核酸扩增方法技术

本发明专利技术提供能够在一个容器中高效地进行多个核酸扩增反应的新型核酸扩增方法。该方法包括如下工序：在含有硅油的一个容器中制备含有第1反应试剂的第1液滴的工序，在上述容器中制备含有第2反应试剂的第2液滴的工序和将上述容器安装在核酸扩增反应装置，边独立地保持上述第1液滴和上述第2液滴边在上述容器中进行核酸扩增反应的工序，其中，上述硅油中添加了氟改性有机硅树脂，上述第1反应试剂用于扩增第1核酸，上述第2反应试剂用于扩增第2核酸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
近年来，由于基因的利用技术的发展，基因诊断、基因治疗等利用基因的医疗备受 注目。除此之外在农业和畜牧业领域也开发有很多利用基团鉴别品种、改良品种的方法。作 为利用基因的技术，PCR(Polymerase Chain Reaction:聚合酶链式反应）法等核酸扩增方 法得到了广泛普及。如今，PCR法在生物体物质的信息解析中已经成为必不可少的技术。 PCR法是通过对含有作为扩增对象的靶核酸和试剂的反应液实施热循环以扩增靶 核酸的方法。热循环是周期性地对反应液实施2个梯度以上的温度的处理。PCR法中，普遍 的是实施2个梯度或3个梯度的热循环。 近年来，有效开发了用流感病毒DNA等同时扩增两种靶DNA的方法（参照非专利 文献1)。这种情况下，在一个管中扩增两种靶DNA，所以通常向装在该管中的一个溶液内加 入两种靶DNA和两种引物等PCR用试剂而进行反应。 非专利文献 I :0zdemir M, Yavru S, Baysal B. "Comparison of the detection of influenza A and B viruses by different methods?,J Int Med Res. 2012 ；40 (6) : 2401-8.
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供能够在一个容器中高效地进行多个核酸扩增反应的新型 。 本专利技术的一个实施方式是在一个容器中进行多个核酸扩增反应的方法，该方法包 括在含有硅油的一个容器中制备含有第1反应试剂的第1液滴的工序，在上述容器中制备 含有第2反应试剂的第2液滴的工序，和将上述容器安装在核酸扩增反应装置，边独立地保 持上述第1液滴和上述第2液滴，边在上述容器中进行核酸扩增反应的工序，其中，上述硅 油中添加了氟改性有机硅树脂，上述第1反应试剂用于扩增第1核酸，上述第2反应试剂用 于扩增第2核酸。第1液滴和第2液滴可以含有相同种类的核酸检体，也可以含有不同种 类的核酸检体。上述氟改性有机硅树脂可以是XS66 - C1191。另外，上述第1液滴可以含 有第1荧光色素，上述第2液滴可以含有与上述第1荧光色素不同的第2荧光色素。另外， 上述氟改性有机硅树脂的添加量可以为1质量％~50质量％。 本专利技术的另一个实施方式是用于进行多个核酸扩增反应的核酸扩增反应用容器， 该容器含有添加了上述氟改性有机硅树脂的硅油、含有用于扩增第1核酸的反应试剂的第 1液滴和含有用于扩增第2核酸的反应试剂的第2液滴。上述氟改性有机硅树脂可以是 XS66 - C1191。另外，上述第1液滴可以含有第1荧光色素，上述第2液滴可以含有与上 述第1荧光色素不同的第2荧光色素。另外，上述氟改性有机硅树脂的添加量可以为1质 量％~50质量％。 本专利技术的另一个实施方式是安装有上述任一个容器的核酸扩增装置。 根据本专利技术，可提供能够在一个容器中高效地进行多个核酸扩增反应的新型核酸 扩增方法。【附图说明】 图1是表示本专利技术的一个实施方式涉及的升降式PCR装置的立体图。图I(A)表 示关闭盖的状态，图I (B)表示打开盖的状态。 图2是本专利技术的一个实施方式涉及的升降式PCR装置中的主体的分解立体图。 图3是本专利技术的一个实施方式涉及的管的截面图。 图4是示意性地表示本专利技术的一个实施方式涉及的升降式PCR装置中的主体的图 1㈧的A -A线的截面的截面图。图4㈧表示第1配置，图4(B)表示第2配置。 图5是表不在本专利技术的一个实施例中分析XS66 - C1191的添加量与液滴形成的 样子的关系而得的结果的图。 图6是表示在本专利技术的一个实施例中在2个液滴中进行多重PCR而得的结果的 图。 