外光谱检测配合物用KBr压片在4000-400cm-1范围测定红外图谱，如图8所示。3.晶体结构测定将尺度合适的、表面无裂痕且光滑的晶体在AgilentG8910ACCD衍射仪上测定。在温度293(2)K下，衍射光源是通过石墨单色器单色化的Mo-Kα射线采用扫描模式进行扫描，衍射数据用Lp因子及其经验吸收进行校正。晶体结构由SHELXL–97程序解析。表11,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物的晶体参数和结构精修(T＝293(2))4.1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物[C20H12Ag2N4]的晶体结构及分析1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物属正交晶系，其空间群为Pbcn，分子式为C20H12Ag2N4。Ag2与两个苯并咪唑上的两个N原子线型协调配位。如上述的晶体结构所示，Ag2与两个N原子连接的键长Ag2-N2、Ag2-N2A分别为2.102(6)和它们的键长相等并且在一条直线上，其键角N2-Ag2-N2A为180°。表2列出了它的键长和键角。表21,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物的键长和键角(°)5.采用MTT法检测细胞存活率药物分组：设置五个浓度梯度，它们的终浓度依次为500μmol/L、100μmol/L、20μmol/L、4μmol/L、0.8μmol/L；阳性对照组：顺铂，设五个浓度梯度，终浓度依次为500μmol/L、100μmol/L、20μmol/L、4μmol/L、0.8μmol/L；空白对照组：不加药物，只含细胞的1640完全培养基；无细胞对照组：只含1640完全培养基(不加药物和细胞)。操作方法：选对数生长期的细胞，先用PBS磷酸盐缓冲液冲洗两遍，再用适量含EDTA的0.25％胰蛋白酶消化1～1.5min，使贴壁细胞变为单个细胞悬浮液，细胞计数板进行计数。调整细胞的浓度为5×104个/mL接种到96孔板中，每孔加入的体积为100μL。放入含5％CO2的37℃恒温培养箱中培养24h后，每个孔内加入100μL不同浓度梯度的测试药物。每个测试样品的浓度梯度设4个复孔平行试验，每个测试药物重复3次实验。加完药后放入培养箱中培养48h，取出加入MTT测试液(PBS配制为5mg/mL)，每孔20μL，继续孵育4h后，将其上清小心去掉并向每个孔内加入DMSO150μL，振荡96孔板让结晶充分溶解，在酶联免疫检测仪上选取570nm波长测定每孔的OD值。通过对细胞抑制率的计算，作图求出半数细胞抑制浓度(IC50)。细胞抑制率计算结果如表3所示，其柱状示意图如图1所示。表31,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物对Hep-G2细胞的抑制作用(n＝4)6.流式检测细胞凋亡选对数生长期的细胞，计数细胞密度为2×105个/mL接种到6孔板中，每孔加入2mL。放入含5％CO2的37℃恒温培养箱中培养24h后，更换等体积含药的完全培养基。给药48h后，用不含EDTA的0.25％胰蛋白酶收集六孔板的细胞，800r/min离心5min，弃掉培养液，预冷的PBS洗两遍，500μL的BindingBuffer加入到PBS洗好的细胞中重浮细胞，加5μLAnnenxinV-FITC与细胞混匀反应5min后再加入5μLPI，混匀在室温下避光反应15min。转移至流式管中，在流式细胞仪上检测。7.流式检测细胞周期选对数生长期的细胞，计数细胞密度为5×105个/mL接种到6孔板中，每孔加入2mL。放入含5％CO2的37℃恒温培养箱中培养24h后，更换等体积含药的完全培养基。给药48h后，用含EDTA的0.25％胰蛋白酶收集六孔板的细胞，800r/min离心5min，弃上清液，室温的PBS洗两遍，缓慢地加入预冷的70％乙醇在-20℃固定24h后，离心沉淀细胞弃乙醇固定液，加入室温PBS，使细胞静置水合15min，离心去上清。加入RNaseA到细胞悬液中在水浴37℃孵育30min后，加入PI进行染色，室温下避光反应30min，在流式细胞仪上检测细胞周期的变化。图2为1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物作用于Hep-G2细胞48h后的流式凋亡图。表41,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物作用于Hep-G2细胞48h后的流式本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种1,3‑双苯并咪唑苯银(I)配合物，其晶体结构为：

【技术特征摘要】
1.一种1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物，其晶体结构为：所述的1,3-双苯并咪唑苯银(I)配合物为正交晶系，其空间群为Pbcn，分子式为C20H12Ag2N4；Ag2与两个苯并咪唑上的两个N原子线型协调配位。2.权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪华，蒙法艳，林娟娟，周锐，黄燕军，韦毅铭，吴妮妮，杨艳芳，王警，邓诗发，邓敏，罗晶，李洁钘，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：广西;45