一株可同时降解多种邻苯二甲酸酯的壤霉菌(Agromyces sp．)MT‑E制造技术

本发明专利技术属于环境污染物生物处理技术领域，具体公开了一株可同时降解多种邻苯二甲酸酯的壤霉菌(

【技术实现步骤摘要】
一株可同时降解多种邻苯二甲酸酯的壤霉菌(Agromycessp．)MT-E
本专利技术涉及环境污染物生物处理
，具体地，涉及一株新型邻苯二甲酸酯降解菌，更具体地，涉及一株可同时降解多种邻苯二甲酸酯的壤霉菌(Agromycessp.)MT-E。
技术介绍
邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAEs，是邻苯二甲酸形成的酯的统称。其中，邻苯二甲酸二丁酯（di-n-butylphthalate，DBP）和邻苯二甲酸二异辛酯（di-(2-ethylhexyl)phthalate，DEHP）是两种最广泛使用的塑料增塑剂，在PVC塑料中其含量可达40~60%。近几十年来，我国塑料大棚和农膜使用量急剧增加。随着塑料薄膜的大量使用，越来越多的DBP和DEHP被释放进入农田土壤，它们已成为在农田土壤中最常被检出的有机污染物，检测级别达到mg/kg。研究表明，这两种邻苯二甲酸酯具有高毒性，致畸性、致癌性和致突变性，以及生殖毒性，已被美国环境保护局（EPA）列为优先控制污染物。因此，我国农业土壤中的DBP和DEHP污染问题亟待解决。由于这两种邻苯二甲酸酯的化学稳定性很好，自然条件下通过光解、水解等化学作用消失的速率非常缓慢，其半衰期长达20年之久，绝大部分的DBP和DEHP主要是通过生物降解途径从环境中消失。其中微生物降解具有成本低，条件温和，不产生二次污染等优点，符合构建环境友好型及资源节约型社会的要求与发展趋势。因此，利用微生物的降解作用将DBP和DEHP转化为无害物质是去除环境中邻苯二甲酸酯污染的最佳手段。目前，国内外学者已分别针对DBP和DEHP筛选出许多具有良好降解性能的菌株，但其中能够同时降解这两种邻苯二甲酸酯的菌株很少。壤霉菌（Agromycessp.）是土壤中广泛存在的一类菌属，目前有报道该菌属的某些菌种具有可高效降解苯酚、农药噻虫嗪及耐重金属的特性，但尚未见其可降解邻苯二甲酸酯的报道。
技术实现思路
本专利技术为了克服现有技术的上述不足，提供一株新型邻苯二甲酸酯降解菌。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：一株壤霉菌(Agromycessp.)菌株MT-E，所述菌株于2015年1月22日保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCCNO:M2015054，保藏地址为：中国武汉武汉大学，菌株分类命名为Agromycessp.MT-E。本专利技术所述壤霉菌(Agromycessp.)菌株MT-E是从常年使用塑料大棚的农田土壤中分离筛选获得的，该菌株可同时高效降解DBP和DEHP，因此本专利技术补充了邻苯二甲酸酯降解菌的种质资源，也为进一步研发PAEs污染的农田土壤的生物修复技术提供了科学依据，具有广泛的应用潜力。壤霉菌(Agromycessp.)菌株MT-E在牛肉膏蛋白胨培养基（LB）上划线培养7天，菌落呈暗黄色、扁平、湿润、边缘不平整、扩散生长，七天后几乎铺满平板。扫面电子显微镜下呈短杆状，长约0.8~1.5微米，宽约0.3~0.5微米。经生理生化检测，该菌为革兰氏阳性菌。另外，该菌株的最适生长条件为：温度30~35℃，pH为6.0~8.0。壤霉菌(Agromycessp.)菌株MT-E的16SrDNA基因序列如SEQIDNO:1所示，通过NCBI官方网站（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）的BLAST程序与其他已登录细菌菌株16SrDNA序列进行比对，结果表明该菌株与Agromycessp.相似性最高，同源率达99%。壤霉菌(Agromycessp.)菌株MT-E具有同时高效降解DBP和DEHP的能力。将制备好的MT-E菌种悬液接种于均含有200mg/L的DBP和DEHP的MSM培养基三角瓶中，该菌以DBP和DEHP作为唯一碳源生长，并对其具有高效的降解率。在第1，3，5，7天对DBP的降解率分别为8.40%，40.64%，89.30%，97.06%；对DEHP的降解率分别为5.31%，30.92%，73.12%，86.25%。可见，该菌株对两种邻苯二甲酸酯均具有良好的降解效果。将该菌株接种于DBP和DEHP污染的土壤中，30℃避光静置培养10天后，与未接菌的对照相比，该菌株显著降低了土壤中DBP和DEHP的含量。在第10天对DBP和DEHP的降解率分别为77.29%和55.51%。而对照组DBP和DEHP的自然降解率分别为9.37%和7.87%。说明该菌株在DBP和DEHP污染的土壤修复中具有极大的应用潜力。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一株可同时高效降解DBP和DEHP的新菌株—壤霉菌(Agromycessp.)MT-E，丰富了邻苯二甲酸酯降解菌的种质资源库，而且该菌株在土壤中分布广泛，易于培养，适应能力强；另外通过土壤修复实验说明了该菌实际污染土壤的生物处理中将有巨大的应用前景。附图说明图1为MT-E菌株在LB培养基上培养7天的生长形态特征。图2为MT-E菌株的扫描电镜照片。图3为MT-E菌株的16SrDNA的系统发育树。图4为MT-E菌株对DBP和DEHP的降解动力学及生长曲线。图5为MT-E菌株对污染土壤中DBP和DEHP的降解效果。具体实施方式下面结合说明书附图和具体实施例来进一步详细阐述本专利技术。本专利技术以下实施例为本专利技术较佳的实施方式，本专利技术主要阐述所述菌株以及基于所述菌株的应用思想，实施方式中简单参数的替换不能一一在实施例中赘述，但并不因此限制本专利技术的保护范围，其他任何未背离本专利技术的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，应被视为等效的置换方式，包含在本专利技术的保护范围之内。实施例中所述培养基配方如下：无机盐培养液（MSM，g/L）：K2HPO4：5.8，KH2PO4：4.5，(NH4)2SO4：2.0，MgCl2：0.16，CaCl2：0.02，Na2MoO4·2H2O：0.0024，FeCl3：0.0018，MnCl2·2H2O：0.0015。最终pH为7.5。牛肉膏蛋白胨培养基（LB）：酵母粉5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠10.0g，加超纯水至1L，调节pH=7.0；121℃灭菌20min。固体平板则添加1.5%（w/v）琼脂粉。实施例1菌株的分离与鉴定采集常年使用塑料大棚的农田土壤，称取5g新鲜土壤样品于含有50mL无菌水的150mL三角瓶中，在30℃，150rpm培养3天后取5mL污泥悬液加入含有100mLDBP和DEHP（分别为50mg/L）的MSM培养基中。经30℃，150rpm培养7天后，每次按1mL的接种量连续富集、转接10次，并相应提高培养基中PAEs含量至1000mg/L。然后将驯化10次的培养液稀释103~105涂布于LB固体平板上，30℃倒置培养1~3天。待平板上长出单菌落后，挑取单菌落多次划线纯化，分离获得一株细菌，编号MT-E。然后将菌株接种于LB固体平板上30℃倒置培养7天，观察其菌落形态（见图1）。由图1可知，菌落呈暗黄色、扁平、湿润、边缘不平整、扩散生长，七天后几乎铺满平板。扫描电镜观察鉴定：将纯化后的菌株MT-E接入含有10mL的LB液体培养基过夜活化。吸取800μL菌液经8000rpm离心3~5min，去上清液，加入500μLPBS溶液洗菌3次。在收获的菌体沉淀中加入1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株壤霉菌(Agromycessp.)菌株MT‑E，所述菌株于2015年1月22日保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：M 2015054。

【技术特征摘要】
1.一株壤霉菌(Agromycessp.)菌株MT-E，所述菌株于2015年1月22...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫测辉，赵海明，李彦文，蔡全英，李慧，杜欢，林静，冯乃宪，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44