食碱戈登氏菌YC-RL2及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种能够降解多种邻苯二甲酸酯类物质的食碱戈登氏菌(Gardenia alkanivorans)YC-RL2，其保藏编号为CGMCC No.10992。该菌能够在5天内将无机盐培养基中含有的100mg/L邻苯二甲酸二(2-乙基已基)酯(DEHP)100％降解，同时还可以降解邻苯二甲酸二环己酯(DCHP)、邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二正丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)。本发明专利技术的食碱戈登氏菌株YC-RL2能够应用于邻苯二甲酸酯类污染物的降解，同时对于上述污染物导致的环境污染的生物修复处理具有良好的应用潜质，具有较好的经济价值和应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及微生物学及生物降解领域，具体地说，设及食碱戈登氏菌YC-化2及其 应用。
技术介绍
邻苯二甲酸醋（PhthalateAcidEsters,简称PAEs)是一类重要的工业原料，被 广泛用于塑料、农药、化妆品、油漆、橡胶等行业，它具有致癌致崎致突变和生殖发育毒性等 多种毒性，可通过多种途径进入环境，由此引起的环境问题得到世界的普遍关注。由于人 类对邻苯二甲酸醋的大量使用，使它们通过不同的途径进入大气、±壤、水环境，对生物圈 造成了不同程度的污染。PAEs与我们的日常生活密切相关，可W通过呼吸、饮食、饮水和皮 肤接触进入人体，对人体的健康产生不同程度的危害。常见的有邻苯二甲酸二（2-乙基已 基）醋值EHP)、邻苯二甲酸二环己醋值CHP)、邻苯二甲酸二甲醋值MP)、邻苯二甲酸二正 下醋值BP)、邻苯二甲酸二乙醋值EP)、邻苯二甲酸二正辛醋值0巧和邻苯二甲酸下基节醋 度BP)。最近研究指出PAEs具有环境激素的作用，它能干扰生物和人类的内分泌系统，引起 精子数量减少、精子形成中止、生殖能力下降、后代数量减少、子宫粘膜组织增生等。DEHP是 一种常见的PAEs,广泛用于食品包装材料、容器、医疗器械W及儿童玩具等领域，也是目前 世界上应用广泛和生产量大的人工合成的有机污染物之一。DEHP为无色透明油状液体，具 有较高的流动性、低水溶性W及低挥发性，其水解反应很慢。DEHP能够对机体造成生殖毒 性、发育毒性、神经毒性、多器官癌变等多种损伤。[000引PAEs在环境中可通过非生物和生物两种途径进行降解，前者包括光解和水解，后 者主要是微生物降解，大多数情况下前者降解速率远低于后者，因此微生物降解是PAEs在 自然环境中的主要降解途径。目前，国内外的研究主要集中在从活性污泥中筛选高效降解 菌株对单一种类PAEs的生物降解。 有关食碱戈登氏菌的报道相对较少，已知的戈登氏菌属在自然生态系统分布广 泛，如±壤、水、河口泥沙等，在人类活动系统中，包括产油水井、污水污泥W及临床病例中 都有存在。食碱戈登氏菌是从受污染±壤中首次分离得到的，根据其代谢底物的特点可被 应用到有机污染物的生物降解和被污染环境的生物修复。 阳〇化]近年来，研究人员对污染物的生物降解进行了广泛细致的研究，并取得了许多成 果。然而，微生物在工业废水中污染物的生物降解研究相对较少，主要是工业废水恶劣的条 件所制约，如高盐度、极端抑、溶氧量低等。因此，提供一种在高盐浓度、高抑、溫度范围广 泛条件下对多种邻苯二甲酸醋类物质具有降解能力的菌株对于治理环境污染具有重要的 经济价值和现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株降解底物谱广的食碱戈登氏菌YC-化2及其应用。 为了实现本专利技术目的，本专利技术从山东省荷泽市东明县油田附近±壤中分离到一株 能够降解多种邻苯二甲酸醋的细菌。该菌可将无机盐离子培养基中各lOOmg/L的邻苯二甲 酸二（2-乙基已基）醋值邸巧、邻苯二甲酸二环己醋值CHP)、邻苯二甲酸二甲醋值MP)、邻 苯二甲酸二正下醋值BP)、邻苯二甲酸二乙醋值EP)降解，对菌株进行连续转接测定降解能 力，表明该菌降解能力稳定。在电镜下观察（图1)，该菌为短杆状，无鞭毛，无芽抱。菌落呈 圆形，边缘光滑，表面突起，产生红色素（图2)。菌株革兰氏染色、过氧化氨酶活性及脈酶反 应均为阳性；氧化酶活性和吗I噪反应为阴性。