图7是表示在本专利技术的一个实施例中在1个液滴中进行多重PCR而得的结果的 图。【具体实施方式】 根据本说明书的记载，对于本领域技术人员而言本专利技术的目的、特征、优点及其构 思是清楚的，根据本说明书的记载，本领域技术人员能够容易地再现本专利技术。以下记载的发 明的实施方式及具体实施例等表示本专利技术的优选的实施方式，是为了例示或者说明而表示 的，但本专利技术并不限定于此。在本说明书中公开的本专利技术的意图和范围内，基于本说明书的 记载能够进行各种改变和修饰，这对于本领域技术人员而言是清楚的。 实施方式和实施例在没有特殊说明的情况下，采用J. Sambrook, E. F. Fritsch&T. Maniatis (Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual(3rd edition), Cold Spring Harbor PressjCold Spring Harbor1New York (2001) ；F. M. Ausubel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J. G. Seidman, J. A. Smith, K. Struhl (Ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley&Sons Ltd.等的标准的规定中记载的方法或者对其进行 修饰或改变而得的方法。另外，使用市售的试剂盒、测定装置时，在没有特殊说明的情况下， 使用其中附带的说明书。 (1)进行核酸扩增反应的方法 本专利技术涉及的方法包括在含有硅油的一个容器中制备含有第1反应试剂的第1液 滴的工序、在上述容器中制备含有第2反应试剂的第2液滴的工序和将上述容器安装在核 酸扩增反应装置，边独立地保持上述第1液滴和上述第2液滴边在上述容器中进行核酸扩 增反应的工序，其中，上述硅油中添加了氟改性有机硅树脂，上述第1反应试剂用于扩增第 1核酸，上述第2反应试剂用于扩增第2核酸。根据该方法，能够在一个容器中进行多个核 酸扩增反应。应予说明，该方法中，只要使用用于扩增核酸的反应试剂进行核酸扩增反应即 可，不需要在反应后扩增核酸。 氟改性有机硅树脂的浓度没有特别限定，但优选为1质量％~50质量％，更优选 为1质量％~20质量％，进一步优选为1质量％~5质量％。氟改性有机硅树脂的种类没 有特别限定，但优选为XS66 - Cl 191 (Momentive公司）。硅油的种类没有特别限定，可例 示二甲基硅油、甲基含氢硅油、甲基苯基硅油、甲基氢硅油、环状二甲基硅油等。核酸扩增方 法没有特别限定，只要是本领域技术人员通常使用的方法即可，但优选升降式PCR装置（例 如，参照日本特开2012 - 115208)。液滴通过各自含有具有不同的释放波长的荧光色素，即 便同时测定释放的荧光，也能够区别各核酸，能够进行所谓的多重PCR等。 在此，各反应试剂能够扩增的第1核酸和第2核酸可以相同也可以不同。第1核酸 和第2核酸为相同种类的核酸且第1反应试剂和第2反应试剂为相同的反应试剂时，例如， 通过向两个液滴中加入含有该核酸的检体进行扩增反应，能够得到比1个液滴反应时更多 量的反应产物。第1核酸和第2核酸为相同种类的核酸但第1反应试剂和第2反应试剂不 同时，例如，通过向两个液滴中加入含有该核酸的检体进行扩增反应，能够分析出何种反应 试剂能够更高效地对该核酸进行扩增等。由此，例如，可以针对相同的基因制备序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在一个容器中进行多个核酸扩增反应的方法，包括如下工序：在含有硅油的一个容器中制备含有第1反应试剂的第1液滴的工序，其中，所述硅油中添加了氟改性有机硅树脂，所述第1反应试剂用于扩增第1核酸，在所述容器中制备含有第2反应试剂的第2液滴的工序，其中，所述第2反应试剂用于扩增第2核酸，以及将所述容器安装在核酸扩增反应装置，边独立地保持所述第1液滴和所述第2液滴边在所述容器中进行核酸扩增反应的工序。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：上原雅行，
申请(专利权)人：精工爱普生株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP