本发明专利技术公开了解淀粉芽孢杆菌及其在发酵产谷氨酰胺酶中的应用。该解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22于2013年11月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.8425。本发明专利技术筛选了淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22产谷氨酰胺酶的原料，其培养、发酵条件简单，遗传性质稳定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及深海中微生物筛选及发酵领域，具体涉及解淀粉芽孢杆菌 )SWJS22及其在发酵产谷氨酰胺酶中的应用。
技术介绍
解淀粉芽孢杆菌是一种好氧型产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌。该菌在自然界分布 广泛，在植物体内，土壤，深海泥中均有分布。该菌易分离培养，代谢产物较为丰富，具有较 强的胞外蛋白分泌能力，是蛋白酶、谷氨酰胺酶、淀粉酶、β -糖苷酶等一些主要酶制剂的理 想生产菌株，同时也具有广谱抗菌活性和较强的抗逆能力，且稳定性较好，生长快，很适合 作为生防菌大量生产和应用。 谷氨酰胺酶（EC 3. 5. 1 . 2)是催化谷氨酰胺水解生成谷氨酸和氨的一种酶。而 谷氨酸是食品中重要的鲜味增强氨基酸，且有广泛的应用，故谷氨酰胺酶具有十分重要的 作用。最近有研宄也发现由于谷氨酰胺酶可以结合，或者交替天冬酰胺酶，所以在癌症治疗 上有很重要的作用，特别是急性的淋巴细胞白血病。 本专利技术保存的这株解淀粉芽孢杆菌SWJS22是从深海海泥中筛选出来的，具有耐 低温、高盐、高压的环境的特点，具有陆生微生物所不具备的特性。探宄发现该菌能产谷氨 酰胺酶，且安全性较高，具有较大的商业利用价值，并探讨了其发酵性能和条件以及该酶的 特性。
技术实现思路
本专利技术目的是提供了。 本专利技术的可生产谷氨酰胺酶的深海菌株，为解淀粉芽孢杆菌 该菌于2013年11月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研 宄所，保藏编号为CGMCC No. 8425。 本专利技术对保藏号为CGMCC No. 8425的菌株进行形态学及生理生化鉴定，有以下特 征：（1)菌落形态：白色，形状不规则，表面有颗粒感，乳头状凸起，不透明，边缘呈波状；（2) 细胞形态：直杆状，链状排列，周生鞭毛，革兰氏阳性；（3)生理生化特征：可在4-40°C环境 中生长，好氧，能耐受25% (wt)氯化钠，能水解明胶、淀粉、酪素、柠檬酸盐，能利用硫酸铵、 硝酸铵，可利用果糖、葡萄糖、甘露醇、木糖为碳源，吲哚反应、V. P.反应、甲基红试验、接触 酶和氧化酶试验为阳性，能产过氧化氢酶，不产硫化氢。 保藏号为CGMCC No. 8425菌株经16S rDNA鉴定，测得基因片段长度为1449bp， 具体基因序列见序列表1。将获得的基因序列输入Genbank，应用Blast程序将获得 的基因序列与数据库中基因序列进行对比。结果显示与解淀粉芽孢杆菌 的16S rDNA序列同源性为99%。将此结果结合菌株形态学及生理生 化鉴定特征，确定该菌为解淀粉芽孢杆菌TifeciJrJrW1S 保藏号为CGMCC No. 8425菌株通过单因素试验对其液体发酵产蛋白酶条件进行 了优化。 本专利技术公开了解淀粉芽孢杆菌产谷氨酰 胺酶的条件，其培养、发酵条件简单，遗传性质稳定。由于该菌株来源于深海，所分泌的谷氨 酰胺酶具有特殊的性质，并且关于该菌株的文献报道以及谷氨酰胺酶的文献均不多，因此， 对开发新型深海菌株及酶制剂的研宄中，具有重要意义。【附图说明】 图1为不同碳源对解淀粉芽孢杆菌发酵 产谷氨酰胺酶活力的影响对比图。【具体实施方式】 以下结合实例对本专利技术的实施作进一步说明，但本专利技术的实施和包含不限于此， 需指出的是，以下若有为特别详细说明之处，均是本领域技术人员可参照现有技术实现的。 富集及种子培养基:胰蛋白胨10g，酵母膏5g，鹿糖10g，硫酸铁0. lg，硫酸猛 〇· 〇〇lg，硫酸铜 〇· 〇〇lg，去离子水 1L，ρΗ7· 0。 酪蛋白培养基：酪蛋白l〇g，牛肉浸粉3g，氯化钠5g，磷酸氢二钾2g，琼脂15g，去 离子水 1L，ρΗ7· 3-7. 5。 发酵培养基：显柏18. 8g，面粉4. 7g，去呙子水16. 5g。 解淀粉芽孢杆菌CGMCC No. 8425固体发酵产谷氨酰胺酶的原料筛选 固体发酵培养基的原料筛选：将活化好的对数生长期的种子液，以2%的接种量，接到 固体发酵也里面，于37°C下恒温发酵48h，结束发酵后，测其谷氨酰胺酶酶活。 采用121°c下干蒸5min的豆柏，做主要氮源；对碳源进行筛选，选用面粉，小麦粉， 麦麸，玉米淀粉，花生粉；豆柏：筛选的碳源：去离子水以质量比4:1:3. 5混合，做为固体培 养基发酵，结果如图1所示。 编号CGMCC No. 8425菌株的遗传稳定性 表1为不同发酵温度对解淀粉芽孢杆菌发酵 产谷氨酰胺酶活力的遗传稳定性。 表 1【主权项】1?株解淀粉芽抱杆菌（你湖?j7c?7i识A9/^i<9/?6〇SWJS22,该菌于2013年11月I 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 8425。2.权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌（在发酵生 产谷氨酰胺酶中的应用。【专利摘要】本专利技术公开了。该解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22于2013年11月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.8425。本专利技术筛选了淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22产谷氨酰胺酶的原料，其培养、发酵条件简单，遗传性质稳定。CGMCC No.842520131101【IPC分类】C12N1-20, C12N9-80, C12R1-07【公开号】CN104877931【申请号】CN201510222162【专利技术人】崔春, 周池虹伶, 赵谋明, 赵强忠 【申请人】华南理工大学【公开日】2015年9月2日【申请日】2015年5月3日本文档来自技高网...
【技术保护点】
株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SWJS22，该菌于2013年11月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 8425。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：崔春，周池虹伶，赵谋明，赵强忠，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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