基于形态特征及生理生化特征，将该菌株鉴定 为食碱戈登氏菌（Gardeniaa化anivorans)，命名为YC-I?L2。该菌株于2015年6月19日保 藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北 辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCCNo. 10992。 本专利技术还提供含有所述食碱戈登氏菌YC-化2的菌剂。 本专利技术还提供由所述食碱戈登氏菌YC-化2或所述菌剂制备的生物清洁剂。 本专利技术还提供所述食碱戈登氏菌YC-化2、所述菌剂或所述生物清洁剂在有机污染 物生物降解中的应用。 其中，所述有机污染物为邻苯二甲酸醋类物质。所述邻苯二甲酸醋类物质包括邻 苯二甲酸二（2-乙基已基）醋、邻苯二甲酸二环己醋、邻苯二甲酸二甲醋、邻苯二甲酸二乙 醋、邻苯二甲酸二下醋等。 本专利技术还提供所述食碱戈登氏菌YC-化2、所述菌剂或所述生物清洁剂在有机污染 物生物降解中的应用。 本专利技术还提供所述食碱戈登氏菌YC-化2、所述菌剂或所述生物清洁剂在邻苯二甲 酸醋类环境污染的生物修复中的应用。 所述邻苯二甲酸醋类包括但不限于邻苯二甲酸二（2-乙基已基）醋、邻苯二甲酸 二环己醋、邻苯二甲酸二甲醋、邻苯二甲酸二乙醋、邻苯二甲酸二下醋。 本专利技术进一步提供所述食碱戈登氏菌YC-化2在制备邻苯二甲酸醋类物质的生物 降解剂中的应用。 本专利技术的食碱戈登氏菌YC-化2能够在5天内100 %降解无机盐培养基中含有的浓 度为lOOmg/L的DEHP，并能够降解DCHP、DMP、DEP和DBP。YC-化2对上述底物具有较高的 浓度耐受，在浓度为400-1000mg/L时，5天内降解率均在60%W上。 另外，本专利技术的食碱戈登氏菌YC-化2对环境溫度具有较宽范围的耐受能力，在 10-40°C之间都能高效降解DCHP、DMP、DEP和DBP;对环境盐离子浓度也具有较高的耐受能 力，在化C1浓度为0-10 %时，可生长并降解上述底物，5天内对上述底物（各lOOmg/L)的 降解率均大于50%;同时，对碱性环境也具有较强的耐受能力，可耐受的抑范围为抑6-11， 5天内对上述底物（各lOOmg/L)的降解率均大于50%。 本专利技术提供的食碱戈登氏菌YC-化2及其菌剂在使用过程中无污染，无公害，能够 应用于多种邻苯二甲酸醋类环境污染的生物修复及具有较高盐浓度、高抑生产废水的处 理，可在较低和较高溫度下进行生物修复，可广泛应用于环境±壤清洁领域及工业废水的 清洁处理，具有较好的经济价值和应用前景。【附图说明】 图1为本专利技术食碱戈登氏菌YC-化2在电镜下的形态结构图。 图2为本专利技术食碱戈登氏菌YC-化2在LB固体培养基上的菌落形态。 图3为本专利技术食碱戈登氏菌YC-化2的系统发育树。 图4为本专利技术实施例2中HPLC法检测食碱戈登氏菌YC-化2对浓度分别为lOOmg/ L的DEHP、DCHP、DBP、DMP和DEP的降解能力。 图5为本专利技术实施例2中DEHP、DCHP、DBP、DMP和DEP浓度与315nm处吸收峰面 积关系标准曲线图。 图6为本专利技术实施例2中食碱戈登氏菌YC-化2对不同浓度底物的降解率。 图7为本专利技术实施例2中食碱戈登氏菌YC-化2在不同溫度条件下对各底物的降 解率。 图8为本专利技术实施例2中食碱戈登氏菌YC-化2在不同抑条件下对各底物的降解 率。 图9为本专利技术实施例2中食碱戈登氏菌YC-化2在不同盐浓度条件下对各底物的 降解率。【具体实施方式】W下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例 中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。本申请使用的无机盐培养基组成如下：1.Og/LNH4NO3,0. 5g/L化C1，0. 5g/ L(NH4)2S04本文档来自技高网...

【技术保护点】
食碱戈登氏菌(Gardenia alkanivorans)YC‑RL2，其保藏编号为CGMCC No.10992。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：闫艳春，任磊，贾阳，乔铖，
申请(专利权)人：中国农业科学院研究生院，
类型：发明
国别省市：北京;11